【推荐1】研究发现，TRIM59基因在肝癌细胞中存在异常表达，可用于原发性肝癌的早期诊断。TRIM59蛋白含有R、B、C和TM四个功能区，如图1所示；科研人员采用一定的技术手段，获得了TRIM59基因的cDNA，分别构建TRIM59基因过表达及TRIM59基因敲除质粒，分别转染肝癌细胞株后，过表达及敲减细胞株的增殖情况如图2所示。

图1   TRIM59蛋白质功能区                 图2   TRIM59对肝癌细胞增殖能力的影响

(1)图2的实验结果表明____。
(2)科研人员通过PCR扩增了图1中4种不同长度的蛋白质功能区组合片段所对应的TRIM59基因片段，并插入下图3所示的带FLAG标签序列（27bp）的载体中，与FLAG标签序列形成融合基因。FLAG是一种短肽，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响TRIM59蛋白功能区的功能。

图3

PCR扩增4种不同长度TRIM59基因片段需要的引物有____种；为了使目的基因正确插入，除∆R对应的TRIM59基因片段以外，在目的基因上游引物的5'端应插入____（“BamHI”或“EcoRI”）的识别序列，理由是____；可利用PCR技术验证融合基因是否构建成功，其实验思路是____。
(3)体外实验发现TRIM59蛋白和PPM1B蛋白有结合现象。为了研究两蛋白在细胞内是否结合，科研人员分别将FLAG-TRIM59（FL）质粒、FLAG-TRIM59（R+B）质粒、FLAG-TRIM59（R）质粒、FLAG-TRIM59（∆R）质粒与带有GFP标签的GFP-PPM1B质粒共同转染受体细胞，以单独转染GFP-PPM1B质粒的受体细胞作为对照。分别利用FLAG抗体和GFP抗体对①至⑤实验细胞裂解液中的蛋白质进行检测，结果如图4中胶片一、二所示。再利用GFP抗体对上述FLAG抗体免疫沉淀中的蛋白质进行检测，结果如胶片三所示。

图4

图中实验结果说明____。
(4)研究发现TRIM59蛋白的R功能区具有泛素化连接酶的活性，可介导泛素化途径降解PPM1B蛋白，PPM1B能够使某种蛋白去磷酸化进而抑制癌细胞的增殖和转移，据此可推测肝癌患者中TRIM59蛋白和PPM1B蛋白的量呈____相关。

【推荐2】菜油甾醇是固醇类药物，化学合成时步骤复杂且易造成环境污染。因此，科研人员构建高产菜油甾醇的酵母菌株，使用生物做化法满足药物生产需要。
（1）酵母菌为_________（填“原核”或“真核”）单细胞生物，具有天然甾醇合成途径，细胞内的E酶催化成其他种类固醇，而不生成菜油甾醇。
（2）为提高菜油甾醇的产量，需要改造酵母菌，将醇母菌的E酶基因敲除，导入催化合成菜油甾醇的D酶基因，步骤如图1。

第1步：科研人员利用_________技术大量扩增D酶基因。
第2步：将扩增的D酶基因与质粒进行重组，需要用到同种_______酶和________酶
第3步：重组质粒上除启动子和终止子外，还需要有标记基因，标记基因的作用是__________
第4步：据图1分析，重组质粒导入酵母菌细胞后，酵母菌DNA与重组质粒之间经过__________，从而将D酶基因整合到酵母菌DNA上。
（3）科研人员利用5 L发酵罐中进行菌株的发酵培养，严格控制发酵条件，发酵原料和产物变化如图2所示。

①葡萄糖和半乳糖均为酵母菌的有机碳源。为保证发酵过程持续高产，科研人员采用的填料措施是：先添加葡萄糖，然后再__________。
②研究发现，半乳糖可以诱导酵母细胞中菜油甾醇前体物质的高表达，葡萄糖对该过程有抑制作用。科研人员先添加葡萄糖的目的是：__________。

【推荐1】荧光素酶（Luc蛋白）由550个氨基酸组成，分为N端和C端2个功能片段，即NLuc蛋白（2-416氨基酸）和CLuc蛋白（398—550氨基酸），两部分不能自动重组并发挥作用；将目标蛋白OsBIK1蛋白和OsXLG2蛋白分别与NLuc蛋白和CLuc蛋白融合，若2个目标蛋白相互作用，则NLuc蛋白和CLuc蛋白能成功组装为荧光素酶并分解荧光素发出荧光。科研人员构建了可表达OsBIK1-HA-NLuc融合蛋白的表达载体1和可表达CLuc-OsXLG2融合蛋白的表达载体2并进行了检测，如图1所示，图中HA为标签蛋白（用于目的蛋白的检测、示踪等）的编码序列。
   
(1)质粒载体有一至多个____________，供外源DNA片段插入其中；已知表达载体1和2上均含有卡那霉素抗性基因，目的是____________；烟草是双子叶植物，将重组质粒导入烟草叶片常用的方法是农杆菌转化法，侵染烟草叶片细胞后的农杆菌在转化过程中表现出的特点是_____________。
(2)构建重组质粒1时，需要把OsBIK1基因的对应终止密码子的3个碱基去除，原因是_____________；图中HA编码序列插入到OsBIK1基因编码链的________（填“5’端”或“3’端”），编码链为转录时所用模板链的互补链。
(3)如果用抗Luc蛋白抗体分别检测表达载体1和2融合蛋白表达情况，结果如图2所示，可优先选用抗________蛋白抗体进一步区分条带1为_________融合蛋白。
(4)将分别含有表达载体1和2的农杆菌菌液共同注射到含有荧光素的烟草叶片后可检测到荧光，说明____________。

【推荐2】快速无缝克隆区别于传统PCR产物克隆，只需在室温条件（25℃）下反应15分钟，就能将任何PCR产物片段克隆到线性化质粒上，过程如图所示。准备载体可在限制酶的切割下转变成线性化质粒，Fast-Fusion酶能识别目的基因片段5′→3′末端任意16个碱基并进行切割。回答下列问题：
   
(1)准备载体的基本组成单位是______。
(2)构建线性化质粒时，选择EcoRI、BamHI两种限制酶切割质粒的优点是______。并防止质粒的自身环化；若用单酶切的方法切割质粒和目的基因，也可以构建重组质粒，但在单酶切之后，常需要对质粒进行去磷酸化，该操作的目的是________________________。
(3)目的基因PCR过程中，选择和设计引物1和引物2的依据是____________，引物1和引物2的碱基数和C+G碱基的比例基本相同可以保证______基本相同。引物1与目的基因的模板链结合后，在3′端不断添加核苷酸的子链合成过程发生在PCR的______阶段。
(4)图中目的基因的黏性末端由______切割产生，图中线性化质粒与目的基因混合并发生反应的容器M（也是PCR过程使用的容器）的名称是______。

【推荐1】2022年12月我国出现新冠病毒第一波感染高峰，人体感染后普遍出现发热、乏力、咽痛、咳嗽等症状，甚至出现呼吸困难、心率失常等。请回答有关问题：
(1)人体感染新冠初期，体温逐渐上升。在小于38.5℃时通常采用温水、酒精擦浴等物理降温措施，主要利用的散热途径是___。此时，人体某些免疫细胞被激活，不仅攻击病毒，同时释放大量的炎性细胞因子，造成发热，该过程发生于人体的第___道防线。若持续高热，则需要服用布洛芬等退烧药以保护其它脏器。
(2)正常人的心率由交感神经和副交感神经双重支配，其控制中枢位于___。副交感神经释放乙酰胆碱作用于心肌细胞膜上的M型受体，使心肌细胞膜的静息电位绝对值___，从而___（增强/抑制）其收缩力。为研究阿托品和美托洛尔对心率失常的治疗作用，某科研组对三组健康志愿者分别注射等量的生理盐水、阿托品和美托洛尔各3次，测得的平均心率如下表，实验结论是___。
阿托品和美托洛尔对心率的影响记录表

组别	对照组	阿托品组	美托洛尔组
第1次平均心率	60	-90	51
第2次平均心率	60	102	43
第3次平均心率	60	115	38

(3)已经上市的常见新冠疫苗有3类：灭活病毒制成的灭活疫苗、基因工程技术生产的重组蛋白疫苗和病毒的S蛋白基因与腺病毒载体重组形成的腺病毒载体疫苗。不同疫苗的制备技术不同，在制备腺病毒载体疫苗时，获取病毒体内的S蛋白基因后要先进行___，得到的产物才能与载体重组。不同疫苗的接种效果也不同，如重组蛋白疫苗___（能/不能）激活细胞毒性T淋巴细胞。有专家指出，新冠病毒有很强的变异性，采用序贯混合接种比采用单一疫苗接种的效果更好，以下理由合理的有哪几项?___。（A.不同疫苗可以发挥优势互补，既激发了细胞免疫又激发了体液免疫B.不同技术制备的疫苗能增加抗体的数量和种类C.单一疫苗多次接种可能会使其副作用加剧D.不同技术制备的疫苗能起到免疫预防和免疫治疗的作用）。

【推荐2】癌细胞具有自身的抗原性，人体的特异性免疫系统能识别并去除癌细胞。人乳头瘤病毒（HPV）可将自身DNA整合到人体特定细胞，引发癌变并形成肿瘤。为了研究同一HPV引发的肿瘤是否具有相同的抗原性，科学小组展开了研究。回答下列问题：
材料和药剂：遗传背景完全相同成年雄性小鼠若干只，HPV病毒株
实验思路：
取小鼠若干只 ，随机均分为甲、乙、丙三组
分组和处理如下：
甲组：小鼠+HPV+正常饮食
乙组：小鼠+HPV+正常饮食
丙组：小鼠+                 
适宜环境下饲养一段时间后，去除甲组和乙组的肿瘤（体外培养肿瘤细胞）后进一步处理如下：
组①：部分甲组小鼠+来自甲的肿瘤细胞
组②：部分乙组小鼠+                 
观察癌细胞在小鼠体内形成肿瘤的情况
回答下列问题：
(1)丙组小鼠的处理是________，其作用是_________________。组②的处理是__________________________。
(2)组①的实验结果是小鼠体内的肿瘤情况远低于未取肿瘤的其他甲组小鼠，原因是甲组小鼠体内含有_______细胞，同种癌细胞再次进入后，该细胞能迅速增殖和_____，发挥免疫效应。效应阶段，最终发挥免疫作用的细胞，通过特异性识别___________寻找靶细胞。若HPV引发的癌细胞具有相同的抗原性，则组②的实验结果是__________。为了让实验更完善，还需要做进一步研究。
(3)HPV引发的肿瘤具有相同的抗原性可能与病毒DNA的整合与表达有关。HPV将自身遗传物质整合到细胞中引发细胞发生_____（填“基因突变”“基因重组”或“染色体畸变”）。HPV的中心法则类似于下列哪一种病毒_____ (A.HIV   B.劳氏肉瘤病毒 C.烟草花叶病毒 D. 噬菌体)
(4)国家药品监督管理局已经批准预防宫颈癌的九价HPV疫苗上市。九价HPV疫苗采用三剂免疫程序，目的是可以使机体产生___________，以对机体提供长期保护。