图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图,载体质粒P0具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题:
(1)EcoRV酶切位点为,EcoR V酶切出来的线性载体P1为___________ 末端。
(2)用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段,其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理,在两端各添加了一个碱基为___________ 的脱氧核苷酸,形成P2;P2和目的基因片段在__________ 酶作用下,形成重组质粒P3。
(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“﹣”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是__________ (填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是_____ 、________________ 。
(4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置,PCR鉴定时应选择的一对引物是__________ 。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段,原因是_______________ 。
(1)EcoRV酶切位点为,EcoR V酶切出来的线性载体P1为
(2)用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段,其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理,在两端各添加了一个碱基为
(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“﹣”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是
(4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置,PCR鉴定时应选择的一对引物是
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更新时间:2019-06-10 18:50:24
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【推荐1】【生物——选修3:现代生物科技专题】MagaininmⅡ是非洲爪蟾皮肤分泌的一种抗菌肽,能对细菌、真菌、肿瘤细胞等产生明显的抑制效果。科学工作者通过基因工程技术获得能表达该种抗菌肽的大肠杆菌。请回答下列问题:
(1)和抗体相比,抗菌肽的抗菌作用具有________________ 特点。
(2)依据抗菌肽氨基酸序列人工设计合成的 MagaininmⅡ基因能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽,其原因是_______________ 。
(3)可用PCR技术对人工合成的 MagaininmⅡ基因进行扩增。请完成下表,比较细胞内DNA复制和PCR扩增DNA的异同:
(4)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点,则导入重组质粒的受体菌在含氨苄青霉素的培养基上能增殖,同时在____________ 。
目的基因在受体菌中表达,还需要在目的基因首端具有________________ 。
(1)和抗体相比,抗菌肽的抗菌作用具有
(2)依据抗菌肽氨基酸序列人工设计合成的 MagaininmⅡ基因能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽,其原因是
(3)可用PCR技术对人工合成的 MagaininmⅡ基因进行扩增。请完成下表,比较细胞内DNA复制和PCR扩增DNA的异同:
DNA复制 | PCR扩增DNA技术 | |
1 | 解旋酶解旋 | ① |
2 | DNA聚合酶 | ② |
3 | 边解旋边复制 | 先解旋后复制 |
4 | 半保留复制 | 半保留复制 |
(4)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点,则导入重组质粒的受体菌在含氨苄青霉素的培养基上能增殖,同时在
目的基因在受体菌中表达,还需要在目的基因首端具有
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【推荐2】研究发现,利用抗体抑制肿瘤细胞表面的CD47蛋白的活性,可促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。为制备抗CD47抗体,研究人员先利用基因工程方式制备CD47蛋白,图为含CD47基因的外源DNA、质粒DNA的有关信息, EcoRI、BamHI、SalI、XhoI 均为限制酶,Kanr、Tcr 分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。
(1)为了形成合适的重组质粒,应该选用限制酶________ 切割外源DNA和质粒DNA。
A.EcoRI和XhoI B.BamHI和XhoI
C.EcoRI和SalI D.BamHI和SalI
(2)重组质粒导入大肠杆菌的成功率很低,需经筛选才能获得导入成功的大肠杆菌,以下菌种为所需菌种的是________ 。
A.能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
B.能在含四环素的培养基上生长的菌种
C.能在含卡那霉素的培养基上生长、而不能在含四环素的培养基上生长的菌种
D.能在含四环素的培养基上生长、而不能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
下图为制备抗CD47单克隆抗体的过程示意图,A、B、C 表示细胞,①、②表示过程。
(3)给小鼠注射的抗原物质是________________ ,该物质被小鼠的免疫细胞识别,引起下列四项中的________ 过程,形成细胞A。
A.天然免疫 B.非特异性免疫 C.细胞免疫 D.体液免疫
(4)过程①表示________________ 过程,形成的细胞C称为________________ 。过程②表示用________________ 技术获得大量细胞。共同培养巨噬细胞和癌细胞,加入不同浓度的抗CD47抗体,测定巨噬细胞吞噬癌细胞的吞噬系数,得到了如图所示的结果。
(5)结合图及题干信息分析,以下描述正确的是________ 。
A.癌细胞表面的CD47蛋白能影响巨噬细胞吞噬癌细胞
B.较高浓度的抗CD47抗体有利于巨噬细胞吞噬癌细胞
C.使用抗CD47抗体治疗癌症需要严格控制抗体的浓度
D.抗CD47抗体能有效抑制癌细胞的增殖达到治疗目的
(1)为了形成合适的重组质粒,应该选用限制酶
A.EcoRI和XhoI B.BamHI和XhoI
C.EcoRI和SalI D.BamHI和SalI
(2)重组质粒导入大肠杆菌的成功率很低,需经筛选才能获得导入成功的大肠杆菌,以下菌种为所需菌种的是
A.能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
B.能在含四环素的培养基上生长的菌种
C.能在含卡那霉素的培养基上生长、而不能在含四环素的培养基上生长的菌种
D.能在含四环素的培养基上生长、而不能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
下图为制备抗CD47单克隆抗体的过程示意图,A、B、C 表示细胞,①、②表示过程。
(3)给小鼠注射的抗原物质是
A.天然免疫 B.非特异性免疫 C.细胞免疫 D.体液免疫
(4)过程①表示
(5)结合图及题干信息分析,以下描述正确的是
A.癌细胞表面的CD47蛋白能影响巨噬细胞吞噬癌细胞
B.较高浓度的抗CD47抗体有利于巨噬细胞吞噬癌细胞
C.使用抗CD47抗体治疗癌症需要严格控制抗体的浓度
D.抗CD47抗体能有效抑制癌细胞的增殖达到治疗目的
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【推荐3】白叶枯病是造成我国重要粮食作物——水稻严重减产的重要原因之一。某科研团队将白叶枯病抗性基因Xa21与质粒重组(图1),利用人工破损处理的水稻幼苗细胞借助根癌农杆菌转化法获得抗白叶枯病的水稻品种,其中根癌农杆菌侵染植物细胞过程如图2所示,已知不同种限制酶识别序列不同。请回答:
(1)构建图1基因表达载体时,使用BamHI、Hind III两种限制酶分别处理含Xa21基因的DNA片段和Ti质粒,可以避免处理后的白叶枯病抗性基因Xa21和Ti质粒_________ 。基因表达载体上M抗生素抗性基因的作用是_________ 。
(2)由图2可知,水稻幼苗细胞受损后会产生某些用于激活农杆菌表达某些基因并吸引农杆菌移向受损水稻幼苗细胞的信号分子。根据所学知识判断,这些信号分子可能是_________ 。农杆菌细胞内形成的成熟T复合体借助细胞膜上的_________ 定向进入水稻幼苗细胞,最终将含有白叶枯病抗性基因Xa21的T-DNA整合到水稻细胞染色体基因组上。分析图2可知,成熟T复合体所含的遗传物质是_______________ 。
(3)将含白叶枯病抗性基因Xa21的水稻幼苗细胞培养,经过_________ 等过程可发育成幼苗。经检测,科研人员发现部分获得Xa21基因的水稻幼苗不具有抗白叶枯病的能力,原因可能是______________ 。
(1)构建图1基因表达载体时,使用BamHI、Hind III两种限制酶分别处理含Xa21基因的DNA片段和Ti质粒,可以避免处理后的白叶枯病抗性基因Xa21和Ti质粒
(2)由图2可知,水稻幼苗细胞受损后会产生某些用于激活农杆菌表达某些基因并吸引农杆菌移向受损水稻幼苗细胞的信号分子。根据所学知识判断,这些信号分子可能是
(3)将含白叶枯病抗性基因Xa21的水稻幼苗细胞培养,经过
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【推荐1】人β-酪蛋白是人乳汁中的重要营养成分,科学家已培育出转基因山羊生产人β-酪蛋白,下图为培育流程,其中①~④为相关过程,请回答下列问题:
(1)人β-酪蛋白基因是____________ (从基因工程角度作答),它可从人细胞中直接提取或从人的____________ 中提取。
(2)过程①获得的A为__________________________________ ;将A导入受精卵常用的方法是________________ 法。
(3)过程③为____________ ,进行此操作的早期胚胎应处于________________ 阶段。
(4)代孕母羊对早期胚胎无____________ 反应是转基因山羊能在其子宫内存活并发育的基础。
(5)从分子水平可通过________________ 技术检测转基因山羊中是否成功表达出人β-酪蛋白。
(1)人β-酪蛋白基因是
(2)过程①获得的A为
(3)过程③为
(4)代孕母羊对早期胚胎无
(5)从分子水平可通过
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【推荐2】受精过程中,精子不仅能将自身的遗传信息传递给胚胎,还能将接触到的外来遗传信息进行传递,这种能力被称为精子介导的基因转移。精子载体法以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。这种方法一经问世就以其操作简便、成本低廉等优点而备受关注。下图表示用该方法制备转基因鼠的基本流程,回答下列问题:
(1)为了获得大量外源基因,常采用___ 方法快速扩增目的基因。扩增外源基因时引物与两条单链DNA结合时的温度一般要控制在___ 左右,延伸时游离的脱氧核苷酸连接在引物的___ 端。PCR的产物一般通过___ 来鉴定。
(2)为获得更多的卵细胞,进行过程②前常对供体母鼠用___ (激素)处理。③过程代表早期胚胎培养,若进行胚胎分割,应选择___ 的桑葚胚或囊胚。过程④前应对代孕母鼠进行___ 处理,一般___ (填“需要”或“不需要”)使用免疫抑制剂处理代孕母鼠,原因是___ 。
(3)与显微注射法相比,精子载体法对受精卵中核的影响更___ (填“大”或“小”)。
(1)为了获得大量外源基因,常采用
(2)为获得更多的卵细胞,进行过程②前常对供体母鼠用
(3)与显微注射法相比,精子载体法对受精卵中核的影响更
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【推荐3】对艾滋病病毒感染的治疗和有关的疫苗研究,经历了三个“时代”。
(一)早期,科学工作者从HIV感染自愈者体内采取相应免疫细胞,使之与骨髓瘤细胞结合,生产HIV的抗体,具体过程如图1:
(二)随后,转基因技术被运用到了HIV的疫苗研制工作中,科学工作者研制的第二代HIV疫苗的操作简要路径如图2:
(三)科学工作者发现一种蛋白质(D4-Ig),它能与HIV表面的糖蛋白结合,从而使HIV失去侵染T细胞的能力;腺相关病毒是杆状病毒,无激活复制基因,对人体相对安全。腺相关病毒其基因组中含有常用病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap,为安全起见,需要去除复制基因。目前,科学家利用其进行相关实验研究,相关信息如图3:
(1)上述过程中所选取的免疫细胞是______ 。过程①中诱导两种细胞融合的方法有______ (写出两种);过程②中得到杂交瘤细胞后还需要经过______ 过程,才能得到符合要求的杂交瘤细胞。体外培养杂交瘤细胞时需要提供适宜的气体环境,其中O2的作用是______ 。
(2)过程②用相同的限制酶处理含有目的基因的DNA片段和质粒,理由是_______ ;过程③采用的转化方法是________ 。
(3)用该方法从酵母菌中提取HIV表面的糖蛋白作为抗原,用该过程产生的疫苗进行接种,与上述图1的抗体注射方法相比,其关键的优势是_______ 。
(4)过程①需要对D4-lg蛋白进行______ ,才能人工合成D4-Ig基因。被两种病毒双重感染的T细胞解体释放的HIV病毒,相比入侵时的差异是_______ 。
(一)早期,科学工作者从HIV感染自愈者体内采取相应免疫细胞,使之与骨髓瘤细胞结合,生产HIV的抗体,具体过程如图1:
(二)随后,转基因技术被运用到了HIV的疫苗研制工作中,科学工作者研制的第二代HIV疫苗的操作简要路径如图2:
(三)科学工作者发现一种蛋白质(D4-Ig),它能与HIV表面的糖蛋白结合,从而使HIV失去侵染T细胞的能力;腺相关病毒是杆状病毒,无激活复制基因,对人体相对安全。腺相关病毒其基因组中含有常用病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap,为安全起见,需要去除复制基因。目前,科学家利用其进行相关实验研究,相关信息如图3:
(1)上述过程中所选取的免疫细胞是
(2)过程②用相同的限制酶处理含有目的基因的DNA片段和质粒,理由是
(3)用该方法从酵母菌中提取HIV表面的糖蛋白作为抗原,用该过程产生的疫苗进行接种,与上述图1的抗体注射方法相比,其关键的优势是
(4)过程①需要对D4-lg蛋白进行
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解题方法
【推荐1】科学家设想给人行道上的绿化树植入绿色荧光蛋白基因(G基因),这些转基因行道树能在夜晚发出绿色荧光,警示来往的行人和车辆,以减少交通事故。该设想利用的生物工程技术及操作流程如图所示。回答下列问题:
(1)运载体通常需要具备复制原点、启动子和终止子以及标记基因等结构,其中启动子位于基因的首端,是______ 的部位。该生物工程技术选择Ti质粒作为运载体的原因是____________ 。
(2)限制性内切核酸酶主要从原核生物中分离出来,但在原核细胞中限制酶一般不会切割自身的DNA分子,原因可能是____________ 。图中SmaⅠ、BamHⅠ和EcoRⅠ三种限制酶均能切割 Ti质粒和目的基因,则构建重组Ti质粒时最好选择______ 对Ti质粒和目的基因进行切割。
(3)将含G基因的重组Ti质粒导入细菌细胞中常用______ 法,只有成功导入了 Ti质粒的细菌才能在含______ 的培养中生长,再选择出含有重组Ti质粒的细菌,再利用______ 法可将其导入行道树的韧皮部细胞。
(4)含有目的基因的行道树韧皮部细胞培育成幼苗必须经过______ 两个重要生理过程,最终培育的转基因行道树是否符合预期目的,最简单的检测方案是____________ 。
(1)运载体通常需要具备复制原点、启动子和终止子以及标记基因等结构,其中启动子位于基因的首端,是
(2)限制性内切核酸酶主要从原核生物中分离出来,但在原核细胞中限制酶一般不会切割自身的DNA分子,原因可能是
(3)将含G基因的重组Ti质粒导入细菌细胞中常用
(4)含有目的基因的行道树韧皮部细胞培育成幼苗必须经过
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【推荐2】下图为转基因抗病香蕉的培育过程流程图,其中质粒上的PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶的识别序列及切割位点见表。请据图回答下列问题:
(1)图中质粒被限制酶EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ同时切割后可得到________ 个DNA片段,________ 个黏性末端。
(2)形成重组质粒A 时,应选用限制酶____________ ,对____________________ 进行切割。
(3)图中①②分别表示组织培养过程中香蕉组织细胞的____________________ 。该技术表明,当植物细胞处于__________ 状态时,在一定的营养物质、____________ 和其他外界条件的作用下,可表现出全能性,发育成完整植株。
(4)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,应使重组质粒A中含有____________ 。经过②后得到的丛芽或胚状体加上人工薄膜后就制成了____________ 。
(5)为了确定转基因抗病香蕉是否培育成功,可用____________ 方法从个体水平鉴定转基因抗病香蕉的抗病性。
(6)在转基因抗病香蕉培育过程中,受体细胞如果采用形成层组织细胞,与采用叶肉组织细胞相比较,其优点是____________________ 。
限制酶 | Apa l | EcoR I | Pst I | Sma I |
识别序列及切割位点 |
(1)图中质粒被限制酶EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ同时切割后可得到
(2)形成重组质粒A 时,应选用限制酶
(3)图中①②分别表示组织培养过程中香蕉组织细胞的
(4)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,应使重组质粒A中含有
(5)为了确定转基因抗病香蕉是否培育成功,可用
(6)在转基因抗病香蕉培育过程中,受体细胞如果采用形成层组织细胞,与采用叶肉组织细胞相比较,其优点是
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【推荐3】禽呼肠孤病毒(ARV)对养禽业的发展造成了巨大的威胁,研制疫苗防控禽呼肠孤病毒感染是既经济又有效的手段。近年来,我国的ARV基因工程疫苗的研制取得了较大进步,在该疫苗的研制过程中,σC蛋白基因成为候选基因。请回答下列问题:
(1)ARV是RNA病毒,为获得控制σC蛋白合成的DNA片段,可以利用病毒RNA为模板合成cDNA,这一过程需要的酶是_________ ,再通过_________ 技术扩增相应的DNA片段。
(2)为了确保能准确得到σC蛋白基因,在设计PCR引物时必须根据σC蛋白基因两端的_________ 来进行。PCR过程每次循环分为3步,依次是_________ 。
(3)活载体疫苗是最具发展空间的疫苗之一。科研人员通过基因工程构建了能表达σC蛋白基因的重组减毒沙门菌,构建的基本流程包括四个环节:获取σC蛋白基因;_________ ;将σC蛋白基因导入减毒沙门菌;_________ 。
(4)将重组减毒沙门菌注射到雏鸡体内,重组减毒沙门菌表达的σC蛋白作为_________ 引起机体产生特异性免疫。为保证疫苗接种安全和效果稳定,在应用时需考虑疫苗接种的_________ 。
(1)ARV是RNA病毒,为获得控制σC蛋白合成的DNA片段,可以利用病毒RNA为模板合成cDNA,这一过程需要的酶是
(2)为了确保能准确得到σC蛋白基因,在设计PCR引物时必须根据σC蛋白基因两端的
(3)活载体疫苗是最具发展空间的疫苗之一。科研人员通过基因工程构建了能表达σC蛋白基因的重组减毒沙门菌,构建的基本流程包括四个环节:获取σC蛋白基因;
(4)将重组减毒沙门菌注射到雏鸡体内,重组减毒沙门菌表达的σC蛋白作为
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