【推荐1】人流感病毒分为甲、乙、丙三种类型，是引发流行性感冒的病原体，其中甲型流感病毒易发生变异，多次引起世界性大流行。下图为流感病毒的结构示意图，在包膜外有两种类型的表面糖蛋白覆盖，一为血凝素即H，一为神经氨酸酶即N，H又分15个亚型，N分9个亚型，因此流感病毒可以进一步分为H₁N₁H₃N₂等多个亚型。请分析回答：

（1）依据流感病毒的表面糖蛋白，流感病毒（HxNy）可能存在______________种亚型。在流感病毒的蛋白质衣壳外具有一层包膜，这层包膜主要来源于宿主细胞膜，因此其主要成分是_____________。
（2）下列疾病，不是由病毒感染引起的是____________________
A.狂犬病B.艾滋病C.乙型肝炎D.破伤风
（3）研究流感病毒过程中，不能直接置于普通培养基中培养，其原因是________________
（4）预防流感比较有效的方法是接种流感疫苗。在生产流感病毒疫苗过程中，首先要获得编码病毒表面糖蛋白的基因，方法是先提取病毒的RNA，再将RNA通过______________合成DNA，要大量获得该基因，可采用______________________技术进行扩增。

【推荐3】下表是几种限制酶识别序列及切割位点，图乙为某质粒的示意图，图丙是一段含有目的基因的DNA片段。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTAG↑G	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	A↓AGCTT TTCGA↑A

(1)基因工程中 “分子缝合针”是指____________________。
(2)利用___________技术可以实现目的基因在体外大量扩增。
(3)基因工程中载体应具备的条件有：___________（答出两点即可）。
(4)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用___________________两种限制酶切割，含有重组质粒的大肠杆菌不能在含______________的培养基上生存。
(5)若要检测目的基因是否成功导入大肠杆菌，采用的检测方法是________。
(6)若用BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，对于该该连接部位，用这两种酶________（填“都能”“都不能”或“只有一种能”）切开。

【推荐1】科学家利用耐盐碱植物中的耐盐基因，培育出了耐盐水稻新品系。如图是培育过程简图。

回答下列问题：
(1)阶段Ⅰ的核心步骤是________________，在构建重组质粒b的过程中，一般需用限制酶切割________个磷酸二酯键。
(2)为保证耐盐基因的正常转录，重组质粒b上耐盐基因的两端应含有______________。
(3)阶段Ⅱ的核心过程是________和________，人工配制的培养基中除了必要的营养物质和琼脂外，还必须添加________。
(4)现有两个二倍体水稻品种，其基因型分别为yyRr、Yyrr。科学家进行如下实验：将上述两种基因型水稻产生的花粉除去细胞壁后进行原生质体融合，再把这些融合细胞进行组织培养，培育出水稻植株。该过程中，一般用________作为化学诱导剂来诱导花粉原生质体融合。若原生质体之间只考虑两两融合，培育的后代有________种基因型。

【推荐3】人干扰素(IFN)是机体免疫细胞产生的一类淋巴因子，通过诱导细胞合成抗病毒蛋白实现对病毒的抑制，同时还可增强各种免疫细胞的活力，进而增强人体抗病毒的能力。用白细胞生产干扰素，每个细胞最多只能产生100～1000个干扰素分子，而用基因工程技术改造的大肠杆菌发酵生产，在1~2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。图1、图2为质粒结构和IFN基因。回答下列问题：
          
(1)图1为所用载体示意图，质粒DNA含有启动子，启动子是_________识别并结合的位点。质粒DNA上的复制原点可以保证质粒在受体细胞中能____________。
(2)从基因组文库中获取的IFN基因，导入大肠杆菌_________(填“能”或“不能”)成功获得表达，原因是________。目前PCR反应体系中使用的是Taq酶而不是大肠杆菌的DNA聚合酶，原因是_________。
(3)图1中的Amp可作为________基因。欲利用上述材料构建基因表达载体，不选用EcoRⅠ的原因是______。

【推荐1】表面展示技术是通过重组DNA技术，将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白，从而可展示在细胞表面。回答下列问题。
(1)若要将芽孢表面蛋白基因cotB与外源的绿色荧光蛋白基因gfp构建成基因表达载体，下图中最适合通过绿色荧光（绿色荧光蛋白在紫外光下会产生绿色荧光）确定融合蛋白成功表达的是_____。


注：Amp^r为氨苄青霉素抗性基因；→表示转录方向；UAG，UAA，UGA是终止密码子，AUG是起始密码子。
(2)导入基因表达载体后的芽孢杆菌接种在含有_______的固体培养基上，以获得携带载体的单菌落，该过程被称为微生物的________培养。
(3)培养基中可能既有含基因表达载体的单菌落，也有含______的单菌落，因此还需要对DNA进行提取，常用酒精初步分离DNA和蛋白质，这里酒精的作用原理是______。
(4)若要确定表面展示技术在芽孢杆菌上构建成功，应在紫外光环境下对其进行______水平的检测。

【推荐2】酯酶结合荧光分析法可对有机磷和氨基甲酸酯类农药进行检测，某研究院利用转基因技术获得一种催化效率高、农药敏感性强的微生物酯酶。请分析回答：

限制酶	识别序列与切割位点	限制酶	识别序列与切割位点
PstⅠ	5′－CTGCA↓G－3′	NdeⅡ	5′－↓GATC－3′
HindⅢ	5′－A↓AGCTT－3′	EcoRⅠ	5′－G↓AATTC－3′
DpnⅡ	5′－↓GATC－3′	AluⅠ	5′－AG↓CT－3′

(1)人工合成酯酶基因后通过PCR技术可实现扩增，为该过程提供原料的是________；还需要设计两种引物，设计引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的_______端开始连接脱氧核苷酸。某质粒图谱和目的基因的序列如图所示，应选择引物________（填下列数字）（①～④中加框表示识别序列前的保护碱基，增强上述酶与目的基因的结合。）。在PCR扩增仪中加入所选择的引物，需扩增________代后才会得到等长的8条DNA片段。
①5′－CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC－3′
②5′－CCCAAGCTTATGCTTGATATGCCAATC－3′
③5′－CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG－3′
④5′－CCGGAATTCCTAGTCGAACACAAGAAG－3′
(2)若提取高产酯酶野生菌的基因组DNA，用设计好的两种引物和合适的条件进行PCR，其产物可以通过________来鉴定。结果发现有目的基因以外的杂带存在，分析可能原因是________。解决措施是在目的基因的________（填“内部”或“上、下游”）重新设计引物进行PCR。
(3)将PCR产物和质粒用限制酶酶切，酶切产物纯化后，用_______连接，连接产物导入大肠杆菌前需用________处理大肠杆菌，使其处于感受态。
(4)将目的蛋白与某些标签融合表达形成含标签的融合蛋白，实现增溶、防降解、促进分泌、便于纯化和检测等功能。6×His-Tag（组氨酸标签）含有的咪唑基团选择性地结合在已固定于层析介质的Ni^2＋、Co^2＋等金属离子上。高浓度的咪唑缓冲液可以竞争性洗脱结合在介质上的His标签蛋白。据此推测，6×His-Tag的作用之一是________。

【推荐3】如图所示为培育转基因水稻流程图，其中“报告基因”只能在真核生物中正常表达，其产物能使细胞呈现蓝色。请回答下列问题。

(1)该流程中，“转化”指的是___。
(2)体外大量扩增除草剂抗性基因时，常用的生物技术是___。
(3)除草剂抗性基因G需插入到Ti质粒的___中，能将除草剂抗性基因G带入水稻细胞并整合到水稻细胞的染色体DNA上。
(4)构建表达载体时一般需要选用两种不同的限制酶切割，目的是___。用限制酶切割质粒后，可以使用___催化DNA片段上的磷酸二酯键的形成。
(5)质粒上的氨苄青霉素抗性基因的作用是___；筛选2步骤应挑选___的愈伤组织，继续发育成转基因水稻植株。