【推荐2】乙烯受体是乙烯感受和转导信号的初始元件，广泛存在于各种植物中，并决定植物各种组织对乙烯反应的敏感性。通过对多种植物研究表明，钝化植物对外源乙烯的敏感性比抑制内源乙烯的生物合成更为有效地延长植物的采后寿命。科学家从草莓中提取乙烯受体Ers1基因，通过基因工程将Ers1基因反向连接在启动子后，筛选转入反义Ersl基因的草莓，达到延长储藏期的效果。回答下列问题：
(1)草莓DNA的提取：取草莓植株叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉碎后，加入400uLSDSDNA提取液继续研磨，提取液中含有________可防止DNA被水解。待充分研磨后收集至离心管中，离心后取①于另一干净离心管中，加入200uL异丙醇，离心10min之后弃去管中的②，加入80uL体积分数为70%的乙醇，离心5min之后取③保存。过程中的①、②、③分别是_________。（从“上清液”和“沉淀”中选取相应词语填写）
(2)通过上述方法获得DNA后，需要通过PCR技术进行扩增Ersl基因（如下图）。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl基因时需添加限制酶XhoI（识别序列为5'－CTCGAG－3'）的识别序列。已知Ersl基因左端①处的碱基序列为－TTCCAATTTTAA－，则其中一种引物设计的序列是5'_________3'。在PCR体系中，加入的dNTP可提供________。PCR产物通过电泳进行分离后，可割下_________回收扩增的Ersl基因。
   
(3)经XhoI酶切后的载体和Ers1基因进行连接（如图），连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、Ers1基因与载体正向连接、Ers1基因与载体反向连接。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，请在下图中画出电泳结果，需标明电泳片段DNA大致长度__________。
   
(4)用________处理农杆菌使其变为感受态细胞，将筛选得到的反向连接质粒与感受态农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。将农杆菌涂布接种于添加有卡那霉素的LB固体培养基上，目的是________。
(5)用阳性农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随________整合到植物染色体DNA中，最后通过________技术培育出完整的转基因植株。为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。得到的转基因植株乙烯受体的合成受阻，其原因是________。

【推荐1】学习以下材料，回答（1）~（4）题。
抗体—药物偶联物（ADC）——瞄准肿瘤的生物导弹。
抗体—药物偶联物（ADC）通过化学键将药物连接到能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体上，ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成。单克隆抗体作为载体将细胞毒素靶向运输到肿瘤细胞，对肿瘤细胞起选择性杀伤作用。
在设计一款ADC药物之前，得先确定靶点。靶点必须是肿瘤特异性的，或者在肿瘤中高表达的。HER2蛋白是人类表皮生长因子受体，在细胞生长发育及分化过程中起重要作用，HER2蛋白过量表达会导致细胞功能紊乱，常与肿瘤的发生发展密切相关。乳腺癌细胞上的HER2蛋白是正常组织中的100倍以上，在单位细胞中的拷贝数接近 200 万，使其成为理想的肿瘤治疗靶标。
用纯化的人 HER2蛋白多次免疫小鼠，取免疫小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞杂交，用______①______筛选获得杂交瘤细胞。对杂交瘤细胞进行多次克隆化培养和抗体检测，获得_____②_______的细胞株。提取该细胞株的总RNA，用逆转录试剂盒将 mRNA 逆转录成 cDNA，以 cDNA 为模板进行 PCR获得抗体可变区（结合抗原区）基因序列，将人抗体基因的恒定区基因序列与其相连，构建人源化抗体表达载体，导入人细胞株293F，实现人源化抗HER2抗体的体外生产。
通过接头将抗HER2抗体与细胞毒素结合，制备出ADC。ADC进入血液循环后随血液到达全身，当它与肿瘤细胞表面抗原结合后，就会发生内化作用，即细胞膜产生凹陷，最终向内生成一个小球，称内吞体，ADC保留在内吞体中，随着内吞体与溶酶体的融合，这些ADC被溶酶体中的各种酶降解，释放出细胞毒素分子。这些细胞毒素分子有的直接杀死肿瘤细胞，有的则通过诱导其凋亡将其消灭。
(1)文中①、②两处的恰当内容是：
①____________
②____________
(2)ADC进入乳腺癌细胞时，依赖____________与乳腺癌细胞表面抗原特异性结合，形成内吞体，部分ADC被溶酶体中的各种酶降解，释放出毒素分子，导致癌细胞凋亡。
(3)结合ADC的结构分析，ADC在临床应用上的优势是____________。
(4)从文中有关的信息分析，下列叙述合理的有____________（选填下列字母）。
a. HER2蛋白是乳腺癌细胞表面的特异性蛋白
b.人源化抗体的制备属于蛋白质工程，不属于基因工程
c. ADC的细胞毒素可以通过诱导细胞凋亡来消灭癌细胞
d.与鼠源单克隆抗体相比，人源化抗体可显著减轻人针对抗体的免疫

【推荐3】狂犬病是由狂犬病病毒（RABV）感染中枢神经系统引起的传染病，人和动物感染后一旦出现临床症状，死亡率几乎100%。当前，接种疫苗和抗体注射是预防狂犬病最为有效的途径。RABV是一种RNA弹状病毒，RABV-G（病毒表面糖蛋白）是RABV诱导机体产生抗体的唯一抗原，利用基因工程技术可获得重组RABV-G蛋白（rRVGP）的亚单位疫苗，并制备相应的单克隆抗体。回答下列相关问题：
(1)在国内外研究中，rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下：
①提取病毒的RNA进行RT-PCR，即将病毒RNA经过______过程获得cDNA，并对cDNA进行PCR扩增。RT-PCR过程中需要加入的酶有______。
②利用______进行核酸分子杂交或利用______技术鉴定PCR产物以检测是否获得正确的目的基因。
③待用②中后者方法鉴定结束后，用刀片切割______并回收目的基因，从而达到提纯的目的。 接着将纯化得到的目的基因与特定质粒酶切连接，再利用______法将重组DNA分子导入果蝇S2细胞，待表达后破碎细胞，最后利用______技术对rRVGP进行检测。
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中，同样也可以使用mRNA疫苗，但缺陷是机体缺少______（填“RNA聚合酶”或“DNA聚合酶”），使得mRNA进入细胞后不能在体内持续产生大量抗原，且mRNA在体内容易被降解。对此研究人员研制出一种自扩增RNA（saRNA）疫苗，即在mRNA中加入一段可复制的序列，并对mRNA5'端加帽，3'端加尾部修饰，使其能在机体内稳定存在。相比于传统的mRNA疫苗，saRNA疫苗还具有的优点是______。
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下：
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后，从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以______的骨髓瘤细胞融合，并利用选择培养基对融合细胞进行筛选。
②对筛选后的细胞进行______培养和抗体检测，最后获得所需的杂交瘤细胞。
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体，还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下：
①体外获取单克隆抗体的基因后，将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白（WAP）基因组中，为减少后续分离单克隆抗体的难度，可对原WAP基因进行______，但必须保留原有的启动子和调控序列，且插入的位点在调控序列下游，以保证基因的正确表达。
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞，通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入_____，从而形成融合细胞。将融合细胞进行______，一段时间后植入雌性动物代孕体，直到母体分娩出转基因动物。
④待个体长大后，从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。