1 . 甘草酸（GA）是甘草地下部分的一种重要生理活性物质，具有阻止病毒复制、恢复免疫力、诱导干扰素合成、抑制癌细胞生长等功效。传统的GA一直依赖于植物提取，属于资源依赖型产品。科研人员一直在探索借助生物工程技术生产GA，以解决甘草酸及其他稀缺天然产物获取过程中存在的资源短缺等问题。
(1)科研人员选择甘草无菌芽下胚轴切成长约0.5cm的小段接于培养基上进行培养，诱导其_____ ，获得愈伤组织后将其转入含50mL液体培养基的锥形瓶中悬浮培养，滤去较大的细胞团及未完全愈伤化的组织后，调节_____ 以保证获得分散性较好的悬浮细胞系。再通过不断的_____ 培养，获得大量甘草细胞，用于诱导和提取甘草素。从生物多样性的价值角度分析，该技术获得甘草酸的优势是_____ 。
(2)在明确甘草酸的生物合成途径和其中几种关键酶后，科研人员尝试借助基因工程和发酵工程，开发了酵母细胞工厂合成甘草酸的途径。具体如下：
i构建基因表达载体。为获取几种关键酶基因，科研人员通过检索供体生物基因数据库获取相关基因编码序列，再用_____ 法进行制备，借助PCR技术大量扩增后，为使其在受体细胞中高效表达，又将获得的目的基因分别与含_____ 的载体连接，构建出基因表达载体。
ii将目的基因导入受体细胞。将基因表达载体导入感受态的酵母菌细胞中，选择酵母菌作为受体细胞的好处是_____ 。
iii检测。分子水平可以采用_____ 技术检测GA。该技术应用中科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图所示。_____ ；过程②使用化学试剂_____ 来诱导细胞甲和骨髓瘤细胞的融合；对细胞膜的作用是_____ 。最终能在HAT培养基上生长的丙细胞具有_____ 特点；制备单克隆抗体作为检测甘草酸的探针，好处是_____ 。
(1)科研人员选择甘草无菌芽下胚轴切成长约0.5cm的小段接于培养基上进行培养，诱导其
(2)在明确甘草酸的生物合成途径和其中几种关键酶后，科研人员尝试借助基因工程和发酵工程，开发了酵母细胞工厂合成甘草酸的途径。具体如下：
i构建基因表达载体。为获取几种关键酶基因，科研人员通过检索供体生物基因数据库获取相关基因编码序列，再用
ii将目的基因导入受体细胞。将基因表达载体导入感受态的酵母菌细胞中，选择酵母菌作为受体细胞的好处是
iii检测。分子水平可以采用
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2 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）利用玉米秸秆转化为绿色能源酒精，不仅可以低成本缓解能源危机、减少环境污染而且是实现可持续发展战略的基本保障，具体的工艺流程如图。___________ 。若测样品时使用的比色杯光面玻璃不干净，与正常标准曲线对照，将导致计算结果___________ （填“偏小”、“偏大”或“无影响”）
(2)步骤③中将糖液与酵母菌混合置于___________ 发酵罐，短时间内酵母菌更多分布在发酵液的___________ 部位。待酒精浓度达到11．4%时不再发酵，可在发酵罐上施以负压使酒精挥发，酒精发酵速率将___________ 。发酵产物经___________ 去杂、蒸馏，可获得纯化的酒精。
(3)酿酒残渣还可作为酿醋原料，这属于农业废弃物的___________ 处理。
（二）为推进“抗原筛查、核酸诊断”监测模式，在核酸检测基础上增加抗原检测，科学家设计出一种新冠抗原自检试剂盒，检测原理如图所示。
样品垫：滴加样品的位置
结合垫：预留可移动的胶体金标记的新冠抗体1、胶体金标记的鼠IgG
T线：固定了新冠抗体2
C线：固定了抗鼠IgG抗体
(4)将鼻咽拭子样品加入样品垫，然后加入液体介质，利用___________ 方法，溶有样品的液体沿试纸向吸水垫的方向扩散。T线可以通过抗体2结合___________ ，使胶体金聚集在T线，显示红色条带。
(5)为获得T线上的抗体，需将___________ 注入小鼠体内，取免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经选择后用96孔板培养和筛选，每个孔中接种___________ 个细胞，培养后经抗体检验，再克隆___________ 。
(6)若检测结果为___________ ，则说明该样品中没有新冠病毒抗原。
（一）利用玉米秸秆转化为绿色能源酒精，不仅可以低成本缓解能源危机、减少环境污染而且是实现可持续发展战略的基本保障，具体的工艺流程如图。
(2)步骤③中将糖液与酵母菌混合置于
(3)酿酒残渣还可作为酿醋原料，这属于农业废弃物的
（二）为推进“抗原筛查、核酸诊断”监测模式，在核酸检测基础上增加抗原检测，科学家设计出一种新冠抗原自检试剂盒，检测原理如图所示。
样品垫：滴加样品的位置
结合垫：预留可移动的胶体金标记的新冠抗体1、胶体金标记的鼠IgG
T线：固定了新冠抗体2
C线：固定了抗鼠IgG抗体
(4)将鼻咽拭子样品加入样品垫，然后加入液体介质，利用
(5)为获得T线上的抗体，需将
(6)若检测结果为
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3 . 雷公藤甲素（TPL）能有效抑制癌细胞生长，对正常细胞也有一定的毒性。为探究其作用，科学家用TPL对肝癌HepG2细胞进行不同处理，结果如图1所示。请回答下列问题：_____ ，且在一定浓度范围内，随着雷公藤甲素浓度升高，细胞抑制率逐渐_________ ；同一TPL浓度下，随着处理时间的增加，抑制率逐渐________ 。
(2)实验前用合成培养基对肝癌HepG2细胞进行体外培养时，往往需添加适量血清，原因是_________ ，将细胞置于含5%CO2的恒温培养箱中培养，CO2的作用是________ 。
(3)科学家制备能同时与药物和肿瘤细胞抗原结合的双特异性抗体，具体过程如图。_______ 诱导法等。与传统血清抗体相比，单克隆抗体的优点有______ 。
Ⅱ、抗体1和抗体2在体外解偶联后重新偶联得到双特异性抗体（双抗），如图3.与直接使用抗肿瘤药物相比，将药物与双抗结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_______ ，体现的是双抗在______ 方面的用途。
(2)实验前用合成培养基对肝癌HepG2细胞进行体外培养时，往往需添加适量血清，原因是
(3)科学家制备能同时与药物和肿瘤细胞抗原结合的双特异性抗体，具体过程如图。
Ⅱ、抗体1和抗体2在体外解偶联后重新偶联得到双特异性抗体（双抗），如图3.与直接使用抗肿瘤药物相比，将药物与双抗结合后给药，对人体的副作用更小，原因是
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解题方法
4 . 乳腺癌化疗的药物在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，为降低药物对患者的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图所示。下列相关说法正确的是（ ）
| A．对过程①形成的杂交细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可以获得能分泌所需抗体的细胞 |
| B．ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，ADC起作用时会被细胞吞噬，并在溶酶体内被分解后释放药物 |
| C．经步骤③筛选得到的杂交瘤细胞具有的特点是能准确识别抗原的细微差异并能大量制备 |
| D．ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因是药物能精确地识别定位乳腺癌细胞，避免其他细胞受损 |
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5 . 下列关于生物工程和技术的表述错误的是（ ）
| A．杂交瘤细胞制备过程中，可用灭活的病毒诱导细胞融合 |
| B．胚胎移植中，供体和受体相当于双亲中的父本和母本 |
| C．PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，需要在紫外灯下观察 |
| D．用PCR技术扩增目的基因时，不需要提前知道基因的全部序列 |
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6 . 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白。某科研单位将小鼠的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，并经过筛选获得能稳定分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列相关叙述错误 的是（ ）
| A．制备单克隆抗体前需以HCG为抗原多次注射给小鼠 |
| B．可用灭活的病毒诱导小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 |
| C．杂交瘤细胞体外培养出现接触抑制现象时需先酶解再分瓶培养 |
| D．与传统抗HCG抗体相比，抗HCG单克隆抗体孕检的准确率更高 |
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解题方法
7 . CAR-T免疫疗法是治疗癌症的一种新方法，其过程是从癌症患者体内分离T细胞，利用基因工程引入能够特异性识别肿瘤细胞并同时激活T细胞的嵌合抗体（CAR）的基因制备成CAR-T细胞，进行扩增后重新回输到病人体内以缓解癌症的方法（如图）。图中外周血单核细胞培养液中通常加入抗CD3、抗CD28单克隆抗体（MAb）以及外源性细胞因子IL-2，以筛选并扩增出T细胞。有关说法错误的是（ ）
| A．制备MAb时，获得杂交瘤细胞过程中需利用CD3和CD28进行筛选 |
| B．CAR-T细胞构建时，可直接通过显微注射将CAR基因导入T细胞中 |
| C．外周血单核细胞和CAR-T细胞需要用加入血清等天然成分的合成培养液进行培养 |
| D．与放疗和化疗相比，CAR-T免疫疗法副作用小、消灭肿瘤细胞效果更持久 |
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8 . 下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：______ ，由此生成的A和B称为______ ； A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激，化学方法使用的促融剂是______ 。融合完成的标志是______ 。
(2)若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用______ 使其分散开来； A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用______ 诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为______ ，其中CO2的作用是______ 。
(3)若A为骨髓瘤细胞，B为经免疫的Ｂ淋巴细胞，那么D称为______ ，这种细胞既能大量繁殖，又能产生______ 。
(4)从A、B到细胞C的过程中，可形成______ 种类型的细胞（仅考虑两个细胞间的融合）。若该过程用于单克隆抗体的制备，应筛选出符合要求的D，方法是用特定的______ 培养基培养，为了大规模的生产单克隆抗体，还需对D进行第二次筛选，第二次筛选的方法是______ 。
(5)通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它______ 。
(2)若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用
(3)若A为骨髓瘤细胞，B为经免疫的Ｂ淋巴细胞，那么D称为
(4)从A、B到细胞C的过程中，可形成
(5)通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它
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9 . 研究者将M病毒膜蛋白注射小鼠，分离小鼠脾细胞并将其与S细胞融合，通过筛选获得单个稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列相关叙述正确的是（ ）
| A．用动物细胞培养液培养M病毒，通过离心可获得膜蛋白作为抗原 |
| B．可用M病毒膜蛋白多次免疫小鼠，以获得更多的浆细胞 |
| C．S细胞应具备产生抗体和无限增殖的能力 |
| D．体外培养单个杂交瘤细胞获得大量抗体体现了细胞的全能性 |
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10 . 巨噬细胞和树突状细胞等广泛表达信号调节蛋白α（SIRPα），SIRPα是跨膜蛋白CD47的特异性配体，二者结合后通过信号途径负向调节巨噬细胞的吞噬功能。某些肿瘤细胞过度表达CD47蛋白从而获得免疫逃逸，阻斯或干扰SIRPα与CD47的识别和结合，会重新激活巨噬细胞的吞噬功能，有利于促进肿瘤细胞的清除。制备抗SIRPα单克隆抗体和验证其对巨噬细胞吞噬功能影响的实验流程如图所示。回答下列问题：_______________ 结合，阻断CD47对巨噬细胞吞噬功能的抑制。制备抗SIRPα单克隆抗体时，用________________ 作为抗原免疫小鼠。
(2)过程②往往会加入适量的聚乙二醇（PGE），PGE的作用是__________________ ，使用HAT培养基筛选出杂交瘤细胞，培养过程中___________________ 的细胞死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对经过选择培养的杂交瘤细胞进行_______________________ ，经多次筛选，可获得足够数量的分泌抗SIRPα单克隆抗体的细胞。
(3)验证抗SIRPα单克隆抗体的功能时，实验组的处理为________________ 。
(2)过程②往往会加入适量的聚乙二醇（PGE），PGE的作用是
(3)验证抗SIRPα单克隆抗体的功能时，实验组的处理为
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