7 . 半夏蛋白具有凝血和凝集细胞的生物活性，还具有抑菌、抗肿瘤等作用。半夏蛋白的获取有两种方法，一是从半夏块根中分离纯化制备半夏蛋白，二是利用基因工程技术重组表达蛋白。回答下列问题：
(1)研究人员猜测对半夏接种某种病菌可激发半夏蛋白基因表达，可在接种病菌后提取半夏块根细胞中总RNA，再纯化获得mRNA，在_____酶的作用下得到半夏蛋白cDNA．
(2)通过上述操作可获得不同大小片段的半夏蛋白cDNA，在这些片段两侧并无限制酶识别序列，通常可以在设计引物时添加限制酶识别序列，但在本实验中构建重组质粒时此方法不可行，原因是：_____。针对此问题，实验室重新设计了两个下图所示的接头（接头大小一般为10～20个碱基对且包含限制酶识别序列），需要用_____（从“T4 DNA连接酶”、“DNA聚合酶”或“E。coli DNA连接酶”中选）将左右两个接头与半夏cDNA连接形成重组cDNA分子。构建基因表达载体后将重组质粒导入大肠杆菌，最终构建出大肠杆菌半夏cDNA文库，再利用生物信息学软件分析该基因的_____从而获得半夏蛋白基因。

(3)科研人员欲利用pET-28a质粒将上述筛选的半夏蛋白基因导入宿主菌大肠杆菌DH5a（缺乏DNA修饰，缺乏“免疫”机制，且对氨苄青霉素敏感）中，以构建高效表达半夏蛋白基因的菌株。pET-28a质粒上含有氨苄青霉素抗性基因（Amp*）和LacZ基因和一些酶切位点，其结构如图。

①构建基因表达载体时，为了满足需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时可以激活或抑制_____。图中的质粒还需具备的结构有_____。
②为获得更多的半夏蛋白基因，可利用PCR技术进行扩增，为保证半夏蛋白基因与载体的正向连接，在设计PCR引物时，应在引物的_____（填“3'”或“5'”）端添加限制酶_____（填名称）的识别序列。根据上述信息，写出目的基因上游引物的12个碱基序列：5'_____3'。引物与DNA结合发生在PCR的_____阶段。
③β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gaI产生蓝色物质。将基因表达载体导入宿主菌后（转化成功率并不是100%），转化后的宿主菌在含有_____和X-gal的固体培养基上可以长出白色的菌落，以此筛选出成功导入重组pET-28a质粒的宿主菌，原因是_____。
(4)利用杂交瘤细胞技术制备半夏蛋白单克隆抗体的过程中有两次需要用到半夏蛋白，请写出其使用目的_____。