1 . 甘草酸（GA）是甘草地下部分的一种重要生理活性物质，具有阻止病毒复制、恢复免疫力、诱导干扰素合成、抑制癌细胞生长等功效。传统的GA一直依赖于植物提取，属于资源依赖型产品。科研人员一直在探索借助生物工程技术生产GA，以解决甘草酸及其他稀缺天然产物获取过程中存在的资源短缺等问题。
(1)科研人员选择甘草无菌芽下胚轴切成长约0.5cm的小段接于培养基上进行培养，诱导其_____，获得愈伤组织后将其转入含50mL液体培养基的锥形瓶中悬浮培养，滤去较大的细胞团及未完全愈伤化的组织后，调节_____以保证获得分散性较好的悬浮细胞系。再通过不断的_____培养，获得大量甘草细胞，用于诱导和提取甘草素。从生物多样性的价值角度分析，该技术获得甘草酸的优势是_____。
(2)在明确甘草酸的生物合成途径和其中几种关键酶后，科研人员尝试借助基因工程和发酵工程，开发了酵母细胞工厂合成甘草酸的途径。具体如下：
i构建基因表达载体。为获取几种关键酶基因，科研人员通过检索供体生物基因数据库获取相关基因编码序列，再用_____法进行制备，借助PCR技术大量扩增后，为使其在受体细胞中高效表达，又将获得的目的基因分别与含_____的载体连接，构建出基因表达载体。
ii将目的基因导入受体细胞。将基因表达载体导入感受态的酵母菌细胞中，选择酵母菌作为受体细胞的好处是_____。
iii检测。分子水平可以采用_____技术检测GA。该技术应用中科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图所示。

   

图中给小鼠注射甘草酸-牛血清白蛋白结合抗原的目的是_____；过程②使用化学试剂_____来诱导细胞甲和骨髓瘤细胞的融合；对细胞膜的作用是_____。最终能在HAT培养基上生长的丙细胞具有_____特点；制备单克隆抗体作为检测甘草酸的探针，好处是_____。

6 . 半夏蛋白具有凝血和凝集细胞的生物活性，还具有抑菌、抗肿瘤等作用。半夏蛋白的获取有两种方法，一是从半夏块根中分离纯化制备半夏蛋白，二是利用基因工程技术重组表达蛋白。回答下列问题：
(1)研究人员猜测对半夏接种某种病菌可激发半夏蛋白基因表达，可在接种病菌后提取半夏块根细胞中总RNA，再纯化获得mRNA，在_____酶的作用下得到半夏蛋白cDNA．
(2)通过上述操作可获得不同大小片段的半夏蛋白cDNA，在这些片段两侧并无限制酶识别序列，通常可以在设计引物时添加限制酶识别序列，但在本实验中构建重组质粒时此方法不可行，原因是：_____。针对此问题，实验室重新设计了两个下图所示的接头（接头大小一般为10～20个碱基对且包含限制酶识别序列），需要用_____（从“T4 DNA连接酶”、“DNA聚合酶”或“E。coli DNA连接酶”中选）将左右两个接头与半夏cDNA连接形成重组cDNA分子。构建基因表达载体后将重组质粒导入大肠杆菌，最终构建出大肠杆菌半夏cDNA文库，再利用生物信息学软件分析该基因的_____从而获得半夏蛋白基因。

(3)科研人员欲利用pET-28a质粒将上述筛选的半夏蛋白基因导入宿主菌大肠杆菌DH5a（缺乏DNA修饰，缺乏“免疫”机制，且对氨苄青霉素敏感）中，以构建高效表达半夏蛋白基因的菌株。pET-28a质粒上含有氨苄青霉素抗性基因（Amp*）和LacZ基因和一些酶切位点，其结构如图。

①构建基因表达载体时，为了满足需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时可以激活或抑制_____。图中的质粒还需具备的结构有_____。
②为获得更多的半夏蛋白基因，可利用PCR技术进行扩增，为保证半夏蛋白基因与载体的正向连接，在设计PCR引物时，应在引物的_____（填“3'”或“5'”）端添加限制酶_____（填名称）的识别序列。根据上述信息，写出目的基因上游引物的12个碱基序列：5'_____3'。引物与DNA结合发生在PCR的_____阶段。
③β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gaI产生蓝色物质。将基因表达载体导入宿主菌后（转化成功率并不是100%），转化后的宿主菌在含有_____和X-gal的固体培养基上可以长出白色的菌落，以此筛选出成功导入重组pET-28a质粒的宿主菌，原因是_____。
(4)利用杂交瘤细胞技术制备半夏蛋白单克隆抗体的过程中有两次需要用到半夏蛋白，请写出其使用目的_____。

8 . 狂犬病是由狂犬病病毒（RABV）感染中枢神经系统引起的传染病，人和动物感染后一旦出现临床症状，死亡率几乎100%。当前，接种疫苗和抗体注射是预防狂犬病最为有效的途径。RABV是一种RNA弹状病毒，RABV-G（病毒表面糖蛋白）是RABV诱导机体产生抗体的唯一抗原，利用基因工程技术可获得重组RABV-G蛋白（rRVGP）的亚单位疫苗，并制备相应的单克隆抗体。回答下列相关问题：
(1)在国内外研究中，rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下：
①提取病毒的RNA进行RT-PCR，即将病毒RNA经过______过程获得cDNA，并对cDNA进行PCR扩增。RT-PCR过程中需要加入的酶有______。
②利用______进行核酸分子杂交或利用______技术鉴定PCR产物以检测是否获得正确的目的基因。
③待用②中后者方法鉴定结束后，用刀片切割______并回收目的基因，从而达到提纯的目的。 接着将纯化得到的目的基因与特定质粒酶切连接，再利用______法将重组DNA分子导入果蝇S2细胞，待表达后破碎细胞，最后利用______技术对rRVGP进行检测。
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中，同样也可以使用mRNA疫苗，但缺陷是机体缺少______（填“RNA聚合酶”或“DNA聚合酶”），使得mRNA进入细胞后不能在体内持续产生大量抗原，且mRNA在体内容易被降解。对此研究人员研制出一种自扩增RNA（saRNA）疫苗，即在mRNA中加入一段可复制的序列，并对mRNA5'端加帽，3'端加尾部修饰，使其能在机体内稳定存在。相比于传统的mRNA疫苗，saRNA疫苗还具有的优点是______。
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下：
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后，从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以______的骨髓瘤细胞融合，并利用选择培养基对融合细胞进行筛选。
②对筛选后的细胞进行______培养和抗体检测，最后获得所需的杂交瘤细胞。
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体，还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下：
①体外获取单克隆抗体的基因后，将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白（WAP）基因组中，为减少后续分离单克隆抗体的难度，可对原WAP基因进行______，但必须保留原有的启动子和调控序列，且插入的位点在调控序列下游，以保证基因的正确表达。
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞，通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入_____，从而形成融合细胞。将融合细胞进行______，一段时间后植入雌性动物代孕体，直到母体分娩出转基因动物。
④待个体长大后，从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。