1 . 人参是一种名贵中药材，具有良好的滋补作用。干扰素可用于治疗慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤。下图为三种限制酶识别序列与酶切位点及制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的示意图。请回答下列问题：

(1)图中①的DNA用限制酶HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。利用PCR技术扩增干扰素基因时，扩增第n次时，需要________个引物。
(2)假设图中质粒上限制酶BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ识别位点的碱基序列，现用限制酶BclⅠ和HindⅢ切割质粒，那么该图中①的DNA右侧________(填“能”或“不能”)选择BamHⅠ进行切割，理由是________。若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒________(填字母)。
A．既能被BamHⅠ切开，也能被HindⅢ切开
B．能被BamHⅠ切开，但不能被HindⅢ切开
C．既不能被BamHⅠ切开，也不能被HindⅢ切开
D．能被HindⅢ切开，但不能被BamHⅠ切开
(3)在构建重组质粒的过程中，用HindⅢ、BamHⅠ切割质粒和目的基因比只用BamHⅠ好，这样可以防止_______________________。②过程需要用到的酶是________________。
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素，所用的方法是_________________。
(5)在PCR过程中所用酶的最大理化特点是_________________。
(6)将构建的基因表达载体导入动物受精卵常用的方法是____________________。

2 . 用质粒(图1)和含目的基因的DNA片段(图2)构建基因表达载体获得转基因大肠杆菌，下列叙述错误的是（       ）

A．若通过PCR技术获取该目的基因，应该选用引物甲和引物丙

B．在受体细胞中，氨苄青霉素抗性基因和目的基因可同时表达

C．若将基因表达载体导入受体细胞中，需先用Ca2＋处理大肠杆菌

D．利用质粒和目的基因构建表达载体，应选用BclⅠ和HindⅢ剪切

3 . 脱水素是青稞植株中的一种抗冻物质，脱水素基因Dhn4的结构如图1所示，其中B链为模板链。研究人员利用图2所示的质粒，通过农杆菌转化法将该基因导入草莓中，成功培育出了抗冻草每植株。回答相关问题。

说明：Xho Ⅰ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ为三种产生不同黏性末端的限制酶的识别位点：amp^r基因为氨苄青霉素抗性基因。
(1)利用PCR获取目的基因，提取青稞细胞的mRNA，经______过程获得PCR所需的模板。扩增Dhm4时应选择的引物组合是______，为使扩增后的产物按照正确方向与质粒连接，需在两个引物的______（填“5’”或“3’”）末端添加限制酶____________的识别序列。
(2)图2所示的质粒为农杆菌的______质粒，其中启动子的作用是_______________。
(3)将重组质粒导入用______处理过的农杆菌内，然后在含____________的培养基上筛选农杆菌，再将筛选后的农杆菌与草莓叶片共培养。1
(4)通过PCR技术检测草莓染色体上是否插入了Dhn4基因或____________；然后通过____________处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。

4 . 传统的基因测序往往需要从大量细胞中提取DNA。科研人员应用单细胞基因组扩增技术，成功地在体外对分离得到的极体进行了基因组扩增（PCR），并完成了测序，从而推测出与被测极体同时产生的卵细胞不含致病基因，最终借助试管婴儿技术帮助女性遗传病患者获得健康婴儿，试管婴儿技术涉及体外受精、胚胎移植等技术。下列有关叙述，正确的是（　　）

A．被测极体的单细胞基因组只包含一个染色体组上的基因

B．体外扩增DNA需要引物，体内DNA复制不需要引物

C．精子获能指精子在获能液中获得ATP后才具备受精能力

D．PCR反应缓冲溶液中要添加Mg2+、耐高温的DNA解旋酶

5 . 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题：

   

(1)由于_______，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体_______细胞中的mRNA，再由mRNA经________得到的胰岛素基因，________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶_________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的_______（填“3’或5’）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是______个。引物序列中的的GC含量越高，对PCR过程中的_______步骤〔写出具体过程）影响最大，越_______（填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有______。

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测

(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经________（处理方法）大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆茵接种到添加了________和X-gal的培养基上筛选出_______色的菌落即为工程菌种。

6 . 原位PCR技术是利用原位PCR仪，在组织或细胞中靶DNA所在的位置上进行的PCR循环扩增，通过掺入标记基因直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。进行扩增时，反应体系中的反应成分需渗透到组织或细胞的靶DNA处才能进行扩增。PCR反应体系中需要添加一定浓度的Mg²⁺，而组织细胞间的物质会吸附Mg²⁺，使进入细胞的Mg²⁺减少。下列说法正确的是（       ）

A．PCR技术中复性是当温度下降到65℃时，两种引物与两条DNA单链结合的过程

B．反应体系中扩增的原料会依次连接到子链的5端

C．反应体系中引物的G，C碱基含量越高越好，因为越高引物结合的特异性越强

D．原位PCR反应体系中使用的Mg2+浓度要比常规PCR高

7 . 在基因工程中，构建基因表达载体时工具酶的作用部位以及PCR扩增DNA时90摄氏度高温的作用部位是（       ）
   

A．a

B．b

C．c

D．d

8 . PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：
   
(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_________________，提取到的DNA可以用_____________试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是______________；不科学的原因是_________________________________。

基因	引物序列
PO	F-5'GGGATT-3' R-5'AATCCC-3'
NOS	F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3' R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'
CP4-EPSPS	F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3' R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、___________酶、__________等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3)扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过_____________对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与________________________________等有关。

9 . 我国科学家利用苏云金杆菌中的Bt基因培育出转基因抗虫棉，下列说法错误的是（       ）

A．科学家已对Bt基因的序列信息，表达产物等有了较为深入的了解

B．筛选Bt基因后可以利用PCR技术对其进行大量的扩增

C．培育转基因抗虫棉的核心工作是将Bt基因导入棉花细胞中

D．检查转基因抗虫棉是否培育成功首先要进行分子水平的检测

10 . 实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增，下列相关叙述正确的是（       ）

A．需要耐高温的DNA聚合酶和DNA连接酶

B．反应过程包括变性→复性→延伸

C．90℃时DNA的磷酸二酯键断开

D．引物与模板结合后向5′方向延伸