1 . MAP30蛋白是一种能使Ⅰ型核酸核糖体失活的蛋白质，存在于苦瓜果实和种子中。实验表明，MAP30蛋白具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等功能，近年来引起人们的广泛关注。现有一科研团队欲培育高效表达该基因的马铃薯新品种。请回答下列问题
(1)获取MAP30蛋白基因，人们可从_________提取mRNA，再进行逆转录获得。这样得到的基因和从基因组文库中获取的基因的区别主要是其不含____________。
(2)获得目的基因后可利用PCR技术对其进行扩增，所用的缓冲液中除目的基因外，还应包括______________等物质。
(3)构建基因表达载体时，人们常常分别使用两种限制酶剪切目的基因和运载体，这样做是为了避免出现___________________________________________。
(4)将基因表达载体导入马铃薯受体细胞后，可用______________技术得到转基因幼苗。检测MAP30的基因是否成功表达，可用______________技术。

2 . MAP30蛋白是一种能使I型核酸核糖体失活的蛋白质，存在于苦瓜果实和种子中。实验表明MAP30蛋白具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等功能，近年来引起人们的广泛关注。现有一科研团队欲培育高效表达该基因的马铃薯新品种。请回答下列问题：
(1)获取MAP30蛋白基因，人们可从___________中提取RNA，再进行逆转录获得。这样得到的基因和从基因组文库中获取的基因的区别主要是其不含___________。
(2)获得目的基因后可利用PCR技术对其进行扩增，所用的缓冲液中除目的基因外，还应包括___________等物质。
(3)构建基因表达载体时，人们常常分别使用两种限制酶剪切目的基因和运载体，这样做是为了避免出现___________。
(4)将基因表达载体导入马铃薯受体细胞后，可用___________技术得到转基因幼苗。检测MAP30的基因是否成功表达，可用___________技术。

3 . 某雌雄异株作物的性别决定方式为XY型，抗虫性状由两对独立遗传的等位基因A/a和B/b控制。现用纯合抗虫雌株和纯合不抗虫雄株交配产生F₁，F₁相互交配，F₂表型及比例为抗虫植株：不抗虫植株=15:1。回答下列问题：
(1)欲完成上述杂交实验需要对母本进行的操作是_____________。
(2)进一步统计的结果，若出现_____________，则可判断有一对基因位于X染色体。
(3)科学家从杂草中偶然获得一抗病基因E，运用基因工程技术将该基因导入与上述亲本作物基因型相同植株的染色体DNA上后，获得抗病植株甲、抗病植株乙。科学家利用荧光定量PCR技术，对F₁植株、雄株甲、雌株乙的等量体细胞进行检测，结果如图所示：
   
实验中检测中基因A的目的是_____________。为确定基因E导入的位置，科研人员将雄株甲与雌株乙杂交，统计子代植株表型及比例为抗病雄株：抗病雌株：不抗病雌株=2:1:1。请用“•”在下图中画出雄株甲与雌株乙中的组成体细胞中抗病基因E在染色体上的分布示意图_____________（注：画出抗病基因E的位置即可）。
   

4 . DNA标记是DNA（或基因）中一些稳定的特征性碱基序列。选择相应的DNA标记进行PCR扩增，通过产物的电泳图谱可进行遗传病的基因定位。下图1为1号家庭甲、乙两种遗传病的相关基因（包含正常基因和致病基因）定位电泳图，图2为2号家庭甲、乙两种遗传病的家族遗传系谱图，已知甲乙两病中只有一种为显性遗传病。甲种遗传病的相关基因为A、a，乙种遗传病的相关基因为B、b，不考虑X、Y染色体同源区段上的基因。请回答下列问题：
   
(1)甲种遗传病的遗传方式是____，乙种遗传病的遗传方式是____。
(2)1号家庭和2号家庭中，儿子的基因型分别是____、____。
(3)若要判断1号家庭中父亲是否患有甲种遗传病，可选择____，对其甲种遗传病有关的DNA标记PCR扩增产物进行电泳，并将其电泳图与1号家庭父亲的电泳图进行比较。
(4)PCR技术除用于上述基因定位外，在基因工程中还可以用于____

5 . 被称为“水中小白鼠”的斑马鱼是一种体长4厘米左右的热带淡水鱼，与人类基因同源性高达87%，并有相似的器官、生理功能和信号通路。由于发育周期短、费用低、体外受精、透明等优点，斑马鱼现在越来越广泛地应用于毒性检测、疾病模型创制、药物筛选等领域中。
研究人员欲通过使胰岛素基因表达受阻从而构建糖尿病模型斑马鱼。吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，通过将其注入斑马鱼受精卵可阻碍相关基因的表达。针对其作用原理，现有两种假说：
假说1：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切。
假说2：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。
   
为了验证上述假说，研究人员进行了如下实验：
(1)从受精卵发育了3天的实验组和对照组的细胞中提取总RNA，再通过逆转录获得cDNA。若假说1成立，选择上图所示引物2和引物3进行PCR后的结果为______（填字母）。

A．实验组有杂交带

B．实验组无杂交带

C．对照组有杂交带

D．对照组无杂交带

(2)若要证明假说2成立，进行PCR时，需要选择上图所示引物组合有__________。
(3)采用PCR技术扩增DNA需要引物的原因是__________________。
(4)为了获取大量斑马鱼胚胎干细胞用于药物筛选，可加入__________________，用于分散斑马鱼囊胚中的__________________。再取分散细胞作为初始材料进行______培养，然后分瓶继续培养。

6 . 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：

(1)从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
(2)在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)构建的pMD19-DGATl导入经CaCl₂溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
(4)用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。

7 . PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作:①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题:
(1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是____________(用数字序号表示)。
(2)操作③中使用的酶是_____。PCR中的每次循环可分为变性、复性、__三步， 其中复性的结果是______________。
(3)为了做出正确的诊断，PCR所用的引物应该能与___________特异性结合。
(4)PCR是__________的缩写。它是一项根据________________的原理，在生物体外大量快速扩增特定DNA片段的技术。PCR的产物常用_________来鉴定。
(5)基因工程的操作的基本程序:_____；______；_______；_______。

8 . 新冠病毒的遗传物质是单链RNA，其主要的抗原是S蛋白，可利用荧光PCR技术快速检测核酸。被检测者咽拭子取样后，用提取的总RNA合成相应的cDNA，再用PCR技术进行扩增。若样本扩增出了新冠病毒特定的核酸序列，则检测结果为阳性，检测过程如下图所示。回答下列问题：

(1)为扩增出S蛋白基因（核酸序列），过程①应以________________作为模板来合成相应的cDNA。过程②是通过PCR技术进行扩增，该技术包括_______________________三个步骤。
(2)过程②的反应体系中加入了种引物，Taq酶四种脱氧核苷酸等物质，同时控制温度才能进行，最后通过荧光标记的基因探针对扩增产物进行检测。Taq酶主要的特点是__________，加入四种脱氧核苷酸的作用是_____________________。
(3)通过荧光标记的基因探针对扩增产物进行检测，利用的原理是_________________。
(4)3月12日，国家药监局批准五款新冠抗原自测产品上市。抗原检测有利于对疑似人群的早期分流和快速管理，与核酸检测相比，抗原检测虽然不够灵敏，但是有__________的优点；实际使用中发现，若人体感染了其他病毒，不会造成抗原检测假阳性，原因是_____________。

9 . 在胚胎工程中，对牛、羊等哺乳动物移植前的胚胎进行性别鉴定，然后植入受体，可以控制后代的性别，但这种控制是在精子和卵子受精后，胚胎本身已经有了性别的前提下进行的，这种方法耗时长，对胚胎损伤大。SRY基因是Y染色体上的性别决定基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术能准确鉴定早期胚胎性别，应用前景十分广阔。请回答与SRY—PCR法鉴定胚胎性别相关的问题：
（1）用SRY—PCR法鉴定胚胎性别需要充足的材料并保证被测胚胎的活性，因此，首先从被测胚胎中取出几个细胞，提取_______________，然后用___________________的一段脱氧核苷酸序列作引物，进行PCR扩增。
（2）进行PCR扩增时，需用_______为模板，至少经____轮扩增，才可得到两条链等长的扩增产物。
（3）鉴定扩增产物，首先制备具有 __________基因特异性的探针，探针需用__________等作标记，出现阳性反应者，胚胎为_____性。
（4）退火过程中，为避免过多的模板DNA互补形成双链，引物应满足什么条件？_____（10个汉字内作答）

10 . 小白鼠因其具有容易饲养，繁殖率高，遗传上有较高的纯和度，代谢类型、生理病理特征与人类接近，全基因序列和人类高度相似，染色体数与人类非常接近等系列特征而成为人类实验研究的重要对象。据统计，全球每年有超过1亿的小白鼠被用来当作实验样本，它们可以说为人类医学作出了巨大的贡献。下图是科研人员利用小白鼠单倍体ES细胞（只有一个染色体组），成功培育出转基因小鼠的主要技术流程，请分析回答下列问题：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位点：Amp^r是氨苄青霉素抗性基因，Neo^r是G418抗性基因。
（1）目的基因是指在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或___________等的基因，主要是指___________的基因。
（2）利用PCR技术可以获取和扩增目的基因。PCR的全称是___________，其基本原理是___________。在PCR反应体系中，除含有缓冲液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物外，还应含有___________；引物应选用下图中的___________（填图中字母，字母表示引物）。PCR的每次循环，一般可以分为___________三步。PCR的产物一般通过___________来鉴定。

（3）已知氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo^r的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是___________（填图中的编号），③处的培养液中应添加__________（填“氨苄青霉素”或“G418”）。
（4）图中具有“转化”二字。在基因工程中，转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内___________的过程。