1 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

2 . 大量研究表明，家畜的肉类产量与肌生长抑制素（MSTN）基因有关，MSTN蛋白在体内主要调控骨骼肌的生长发育。多种动物研究已经证实，敲除基因MSTN可以显著增加动物的肌肉质量。科研人员希望利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得敲除了基因MSTN的家禽。请回答下列问题：

(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统原理如图1，Cas9酶可催化DNA分子的断裂，实现对目的基因的特异性切割，在切割过程中破坏的化学键是____________。图中向导RNA的作用是定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，其原理是____________。
(2)科研人员希望在鸡胚细胞中表达CRISPR/Cas9基因编辑系统，构建的基因表达载体如图2。

①在对向导RNA对应的DNA片段进行PCR扩增时，需要在其两端分别添加限制酶____________、____________的识别序列。
②用①中限制酶切割质粒和向导RNA对应的DNA片段，选择这种酶切方式的目的是____________。
③基因表达载体上，除了图示序列和标记基因外，还需要连接的DNA片段是____________。
(3)将鸡胚分为三组并提取DNA，用图2中的引物Ⅰ和引物Ⅱ进行PCR扩增，并对PCR结果进行电泳检测，结果如图3。

1组电泳的结果小于2组，其原因是____________。3组电泳无结果，其原因是____________。

3 . 土壤盐渍化会影响水稻生长发育，研究人员将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图所示，其中Tet^R为四环素抗性基因，Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，①~⑤表示操作过程。回答下列问题：

限制酶	BanHI	BclI	SmaI	Sau3AI
识别位点及切割位点	－G↓GATCC－	－T↓GATCA－	－CCC↓GGG－	－↓GATC－

(1)为了防止质粒自身环化，保证OsMYB56基因和酶切后的质粒定向连接，在目的基因复制前，设计PCR引物时最好在引物的_______端添加含有限制酶______的识别序列。根据上图信息可知，设计的引物序列一种是5'－CCCGGGTCTGTTGAAT－3'，另一种是_______（共写出16个碱基的序列）。
(2)过程②中需要先用_______处理根瘤农杆菌，使根瘤农杆菌处于_______的状态，以便将基因表达载体导入细胞。
(3)过程③中利用了质粒中的T－DNA______的特点；过程④中，从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素主要有生长素和________，该过程还需要光照，其作用是______（答出1点）。

4 . 传统的基因测序往往需要从大量细胞中提取DNA。科研人员应用单细胞基因组扩增技术，成功地在体外对分离得到的极体进行了基因组扩增（PCR），并完成了测序，从而推测出与被测极体同时产生的卵细胞不含致病基因，最终借助试管婴儿技术帮助女性遗传病患者获得健康婴儿，试管婴儿技术涉及体外受精、胚胎移植等技术。下列有关叙述，正确的是（　　）

A．被测极体的单细胞基因组只包含一个染色体组上的基因

B．体外扩增DNA需要引物，体内DNA复制不需要引物

C．精子获能指精子在获能液中获得ATP后才具备受精能力

D．PCR反应缓冲溶液中要添加Mg2+、耐高温的DNA解旋酶

5 . 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（       ）

A．操作过程中需要用到的工具有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体

B．构建表达载体时应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温

D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

6 . RDX是一种弹药使用后残留的危险污染物。研究人员将两个源于细菌的RDX 降解酶基因 XplA 和 XplB 插入柳枝稷草染色体中，如图所示，使柳枝稷草获得降解实弹射击场土壤中RDX的能力。若要通过PCR检测所获转基因柳枝稷草中是否含有正确插入的XplA 和 XplB 基因，应选择的引物组合是（　　）

   

A．引物 1+引物3

B．引物 1+引物4

C．引物2 +引物3

D．引物2+引物4

7 . DNA标记是DNA（或基因）中一些稳定的特征性碱基序列。选择相应的DNA标记进行PCR扩增，通过产物的电泳图谱可进行遗传病的基因定位。下图1为1号家庭甲、乙两种遗传病的相关基因（包含正常基因和致病基因）定位电泳图，图2为2号家庭甲、乙两种遗传病的家族遗传系谱图，已知甲乙两病中只有一种为显性遗传病。甲种遗传病的相关基因为A、a，乙种遗传病的相关基因为B、b，不考虑X、Y染色体同源区段上的基因。请回答下列问题：
   
(1)甲种遗传病的遗传方式是____，乙种遗传病的遗传方式是____。
(2)1号家庭和2号家庭中，儿子的基因型分别是____、____。
(3)若要判断1号家庭中父亲是否患有甲种遗传病，可选择____，对其甲种遗传病有关的DNA标记PCR扩增产物进行电泳，并将其电泳图与1号家庭父亲的电泳图进行比较。
(4)PCR技术除用于上述基因定位外，在基因工程中还可以用于____

8 . 某雌雄异株作物的性别决定方式为XY型，抗虫性状由两对独立遗传的等位基因A/a和B/b控制。现用纯合抗虫雌株和纯合不抗虫雄株交配产生F₁，F₁相互交配，F₂表型及比例为抗虫植株：不抗虫植株=15:1。回答下列问题：
(1)欲完成上述杂交实验需要对母本进行的操作是_____________。
(2)进一步统计的结果，若出现_____________，则可判断有一对基因位于X染色体。
(3)科学家从杂草中偶然获得一抗病基因E，运用基因工程技术将该基因导入与上述亲本作物基因型相同植株的染色体DNA上后，获得抗病植株甲、抗病植株乙。科学家利用荧光定量PCR技术，对F₁植株、雄株甲、雌株乙的等量体细胞进行检测，结果如图所示：
   
实验中检测中基因A的目的是_____________。为确定基因E导入的位置，科研人员将雄株甲与雌株乙杂交，统计子代植株表型及比例为抗病雄株：抗病雌株：不抗病雌株=2:1:1。请用“•”在下图中画出雄株甲与雌株乙中的组成体细胞中抗病基因E在染色体上的分布示意图_____________（注：画出抗病基因E的位置即可）。
   

9 . 科学家利用PCR技术扩增人乳头瘤病毒HPV-16L1基因，构建了含HPV-16L1基因的表达载体pBI-L1，经根瘤农杆菌介导转化，获得了转基因烟草植株。该技术利用转基因烟草作为生物反应器，生产出了纯度较高的HPV-16L1蛋白。下列说法错误的是（       ）

A．利用PCR扩增HPV-16L1基因的前提是已知该基因的一段碱基序列

B．构建表达载体pBI-L1时可使用两种不同限制酶以确保正确连接

C．必须选用烟草的受精卵作为受体细胞才能保证每个细胞中含有目的基因

D．可以用抗原一抗体杂交法检测再生植株是否表达出HPV-16L1蛋白

10 . PCR作为体外酶促反应体系，其效率和特异性取决于两个方面：一是引物与模板的特异性结合，二是Taq酶对引物的延伸。引物设计的总原则是提高扩增的效率和特异性。下列有关叙述错误的是（　　）

A．引物长度过短，特异性降低

B．经过5次循环后消耗引物64个

C．两种引物的碱基序列不能发生碱基互补配对

D．在第2轮循环产物中开始出现等长的目标DNA片段