1 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

2 . 土壤盐渍化会影响水稻生长发育，研究人员将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图所示，其中Tet^R为四环素抗性基因，Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，①~⑤表示操作过程。回答下列问题：

限制酶	BanHI	BclI	SmaI	Sau3AI
识别位点及切割位点	－G↓GATCC－	－T↓GATCA－	－CCC↓GGG－	－↓GATC－

(1)为了防止质粒自身环化，保证OsMYB56基因和酶切后的质粒定向连接，在目的基因复制前，设计PCR引物时最好在引物的_______端添加含有限制酶______的识别序列。根据上图信息可知，设计的引物序列一种是5'－CCCGGGTCTGTTGAAT－3'，另一种是_______（共写出16个碱基的序列）。
(2)过程②中需要先用_______处理根瘤农杆菌，使根瘤农杆菌处于_______的状态，以便将基因表达载体导入细胞。
(3)过程③中利用了质粒中的T－DNA______的特点；过程④中，从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素主要有生长素和________，该过程还需要光照，其作用是______（答出1点）。

3 . 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（       ）

A．操作过程中需要用到的工具有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体

B．构建表达载体时应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温

D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

4 . 科学家利用PCR技术扩增人乳头瘤病毒HPV-16L1基因，构建了含HPV-16L1基因的表达载体pBI-L1，经根瘤农杆菌介导转化，获得了转基因烟草植株。该技术利用转基因烟草作为生物反应器，生产出了纯度较高的HPV-16L1蛋白。下列说法错误的是（       ）

A．利用PCR扩增HPV-16L1基因的前提是已知该基因的一段碱基序列

B．构建表达载体pBI-L1时可使用两种不同限制酶以确保正确连接

C．必须选用烟草的受精卵作为受体细胞才能保证每个细胞中含有目的基因

D．可以用抗原一抗体杂交法检测再生植株是否表达出HPV-16L1蛋白

5 . PCR作为体外酶促反应体系，其效率和特异性取决于两个方面：一是引物与模板的特异性结合，二是Taq酶对引物的延伸。引物设计的总原则是提高扩增的效率和特异性。下列有关叙述错误的是（　　）

A．引物长度过短，特异性降低

B．经过5次循环后消耗引物64个

C．两种引物的碱基序列不能发生碱基互补配对

D．在第2轮循环产物中开始出现等长的目标DNA片段

6 . 荧光定量PCR技术可定量检测样本中的DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当子链延伸至探针处时会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有一个荧光分子生成，荧光监测系统随时接收荧光信号的变化，如图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．在反应体系中，检测到的荧光信号越强则消耗的引物越多

B．1个DNA分子经过3次循环会得到8个两条链等长的DNA分子

C．PCR所用引物1和引物2均是由脱氧核苷酸组成的

D．人工设计合成的引物1的碱基序列不能与引物2的互补配对

7 . 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：

(1)从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
(2)在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)构建的pMD19-DGATl导入经CaCl₂溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
(4)用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。

8 . PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作:①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题:
(1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是____________(用数字序号表示)。
(2)操作③中使用的酶是_____。PCR中的每次循环可分为变性、复性、__三步， 其中复性的结果是______________。
(3)为了做出正确的诊断，PCR所用的引物应该能与___________特异性结合。
(4)PCR是__________的缩写。它是一项根据________________的原理，在生物体外大量快速扩增特定DNA片段的技术。PCR的产物常用_________来鉴定。
(5)基因工程的操作的基本程序:_____；______；_______；_______。

9 . 新冠病毒的遗传物质是单链RNA，其主要的抗原是S蛋白，可利用荧光PCR技术快速检测核酸。被检测者咽拭子取样后，用提取的总RNA合成相应的cDNA，再用PCR技术进行扩增。若样本扩增出了新冠病毒特定的核酸序列，则检测结果为阳性，检测过程如下图所示。回答下列问题：

(1)为扩增出S蛋白基因（核酸序列），过程①应以________________作为模板来合成相应的cDNA。过程②是通过PCR技术进行扩增，该技术包括_______________________三个步骤。
(2)过程②的反应体系中加入了种引物，Taq酶四种脱氧核苷酸等物质，同时控制温度才能进行，最后通过荧光标记的基因探针对扩增产物进行检测。Taq酶主要的特点是__________，加入四种脱氧核苷酸的作用是_____________________。
(3)通过荧光标记的基因探针对扩增产物进行检测，利用的原理是_________________。
(4)3月12日，国家药监局批准五款新冠抗原自测产品上市。抗原检测有利于对疑似人群的早期分流和快速管理，与核酸检测相比，抗原检测虽然不够灵敏，但是有__________的优点；实际使用中发现，若人体感染了其他病毒，不会造成抗原检测假阳性，原因是_____________。

10 . 下图表示形成DNA并进行PCR扩增的过程。据图分析，下列叙述正确的是（       ）

A．①过程需要逆转录酶

B．②过程所需的原料是核糖核苷酸

C．③过程需要解旋酶破坏氢键

D．④过程的两种引物之间能互补配对