1 . 大量研究表明，家畜的肉类产量与肌生长抑制素（MSTN）基因有关，MSTN蛋白在体内主要调控骨骼肌的生长发育。多种动物研究已经证实，敲除基因MSTN可以显著增加动物的肌肉质量。科研人员希望利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得敲除了基因MSTN的家禽。请回答下列问题：

(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统原理如图1，Cas9酶可催化DNA分子的断裂，实现对目的基因的特异性切割，在切割过程中破坏的化学键是____________。图中向导RNA的作用是定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，其原理是____________。
(2)科研人员希望在鸡胚细胞中表达CRISPR/Cas9基因编辑系统，构建的基因表达载体如图2。

①在对向导RNA对应的DNA片段进行PCR扩增时，需要在其两端分别添加限制酶____________、____________的识别序列。
②用①中限制酶切割质粒和向导RNA对应的DNA片段，选择这种酶切方式的目的是____________。
③基因表达载体上，除了图示序列和标记基因外，还需要连接的DNA片段是____________。
(3)将鸡胚分为三组并提取DNA，用图2中的引物Ⅰ和引物Ⅱ进行PCR扩增，并对PCR结果进行电泳检测，结果如图3。

1组电泳的结果小于2组，其原因是____________。3组电泳无结果，其原因是____________。

2 . RDX是一种弹药使用后残留的危险污染物。研究人员将两个源于细菌的RDX 降解酶基因 XplA 和 XplB 插入柳枝稷草染色体中，如图所示，使柳枝稷草获得降解实弹射击场土壤中RDX的能力。若要通过PCR检测所获转基因柳枝稷草中是否含有正确插入的XplA 和 XplB 基因，应选择的引物组合是（　　）

   

A．引物 1+引物3

B．引物 1+引物4

C．引物2 +引物3

D．引物2+引物4

3 . DNA标记是DNA（或基因）中一些稳定的特征性碱基序列。选择相应的DNA标记进行PCR扩增，通过产物的电泳图谱可进行遗传病的基因定位。下图1为1号家庭甲、乙两种遗传病的相关基因（包含正常基因和致病基因）定位电泳图，图2为2号家庭甲、乙两种遗传病的家族遗传系谱图，已知甲乙两病中只有一种为显性遗传病。甲种遗传病的相关基因为A、a，乙种遗传病的相关基因为B、b，不考虑X、Y染色体同源区段上的基因。请回答下列问题：
   
(1)甲种遗传病的遗传方式是____，乙种遗传病的遗传方式是____。
(2)1号家庭和2号家庭中，儿子的基因型分别是____、____。
(3)若要判断1号家庭中父亲是否患有甲种遗传病，可选择____，对其甲种遗传病有关的DNA标记PCR扩增产物进行电泳，并将其电泳图与1号家庭父亲的电泳图进行比较。
(4)PCR技术除用于上述基因定位外，在基因工程中还可以用于____

4 . 某雌雄异株作物的性别决定方式为XY型，抗虫性状由两对独立遗传的等位基因A/a和B/b控制。现用纯合抗虫雌株和纯合不抗虫雄株交配产生F₁，F₁相互交配，F₂表型及比例为抗虫植株：不抗虫植株=15:1。回答下列问题：
(1)欲完成上述杂交实验需要对母本进行的操作是_____________。
(2)进一步统计的结果，若出现_____________，则可判断有一对基因位于X染色体。
(3)科学家从杂草中偶然获得一抗病基因E，运用基因工程技术将该基因导入与上述亲本作物基因型相同植株的染色体DNA上后，获得抗病植株甲、抗病植株乙。科学家利用荧光定量PCR技术，对F₁植株、雄株甲、雌株乙的等量体细胞进行检测，结果如图所示：
   
实验中检测中基因A的目的是_____________。为确定基因E导入的位置，科研人员将雄株甲与雌株乙杂交，统计子代植株表型及比例为抗病雄株：抗病雌株：不抗病雌株=2:1:1。请用“•”在下图中画出雄株甲与雌株乙中的组成体细胞中抗病基因E在染色体上的分布示意图_____________（注：画出抗病基因E的位置即可）。
   

5 . 被称为“水中小白鼠”的斑马鱼是一种体长4厘米左右的热带淡水鱼，与人类基因同源性高达87%，并有相似的器官、生理功能和信号通路。由于发育周期短、费用低、体外受精、透明等优点，斑马鱼现在越来越广泛地应用于毒性检测、疾病模型创制、药物筛选等领域中。
研究人员欲通过使胰岛素基因表达受阻从而构建糖尿病模型斑马鱼。吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，通过将其注入斑马鱼受精卵可阻碍相关基因的表达。针对其作用原理，现有两种假说：
假说1：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切。
假说2：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。
   
为了验证上述假说，研究人员进行了如下实验：
(1)从受精卵发育了3天的实验组和对照组的细胞中提取总RNA，再通过逆转录获得cDNA。若假说1成立，选择上图所示引物2和引物3进行PCR后的结果为______（填字母）。

A．实验组有杂交带

B．实验组无杂交带

C．对照组有杂交带

D．对照组无杂交带

(2)若要证明假说2成立，进行PCR时，需要选择上图所示引物组合有__________。
(3)采用PCR技术扩增DNA需要引物的原因是__________________。
(4)为了获取大量斑马鱼胚胎干细胞用于药物筛选，可加入__________________，用于分散斑马鱼囊胚中的__________________。再取分散细胞作为初始材料进行______培养，然后分瓶继续培养。