1 . 大量研究表明，家畜的肉类产量与肌生长抑制素（MSTN）基因有关，MSTN蛋白在体内主要调控骨骼肌的生长发育。多种动物研究已经证实，敲除基因MSTN可以显著增加动物的肌肉质量。科研人员希望利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得敲除了基因MSTN的家禽。请回答下列问题：

(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统原理如图1，Cas9酶可催化DNA分子的断裂，实现对目的基因的特异性切割，在切割过程中破坏的化学键是____________。图中向导RNA的作用是定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，其原理是____________。
(2)科研人员希望在鸡胚细胞中表达CRISPR/Cas9基因编辑系统，构建的基因表达载体如图2。

①在对向导RNA对应的DNA片段进行PCR扩增时，需要在其两端分别添加限制酶____________、____________的识别序列。
②用①中限制酶切割质粒和向导RNA对应的DNA片段，选择这种酶切方式的目的是____________。
③基因表达载体上，除了图示序列和标记基因外，还需要连接的DNA片段是____________。
(3)将鸡胚分为三组并提取DNA，用图2中的引物Ⅰ和引物Ⅱ进行PCR扩增，并对PCR结果进行电泳检测，结果如图3。

1组电泳的结果小于2组，其原因是____________。3组电泳无结果，其原因是____________。

2 . 土壤盐渍化会影响水稻生长发育，研究人员将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图所示，其中Tet^R为四环素抗性基因，Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，①~⑤表示操作过程。回答下列问题：

限制酶	BanHI	BclI	SmaI	Sau3AI
识别位点及切割位点	－G↓GATCC－	－T↓GATCA－	－CCC↓GGG－	－↓GATC－

(1)为了防止质粒自身环化，保证OsMYB56基因和酶切后的质粒定向连接，在目的基因复制前，设计PCR引物时最好在引物的_______端添加含有限制酶______的识别序列。根据上图信息可知，设计的引物序列一种是5'－CCCGGGTCTGTTGAAT－3'，另一种是_______（共写出16个碱基的序列）。
(2)过程②中需要先用_______处理根瘤农杆菌，使根瘤农杆菌处于_______的状态，以便将基因表达载体导入细胞。
(3)过程③中利用了质粒中的T－DNA______的特点；过程④中，从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素主要有生长素和________，该过程还需要光照，其作用是______（答出1点）。

3 . 下列有关基因工程技术的原理或实质的叙述，合理的有（       ）
①基因诊断的基本原理是DNA分子杂交；②基因治疗的原理是将正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能；③DNA探针技术的原理是探针与样品中变性处理的DNA单链配对杂交；④构建基因表达载体的实质是基因突变；⑤PCR技术的实质是体外复制特定DNA片段的核酸合成技术

A．一项	B．两项
C．三项	D．四项

4 . PCR（多聚酶链式反应）技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示PCR的反应过程，请据图分析回答下列问题：

（1）A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是(       )
a．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键          b．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键
c．该过程高温使双链DNA解旋变为单链          d．该过程与人体细胞的过程完全相同
（2）C过程要用到的酶是耐高温的。这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以________加入（填一次性或多次）。PCR反应除提供耐高温的_______酶外，还需要满足的基本条件有：在一定的缓冲溶液中进行、以DNA______条链做模板、与模板链相结合的两种_______、四种_______为原料，通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
（3）如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“95℃－55℃－72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占_________。

5 . 下列关于PCR技术的叙述，正确的是（　　）

A．PCR技术对扩增的目的基因序列是完全未知的

B．该技术需要解旋酶和热稳定的DNA聚合酶

C．该技术需要一对特异性的引物，要求一对引物的序列是互补的

D．该技术应用体内DNA双链复制原理，也需要模板、原料、能量、酶等条件

6 . 如图为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（       ）

A．催化①过程的酶是RNA聚合酶

B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合

C．催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温

D．如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%

7 . 利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是（       ）

A．第四轮循环产物中PCR方法扩增出的目的基因片段只有8个

B．设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连

C．退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物

D．第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比率为15/16

8 . 利用PCR技术扩增目的基因的过程中，需加入

A．耐高温的解旋酶以保证DNA双链完全解开

B．2种已知核苷酸序列的引物以保证核苷酸链的延伸

C．4种足量的核糖核苷酸以保证目的基因的扩增

D．—定量的盐酸和氢氧化钠溶液以维持pH的稳定

9 . 下列有关生物工程的叙述，不正确的有（     ）
①基因工程的核心步骤是构建基因表达载体
②蛋白质工程可通过直接改造蛋白质的结构从而改变其功能
③克隆羊的培育涉及细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术
④PCR技术需要利用限制性核酸内切酶打开DNA双链
⑤利用核移植技术可以培育试管婴儿
⑥牛胚胎发育的历程是：受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体
⑦利用动物细胞培养技术和细胞融合技术可以制备单克隆抗体
⑧利用植物茎尖培养脱毒苗时，需要对离体的茎尖、培养基等进行灭菌

A．一项

B．两项

C．三项

D．四项