1 . 人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白，需经过内质网和高尔基体加工后才具备活性。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的部分过程，图中Tet^r表示四环素抗性基因，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTA↑GG	GG↓CC CC↑GG	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	GC↓GGCCGC CGCCGG↑CG

(1)图中质粒上的Amp^r和Tet^r作为标记基因，其作用是__________________。在基因工程中作为载体的质粒应具备的基本条件有_________（至少答出2点）。
(2)若选用牛作为转基因动物，可将人乳铁蛋白基因与________________的启动子等调控组件重组在一起，可通过____________方法将基因表达载体导入受精卵中，然后使其发育成转基因动物。
(3)要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_______，若BamH Ⅰ酶切的DNA末端与Bcl Ⅰ酶切的DNA末端连接起来，形成有6个碱基对序列的连接部位，对于该部位，这两种酶____________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。
(4)利用PCR技术扩增目的基因时，若扩增后得到了32个人乳铁蛋白基因，则该过程共需要_____个引物。PCR引物应该添加在识别序列的__________（填“3′或5′”）端。PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有__________。
A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在复性过程起作用
B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率
C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
D．琼脂糖溶液中加入的指示剂利于DNA在紫外灯下被检测

2 . 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的有（       ）
①用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术
②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
③胚胎移植作为胚胎工程的最后技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用
④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
⑤利用基因工程技术的生物反应器，可以让哺乳动物批量生产相应的药物
⑥蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础，逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质

A．2项

B．3项

C．4项

D．5项

3 . 下图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程，其原理与细胞内DNA复制类似。下列叙述错误的是（　　）

A．用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸，在设计引物时，应尽量避免引物自身或引物之间发生碱互补配对，影响扩增的效果

B．从理论上推测，第n轮循环后同时含有引物A、B的DNA分子占的比例为（2n-1）/2n

C．在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段

D．PCR的产物一般可以利用琼脂糖凝胶电泳技术来鉴定，DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度都会影响DNA在凝胶中的迁移速率

4 . 下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述中，错误的是（       ）

A．可将提取到的白色丝状物与二苯胺试剂充分混匀，沸水浴加热后变蓝

B．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶可在延伸过程中起作用

C．琼脂糖溶液混合的核酸染料与DNA分子结合，便于在紫外灯下观察

D．DNA的粗提取与鉴定实验中可利用DNA不溶于酒精而某些蛋白质溶于酒精来粗提DNA

5 . 科学家常用PCR特异性地快速扩增目的基因，下列关于PCR技术的叙述，正确的有（　　）

A．与细胞内DNA复制相比，PCR用的DNA聚合酶最适温度较高

B．PCR技术的过程包括变性、复性和延伸三步

C．PCR过程中消耗引物的量与循环次数无关

D．PCR反应需要在一定的缓冲液中才能进行

6 . 抗凝血酶Ⅲ是一种药用蛋白，对预防和治疗静脉血栓、心肌梗死、脑血管病变具有重要作用。为了提高抗凝血酶Ⅲ的产量，科研人员设计利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备抗凝血酶Ⅲ，并获得了成功。制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程如图1所示。回答下列问题：

(1)获取了抗凝血酶Ⅲ基因后，需要通过PCR技术对该基因进行扩增，扩增的原理是____，扩增抗凝血酶Ⅲ基因的过程中一般不需要使用解旋酶，原因是____。
(2)图1过程③在基因工程操作步骤中属于____，切割质粒DNA的工具酶是____，能将特定部位的两个核苷酸之间的____断开。操作工程中需要将抗凝血酶Ⅲ基因插入到启动子与____之间，其中启动子的作用是____。
(3)获取重组质粒后，将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子，其中精子要进行____处理才具备受精的能力。图1中步骤④常用的方法是____。

7 . 中国科学家在广西获得了一块距今2.4万年的古大熊猫化石。将该化石中提取到的线粒体DNA 通过测序分析和比较，发现古大熊猫与现存大熊猫的相关 DNA 序列高度相似，且大熊猫与熊类有共同的远古祖先。下列叙述，不合理的是（　　）

A．化石证据结合分子生物学分析，可为大熊猫进化提供更可靠的证据

B．化石中提取的线粒体DNA 通过PCR 进行扩增，作为测序的材料

C．该研究对获得大熊猫和熊类远古父系祖先的相关信息有直接帮助

D．造成现存大熊猫与古大熊猫基因差异的根本原因是发生了突变

8 . 单个B细胞抗体技术可用于制备高亲和力、高特异性的单抗，其技术流程如下：①康复者单个B淋巴细胞的分离和筛选；②利用RT-PCR获取和扩增抗体基因；③构建基因表达载体；④将抗体基因导入动物细胞；⑤单抗的筛选和鉴定。下列叙述错误的是（　　）

A．操作①选用单个B淋巴细胞以保证最终获得纯度较高的单抗

B．操作②使用的PCR反应体系常添加Mg2+以激活DNA聚合酶

C．操作③常用两种限制酶切割抗体基因和载体以防止其自身环化

D．操作④前可用Ca2+处理受体细胞促使其主动吸收DNA分子

9 . 为探究M基因的功能，科研人员利用基因工程技术将M基因导入拟南芥中，培育出转M基因拟南芥植株，相关流程如图所示，其中b过程利用了PCR技术。下列相关叙述错误的是（       ）

   

A．a、b过程中所需要的酶分别是逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶

B．b过程中将温度降至50℃左右的目的是将双链DNA解聚为单链

C．e过程中，Ti质粒的T-DNA可携带着M基因转移到拟南芥细胞中

D．获得的转M基因拟南芥植株自交，子代可能会发生性状分离

10 . 人血白蛋白在临床上被广泛应用。我国科学家通过生物工程技术在水稻胚乳中提取到人血白蛋白，其流程如下图所示。下列叙述正确的是（　　）

A．PCR扩增时需要DNA模板、引物、耐高温的RNA聚合酶等条件

B．过程①需用农杆菌转化法将人血白蛋白基因直接导入水稻胚乳细胞中

C．过程①需将目的基因与胚乳中特异性表达基因的启动子等调控元件重组

D．过程②改变生长素和细胞分裂素的浓度及比例不影响细胞的脱分化过程