1 . 为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用农杆菌转化法将水稻的耐低蹄基因OsPTF转移到大豆植株中，下图为重组Ti质粒上T一DNA的序列结构示意图。下列相关叙述错误的是（       ）

A．以水稻RNA为模板通过逆转录及PCR扩增可获得大量OsPTF基因

B．RNA聚合酶与启动子1识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录

C．可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的基因的大豆愈伤组织

D．用EcoRI、BamHI酶同时切重组Ti质粒后，经电泳分离至少得到两条不同长度的带

2 . 目前研究混杂DNA群体中的特异DNA序列，一般基于两种不同的方法，即DNA克隆和DNA分子杂交，如图所示。下列有关叙述错误的是（       ）

A．方法①需要限制酶和DNA连接酶

B．方法②需要解旋酶和DNA聚合酶

C．方法③需要对探针进行特殊标记

D．方法①②③都遵循碱基互补配对原则

3 . 如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR I酶切为例）：

请据图回答问题：
（1）步骤I用的EcoR I是一种__________酶，它通过识别特定的__________切割特定位点。
（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′-羟基与5′-磷酸间形成__________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。
（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________（从引物①②③④中选择，填编号）。

	DNA序列（虚线处省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物	①5′- AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′- GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ③5′- AGAGGCTACGCATTGC-3′ ④5′- TCATGAGCGCATAGTT-3′

（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是_________________。
A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′
B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′
C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D． 5′- TTGATACGC----------CGAGTAC-3′

4 . 苯丙酮尿症是PKU基因突变引起，研究人员尝试用基因治疗的方式治疗该疾病，即将正常基因D导入携带有突变基因的细胞中。下图中的图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因 D的DNA片段，图丙表示重组载体的示意图。其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因（基因表达的产物将无色化合物X-gal转化成一种蓝色物质，菌落呈蓝色），EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知 1 Kb＝1 000 个碱基对。请结合所学知识回答：


（1）将正常的D基因导入受体细胞的基因工程操作步骤中，其核心是________，据图分析上述甲图中三种质粒中不宜作为运载体的有________，请分析原因________。
（2）若要获取目的基因D，上述乙图中应选择限制酶________对其所在的DNA进行切割。如果仅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，通常可根据该基因首尾两端的已知核苷酸序列合成________，利用________技术得到大量目的基因。
（3）将目的基因 D 和甲图中可做载体的质粒进行连接后，会得到图丙中三种连接方式。需要选出正向连接的重组质粒，可使用________酶切割所获得的重组质粒。完全酶切后，进行电泳分析。若是载体自连，电泳图谱中出现 2.7Kb 一条带，若是正向连接载体和反向连接载体，电泳图谱中出现长度分别为________和________。
（4）选择自身不含lacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，在已转化的含重组质粒、空质粒的受体细胞中和未转化成功的细胞中如何筛选出成功导入重组质粒的受体细胞_______________。

5 . 阅读下列有关病毒的材料并回答题目。
Ⅰ．2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”，为有包膜病毒。颗粒呈圆形或椭圆形，直径50～200nm。颗粒表面有棒状突起，使病毒表面看起来形如花冠，故而得名。2019-nCoV基因组长度为29．8Kb，为单股正链RNA，其5’端为甲基化帽子，3’端有多聚腺苷酸（PolyA）结构，可直接作为翻译模板。截至2020年3月25日上午10时，世界范围确诊感染此病毒的人数已累计达到412461人。
（1）下列选项错误的是_____

A．细胞膜能控制物质进出，故该病毒只能侵染受损细胞，使人患病
B．由于没有核糖体，这种病毒无法合成蛋白质，其包膜组成一定不含蛋白质
C．病毒的遗传物质水解后可产生一分子核苷，一分子含氮碱基与一分子磷酸
D．此病毒的单股正链RNA，只有转录形成对应的负链RNA才能附着在细胞的核糖体上
（2）这种病毒的遗传物质为_____，研究人员紧急研发了核酸检测试剂盒，以此来检测病毒，检测此病毒的核酸可使用_______法。研究人员发现，病毒的中间宿主为蝙蝠，某些情况下，病毒可在不同动物身体内翻译出基本相同的多肽链，这是因为_____。
（3）病毒入侵人体后，引起相关细胞分泌抗体，该抗体并不会与其他病症的抗原结合，这体现了________，此原理也可应用于该病的检测。若要用细胞工程的方法生产针对2019-nCoV上抗原的单克隆抗体，用到的技术有_________和_________。
（4）将2019-nCoV不稳定的RNA转换成DNA后，技术人员常采用荧光定量PCR技术定量检测样本中病毒的核酸含量。其原理如图：在PCR反应体系中每加入一对引物的同时，加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当_________催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。反应最终的荧光强度与PCR起始状态_________含量呈正相关。

Ⅱ．朊病毒是一种只含蛋白质而不含核酸的病原微生物。按图示1→2→3→4进行实验，验证朊病毒侵染因子是蛋白质，题中所用牛脑组织细胞为无任何标记的活体细胞。

（1）本实验采用的研究方法是______。
（2）从理论上讲，经1→2→3→4实验离心后上清液中______（填“能大量”或“几乎不能”）检测到³²P，沉淀物中___________（填“能大量”或“几乎不能”）检测到³²P，出现上述结果的原因是：_________。
（3）如果添加试管5，从试管2中提取朊病毒后先加入试管5同时添加³⁵S标记的（NH₄）₂³⁵SO₄，连续培养一段时间后，再提取朊病毒加入试管3，培养适宜时间后离心，检测放射性应主要位于_______中，少量位于_______中，原因是：_____________。
（4）一般病毒的增殖同朊病毒之间的最主要区别是：一般的病毒侵染细胞是向宿主细胞提供________（物质），利用宿主细胞的_______________等物质进行增殖。

6 . 为了研究拟南芥的基因A、B在减数分裂中的功能，研究人员开展了如下实验。
（1）通过_________法将含卡那霉素抗性基因的T-DNA插入到野生型（AABB）拟南芥基因组中，在含_________的培养基中培养，筛选得到基因型分别为AaBB和AABb的单突变体。
（2）将上述得到的两种单突变体杂交得到F₁，F₁中具有卡那霉素抗性的植株占_____。将具有卡那霉素抗性的F₁分单株种植，收获F₂单独统计，若F₂中抗性：不抗性=15:1，则说明F₁的基因型为_____, 其F₂抗性植株中纯合子的比例为_____。

（3）F₂中各植株的茎叶相似，无法区分。为进一步筛选得到F₂中的突变体纯合子，提取F₂抗性植株的叶片DNA，分别用引物“P1+ P3”组合及“P2+P3”组合进行PCR，检测是否扩增，鉴定原理如下图所示。（插入T-DNA的A基因过大，不能完成PCR）若_________，则相应植株为抗性纯合子aa。依据同样的原理，可得到bb。
（4）下图为两种突变体拟南芥减数分裂过程中的染色体行为变化。据图推测，基因A和B的突变会导致减数分裂发生的变化分别是_________和_________。

7 . 在拟南芥种子发育过程中，由受精极核（相当于含有一套精子染色体和两套卵细胞染色体）发育的胚乳到一定时期会被子叶完全吸收。在拟南芥种子萌发过程中，子叶的功能是为胚发育为幼苗提供营养。
（1）M基因具有抑制胚乳发育的作用。研究者利用___________法将T-DNA插入到拟南芥的M基因中，使M基因功能丧失（记为m），导致胚乳发育过度，而使种子败育。
（2）M基因具有M^D、M^R两种等位基因，为研究M基因的遗传规律，研究者用不同基因型的拟南芥进行杂交实验（如下表）。

	实验一	实验二	实验三	实验四
母本	MDMD	MRMR	MDMD	MDm
父本	MRMR	MDMD	MDm	MDMD
F1种子育性	可育	可育	可育	1/2可育 1/2败育

表中的正反交实验有_________。分析实验一和实验二，可得出的结论是M^D和M^R不影响_________。依据实验三和四的结果推测，来自______（选填“母本”或“父本”）的M基因不表达。
（3）为进一步用杂交实验验证上述推测，将实验三的F₁植株全部进行自交，若推测成立，F₁植株所结种子中能发育成植株的占_________。
（4）为从分子水平再次验证上述推测，研究者对实验一和实验二中所结种子的M基因的转录水平进行鉴定，结果如图1。

①鉴定杂交结果时，分别提取种子中胚和胚乳的总RNA，通过______获得cDNA，进行PCR扩增后电泳。结果表明________________。
②进行上述实验后，研究者提取M^DM^D和M^RM^R植株细胞的总RNA，按不同比例进行混合，按同样方法获得电泳结果，如图2。

依据图2中_________，说明由图1结果得出的结论是可信的。
（5）根据上述研究，拟南芥的M基因具有独特的遗传规律。请从胚乳的染色体组成角度，分析这种遗传规律对种子发育的生物学意义__________。

8 . 下图1是获取用于构建基因表达载体的含人生长激素基因的DNA片段(DNA复制子链延伸方向是5′→3′，转录方向为左→右)示意图，图2是所用质粒示意图，其上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^t表示四环素抗性基因。有关限制酶的识别序列和酶切位点如下表。请据图回答：

限制酶识别序列和酶切位点表

限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	SmaⅠ	BglⅡ
识别序列(5′→3′)	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TGCAG	G↓AATTC	CCC↓GGG	A↓GATCT

(1) ①过程催化形成磷酸二酯键的酶有____________________，合成的人生长激素基因中________(选填“有”或“无”)与终止密码子相应的碱基序列。
(2) 引物1由5′→3′的碱基序列为________________________，引物2应含有限制酶________的识别序列；从图1的过程②开始进行PCR扩增，第六次循环结束时，图中用于构建基因表达载体的DNA片段所占比例是________。
(3) 在构建表达载体的过程中对图中质粒、DNA片段进行合适的完全酶切后，向两者的混合物中加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成________种环状DNA。

(4) 2018年11月基因编辑婴儿事件震惊了世界，舆论一片哗然，某科研团队利用“CRISPR/Cas9”技术将受精卵中的艾滋病病毒受体基因CCR5进行修改，拟培育出具有艾滋病免疫能力的基因编辑婴儿。下图3为向导RNA引导Cas9蛋白切割CCR5基因(目标DNA)示意图。
①向导RNA的合成需要________酶。Cas9蛋白是一种________酶。
②“GRISPR/Cas9”技术，是利用________法将Cas9蛋白和特定的引导序列导入受精卵中发挥基因编辑作用。
③基因编辑婴儿引起舆论的关注，很多科学家表示反对，请给出合理的理由______________。

9 . 下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

请据图回答：
⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在_______酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在________作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的_______序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的________序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、_______、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为______。
⑷在基因工程中，常用Ca^2＋处理D，其目的是______________________。

10 . 【生物——选修3现代生物科技专题】
RT－PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如图所示：

(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、_____________、_______________和引物A等。
(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃，其目的是__________________，该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受_________℃。
(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要_________个引物B。
(4)利用RT－PCR技术获取的目的基因_______________ (填“能”或“不能”)在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是_______。
(5)RT－PCR过程中主要借助对_____________________的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行。