1 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）海南粗榧是一种濒危植物，其产生的三尖杉碱对急性及慢性粒细胞白血病和恶性淋巴病有较好的疗效。请回答有关问题：
（1）测定不同来源海南粗榧植株的三尖杉碱含量：精确称取10mg三尖杉碱标准品，溶于甲醇并________至5ml容量瓶中，配制成2mg/ml的母液，再将母液分别________成一系列浓度的工作液各2ml，加入显色剂，测定光密度值（OD值），绘制标准曲线。如果实验中发现OD值太大不利于作图，应该________（增大、减小）光程。
（2）在对海南粗榧进行组织培养的时候，首先配制MS培养基，其中CuSO₄提供________（A．大量元素   B．微量元素   C．有机成分   D．能源），在MS培养基的基础上再配制发芽培养基和生根培养基，分装到三角瓶中，加上封口膜后在________压力下灭菌20分钟待用。
（3）三尖杉碱属于________代谢产物，可以通过二段法进行细胞悬浮培养，即细胞系先在生长培养基中培养一段时间以累积________________，再转入生产培养基促使细胞大量合成有效三尖杉碱，从而实现工业化生产。
（二）研究人员利用基因敲除技术将猪的肌生成抑制蛋白基因敲除，从而得到了高骨骼肌含量的克隆猪。请回答有关问题：
（1）常用基因敲除技术是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以定点修饰改造染色体上某一基因。相对传统的转基因技术，该基因敲除技术的最大优点是________________。要实现敲除肌生成抑制蛋白基因的目的，首先要构建替换型打靶载体，该过程中需要的工具酶有________________。
（2）将替换型打靶载体通过显微注射法导入猪胚胎干细胞，胚胎干细胞是从着床前胚胎分离出的________的细胞，它具有向各种组织细胞分化的潜能。培养猪胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，这层细胞一般是________________。
（3）筛选出靶细胞，导入猪的________中，再将其植入代孕猪体内，使其发育成嵌合体猪，再经过回交、筛选就可以得到肌生成抑制蛋白基因敲除纯合体。为了快速扩大基因敲除猪的种群，除进行有性生殖外，还可以采取胚胎分割和________技术。
（4）为证明肌生成抑制蛋白基因敲除猪的表现型改变确实是由于敲除了该基因的缘故，可以通过导入肌生成抑制蛋白基因或者直接注射________，如果猪表现型转为正常，说明确实是由于敲除了肌生成抑制蛋白基因的缘故。

2 . 紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的一种代谢产物，具有显著的抗癌效果。科研人员设计如图一所示流程制备紫杉醇。为了获得大量的紫杉醇，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：

（1）图一中，为了防止微生物污染，过程①所用的外植体需在______________溶液中摇动几秒。过程②通常需用______________酶处理将愈伤组织分散成单个细胞。
（2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图二所示，细胞干重在12d后下降的原因有_____________ ；培养液中适量的蔗糖不仅可以为培养的细胞提供能源，还可以调节培养基的______。
（3）多倍体愈伤组织细胞产生的代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经______________处理，会产生染色体加倍的细胞。
（4）为了培养能高效产生紫杉醇的红豆杉柴胡植株，科研人员将红豆杉的愈伤组织和柴胡的愈伤组织用酶处理后，获得有活力的原生质体，再用诱导剂______________使其融合，最后选择能够高效合成紫杉醇的杂交细胞进行培养。
（5）红豆杉的形成层在生长发育过程中并不能合成紫杉醇的根本原因是______________。

3 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）混菌发酵是指利用两种以上具有共同作用的微生物，联合完成某种发酵的新型技术，回答下列与发酵有关的问题。
芒果挑选和清洗→打浆→___?___→加热→过滤→灭菌→果酒发酵→果醋发酵→澄清→成品芒果醋
（1）某研究所打算开展芒果醋的研究，若该研究考虑混合菌发酵，则最可能选择________菌。如图为芒果醋酿造的工艺流程图，图中“?”处应填写为_________。
（2）芒果醋发酵过程中需提供的氧气条件是________________________________________，影响其产物风味的原因有___________________________（至少写两点）。
（3）为提高乙酸含量和缩短发酵时间，科研人员开展了酵母菌接种量对发酵影响的实验，实验结果见图：

当酵母菌接种量超过0．15%时，___________明显下降，原因最可能是___________________________。
（4）发酵结束后，发酵液常需进行_______________处理，若滤液还是浑浊，可采取静置沉淀、加热或___________等方法获得澄清果醋。
（二）回答下列关于植物克隆方面的问题：
（1）在不断搅动或摇动的液体培养基中进行的培养叫植物细胞液体悬浮培养，通过该方法可获得药用植物细胞的______________产物，如抗癌药物紫杉醇等。
（2）进行培养的细胞大多数来自愈伤组织，愈伤组织通过长时期的___________培养，多个细胞之间发生了_____________差异，筛选出生长速度快、次生代谢产物积累多的细胞系。该培养基可选择含有大量元素、___________和有机物的MS基本培养基。
（3）在培养方法上可选择先使用适用________________的生长培养基，然后再使用产物合成培养基。
（4）如图表示某植物体内物质的合成图：

由代谢过程图可知，可通过人工增加______________物质来提高C物质的产量，原理是______________。促进更多的B物质转化为C物质，也可以通过克隆酶2基因并进行________________，然后转基因构建出C物质高产细胞系。

4 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与微生物培养及应用有关的问题：
（1）在利用微生物时，为消除污染杂菌，通用的方法是______。培养微生物时需要对各种用具进行灭菌，置于超净台上的用具可利用____灭菌30分钟。
（2）米酒酿造过程中，常利用黑曲霉使淀粉糖化，原因是黑曲霉能分泌α-淀粉酶、β淀粉酶及____酶，可以将淀粉分解为葡萄糖。黑曲霉使米饭中淀粉糖化所需的发酵条件是___ （A.有氧和较高温度   B.有氧和较低温度   C.无氧和较高温度   D.无氧和较低温度）。
（3）尿素固体培养基可用于分离产______的细菌，尿素分解为氨后被细菌吸收可用于合成_______________（答出2点即可）。
（4）以稀释的果酒为原料发酵制作果醋，果醋中醋酸浓度一般不超过5%。其主要原因是当发酵液中的醋酸浓度接近5%时_______，不能继续生成醋酸。果醋发酵完毕后可以在发酵液中加入一定浓度的食盐并密封，目的是__________，以免醋酸进一步氧化分解。
（二）回答与利用生物技术培育抗盐品种有关的问题：
（1）为获得大量抗盐基因，可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增，原因是质粒具有_______________的特点。
（2）用两种不同的限制性核酸内切酶切割目的基因，再用这两种酶切割农杆菌的Ti质粒，可以防止_______，从而提高目的基因和质粒重组的成功率。用DNA连接酶连接目的基因和Ti质粒时，应适当降低温度，原因是温度较低有利于_________，使不同DNA分子片段更容易连接在一起。
（3）将重组质粒通过农杆菌转化法导入植物细胞，可取植物叶片经______后，剪成小片作为转基因的受体材料。之所以不用完整的叶片，一方面是由伤口有利于_______，再者伤口也有利于组织培养时_________的形成。
（4）抗盐品种的培养不一定需要基因工程技术，也可利用______技术，在培养基中加入不同浓度的NaCl，诱发和筛选_______。

5 . 回答下列（一）、（二）小题。
（一）回答与果酒、果醋制作有关的问题。
（1）在酿酒过程中，酵母菌只有在无氧条件下才能进行___________。发酵开始时，发酵瓶内看不到气泡冒出的原因可能是酵母菌的___________使发酵瓶内出现负压。
（2）下列各项中，与果酒中的酒精浓度有关的是___________。
A.发酵时间
B.发酵温度
C.培养液中糖的含量
D.酵母菌对酒精浓度的耐受程度
（3）不同地域所酿制的葡萄酒风味会有一定的差异，出现风味差异的原因除了与当地相应的土壤、气候等地理环境因素和葡萄品种有关外，还可能与不同地域酿酒时所用的___________等生物因素有关。
（4）在利用果酒制作果醋过程中，如果已获得醋化醋杆菌菌种，可先在液体培养基中进行_____培养，然后接种到发酵瓶中。发酵瓶下口直角玻璃管内塞有松紧合适的脱脂棉球，其作用是___________。开始收集果醋前，应检测发酵瓶流出液的___________。
（二）通过农杆菌介导转入法培养转基因植物的过程如下图（图中①〜④表示相应操作过程）。请回答：

（1）如果外源基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一个包括外源基因来源生物中所有基因的_________来获取外源基因。图中②过程涉及的工具酶是___________。
（2）将外源遗传物质与受体植物细胞（包括原生质体受体）遗传物质重新组合，除了转基因技术外，还有___________等方法，这些方法解决了传统育种方法存在的___________的缺陷。植物原生质体的获取可以在较高渗透压环境下，用___________酶处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞的细胞壁。
（3）如果构建重组细胞的目的是为了获取重要的次生代谢产物（如某些中药），可以通过大量培养特定______________________来达成目的。
（4）如果农杆菌侵染对象为某植物叶片，将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因植物。下列叙述中正确的是__________________。
A.愈伤组织在合适条件下经脱分化形成再生植株
B.再生的芽在细胞分裂素含量较高的培养基上生根
C.叶片在含合适浓度生长素的培养基上经再分化形成愈伤组织
D.愈伤组织在细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽

6 . （一）回答下列与果酒和果醋的制作的有关问题：
（1）葡萄酒是酵母菌在无氧条件下的发酵产物，即将____________氧化成乙醇，当培养液中乙醇的浓度超过____________时，酵母菌就会死亡。果醋则是醋杆菌在有氧条件下将____________氧化而来的。
（2）用葡萄汁制葡萄酒：发酵瓶装量不能超过____________。开始时，酵母菌的____________会使发酵瓶出现负压，原因是________________________，若这种负压情况持续3天以上，必须加入____________，使发酵尽快发生。
（二）某研究小组欲利用抗虫基因，通过农杆菌转化法培育抗虫玫瑰。图1和图2分别表示出了抗虫基因和农杆菌Ti质粒的限制性核酸内切酶识别位点和抗生素抗性基因（pstⅠ、Sma Ⅰ、Alu Ⅰ表示限制性核酸内切酶切割位点；amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因）请回答：

（1）为获得大量抗虫基因，且保证形成重组质粒时，目的基因以唯一方向接入，可选用_________（填限制酶的种类）分别切割目的基因和Ti质粒，再用 DNA连接酶连接，形成重组DNA分子，再与经过________处理的______________（A.有amp和tet     B.有amp，无tet     C.无amp，有tet       D.无amp和tet）农杆菌液混合，使重组DNA进入农杆菌。再利用农杆菌转入培养的玫瑰细胞，使目的基因导入玫瑰细胞中。
（2）将含有导入了目的基因的玫瑰细胞的试管放在______________上，进行液体悬浮培养获得胚性细胞，进而培育成抗虫玫瑰。
（3）这种借助基因工程方法，将外源基因导入受体细胞，再通过这些转基因细胞进行培养，获得具有特定性状的新植株的技术就是______________。
（4）当前多地过度开发旅游造成生态环境的破坏，为减缓生态环境的破坏，可发展__________工程，并在旅游区种植抗虫玫瑰，可有效降低农药对环境的污染，并获得较佳的经济效益、社会效益和__________。

7 . 细胞工程在药物生产和育种等领域应用十分广泛。阅读下列材料，回答下列问题。
材料一：人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白。如图是制备抗HCG单克隆抗体流程示意图。

材料二：西湖龙井含有的茶碱是植物细胞的代谢产物，具有提神、抗衰老功效，可利用植物组织培养技术来实现茶碱的工业化生产。
(1)免疫处理的小鼠产生的B淋巴细胞群能合成并分泌________（填“一种”或“多种”）抗体。诱导小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时，采用的化学诱导试剂是______。经HAT培养基培养筛选得到杂交瘤细胞，该细胞具有_______特点，再进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选，才能获得足够数量的能分泌_______的杂交瘤细胞。该过程一般在多孔细胞培养板上进行：先将细胞悬浮液稀释到7~10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是________。
(2)单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，如科学家利用人绒毛膜促性腺激素（HCG）的单克隆抗体，制作出了早孕试纸，该试纸可以利用尿液诊断早孕的理由是_______。
(3)若利用植物组织培养技术，可将龙井茶叶细胞培养到________阶段，然后从______（填细胞器）中提取茶碱；一般来说，植物组织培养培育成植株的生殖方式为_______。

8 . 资料一：狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其生产的黄酮类化合物可入药。狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程手段进行培养，下图为简略过程，其中的数字序号代表处理或生理过程。

资料二：细胞融合技术有着广泛应用。下图为细胞融合的简略过程，其中的字母代表原生质体或细胞。

(1)①过程选用植株甲幼嫩的叶进行培养的原因是_______，③过程诱导生根时，细胞分裂素与生长素的含量比值_________1（填“大于”或“小于”），获得植株丙依据的生物学原理为______ 。
(2)若要获得体细胞杂交植株，诱导融合形成c的化学法有______ 。
(3)黄酮类化合物是狼爪瓦松代谢产生的________。正常愈伤组织中几乎没有黄酮类化合物，加入茉莉酸甲酯和水杨酸会明显促进愈伤组织中黄酮类化合物的积累，且细胞中与黄酮类化合物合成相关酶的含量显著升高，从基因控制生物性状的角度推测，茉莉酸甲酯和水杨酸的作用途径是____ 。

9 . 如下图所示，利用细胞工程和胚胎工程技术培育哺乳动物的方式有三种，其中a为精子，b为卵细胞，c和d均为体细胞。请回答下列问题：

（1）方法一为试管动物的培育过程，其中精子a在受精前要进行____________处理，在体内，该过程是在雌性动物的__________中完成的。受精时首先发生顶体反应，顶体内的酶释放出来，使精子穿过________后与____________接触。
（2）方法二的理论基础是____________，通过方法二获得的 动物个体乙的遗传物质主要来自于______（填“b”或“c”）。
（3）方法三获得杂种细胞，该技术的突出优点是____________。诱导动物细胞融合，有别于植物细胞融合的诱导方法为用____________诱导细胞融合。

10 . 应用细胞工程的知识，回答下列问题：
(1)A、B是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，A含有效成分X，B含有效成分Y。某研究小组拟培育同时含有X和Y的新型药用植物。为了培育该新型药用植物，可取A和B的叶片，先用__________________酶去除细胞壁，获得具有活力的_____________，再用物理方法如_______________法诱导二者融合，形成的融合细胞经过脱分化培养形成愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。在再分化阶段，生长素和细胞分裂素参与了细胞分化方向的调节，与生根培养基相比，一般情况下生芽培养基中__________________。这种培育技术称为________________。
(2)上述杂种植株含有______个染色体组，该项技术的意义是__________________。
(3)美国化学家从红豆杉树皮中分离出高抗癌活性的紫杉醇，发现紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用。如图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，据图回答问题：

①过程①需对外植体消毒，可以先后用_______________和_______________分别处理红豆杉外植体，消毒时既要能杀死材料表面的_______________，又要减少消毒剂对红豆杉细胞的伤害，以免将外植体也杀死。
②为达到高产紫杉醇的目的，有两种途径：
一是在培养基中添加某些既能促进愈伤组织细胞_______________，还能提高细胞合成紫杉醇能力的物质。
二是对愈伤组织进行诱变处理，由于愈伤组织一直处于_______________状态，因此对其诱变处理易获得突变细胞。
③过程①②③是否需要光照？ _______________，原因是______________________________。