21. 枯草芽孢杆菌所产生的透明质酸是一种应用广泛的粘性多糖,研究者欲改造枯草芽孢杆菌,通过添加诱导型启动子来协调菌体生长与产物生产之间的关系。
(1)为通过外源添加诱导剂来控制基因的表达,研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒,其中EcoRV酶切位点的识别序列为5'-GATATC-3',Xbal酶切位点的识别序列为5'-TCTAGA-3'。透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链,转录时mRNA自身的延伸方向为5′→3′。利用PCR扩增H基因时,需要在引物的
___(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶识别序列。为了构建基因表达载体,依据图中已知碱基序列,在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为
___,扩增
___代后会得到等长的8条DNA片段。
(2)为协调菌体生长与产物生产之间的关系,将构建好的重组质粒转入经
___处理后的枯草芽孢杆菌(D菌),在含
___的培养基上筛选,得到枯草芽孢杆菌E(E菌)。进行工业培养时,培养基应选择
___。
A.以木糖为唯一碳源的培养基
B.以蔗糖和木糖混合为碳源的培养基
C.以蔗糖为唯一碳源的培养基,接种2小时后添加木糖
D.以蔗糖为唯一碳源的培养基,培养结束后提取培养液,添加木糖
(3)质粒在细菌细胞中遗传不稳定、易丢失,研究者尝试将重组质粒进行改造,得到如图2所示重组质粒。利用同源区段交叉互换的方法将H基因插入枯草芽孢杆菌的基因组mpr位点,得到整合型枯草芽孢杆菌F(F菌)。请在图2方框中画出F菌的基因组
___。
(4)对上述三种枯草芽孢杆菌进行培养,结果如图3,应选择
___菌作为工业发酵生产的菌种,理由是
___(答出三点)。