11. 动物细胞生物反应器旨在复现动物体内的生理条件,以便在实验室环境中进行有效的细胞培养。该系统特别适用于生产特定蛋白质,例如人乳铁蛋白。实验人员构建了人乳铁蛋白基因表达载体,然后将该重组载体导入奶牛体内以生产人乳铁蛋白相关过程如图所示。回答下列问题:
(1)获取人乳铁蛋白基因是实施人乳铁蛋白动物细胞生物反应器工程的第一步。实验人员利用PCK技术材增人乳铁蛋白基因过程中,需要使用TaqDNA聚合酶,而不能使用普通的DNA聚合酶,其原因是
_________。
(2)图中标注了三种限制酶BamHI、HindⅢ、SmaI及其酶切位点,Tet
R表示四环素抗性基因,Amp
R表示氨苄青霉素抗性基因。据图分析,构建人乳铁蛋白基因表达载体时,应选择的两种限制酶是
_________,同时,要将人乳铁蛋白基因导入启动子和
_________之间。
(3)将人乳铁蛋白基因表达载体导入供体牛受精卵后培养至早期胚胎,然后将早期胚胎移植到代孕牛体内。此过程中,一般不需要对代孕牛注射免疫抑制剂,这是因为
_________。
(4)为检测人乳铁蛋白基因是否在雌性转基因牛中表达,研究人员提取了A、B、C三头转基因牛的乳汁,从中提取了蛋白质,结果发现A、C两头转基因牛提取的乳汁中未检测到人乳铁蛋白,而B转基因牛提取的乳汁中检测到了人乳铁蛋白。进一步提取A、C两头转基因牛的基因组DNA和mRNA进行检测,A转基因牛能检测到人乳铁蛋白基因,但不能检测到相关mRNA,C转基因牛则都不能检测到。以上两次检测结果说明了
_________。