1 . 基因敲除是一种基因工程操作技术，该技术针对某个序列已知但功能未知的基因，改变其结构，使其功能丧失，进而推测出该基因的生物学功能。请分析并回答：_______ ，采用PCR 方法进行扩增并电泳，得到如上图结果。图中 WT所对应的是野生型小鼠，KO和HET对应的分别是________ 、________ 。
(2)敲除基因的个体往往影响配子的存活率而影响子代及比例。科学家使用野生型(++)和基因敲除杂合子(+--)分别做母本和父本进行杂交，结果如下表。据此可知基因敲除杂合子(+--)产生含有____ (填“+”或“-”)的大部分____ (填“雌”或“雄”)配子致死。基因敲除的杂合子雌雄个体相互交配，基因敲除纯合子的概率是____ 。
(3)敲除基因的纯合子往往生活力和繁殖力低，甚至会在胚胎期死亡，妨碍了对该基因在成年动物体内功能的研究。需要重新设计实验程序，使基因的敲除发生在成年动物特定组织和特定时间内。
①研究人员找到了一段被称为 loxP 位点的DNA序列，该序列是酶C的作用位点，如下图所示，当基因X位于_______ 时，在酶C的作用下被敲除。_____ (选填“相同”或“不同”)。
③在肾脏集合管细胞中，AQP2启动子特异性地与RNA 聚合酶结合并表达，现已获得另一种转纯合基因小鼠B，在转入的____ 前插入AQP2基因启动子序列，可以使酶C在肾脏集合管处表达。
(4)已知酶C 基因所在的染色体与loxP 序列所在染色体为非同源染色体、请利用AB小鼠，设计杂交实验获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的纯合小鼠：____________ 。
(2)敲除基因的个体往往影响配子的存活率而影响子代及比例。科学家使用野生型(++)和基因敲除杂合子(+--)分别做母本和父本进行杂交，结果如下表。据此可知基因敲除杂合子(+--)产生含有
| 杂交类型 | 子代及比例 | |
| +-(♀)×++(♂) | +-(49.1%) | ++(50.9%) |
| +-(♂)×++(♀) | ++(90.1%) | +-(9.9%) |
(3)敲除基因的纯合子往往生活力和繁殖力低，甚至会在胚胎期死亡，妨碍了对该基因在成年动物体内功能的研究。需要重新设计实验程序，使基因的敲除发生在成年动物特定组织和特定时间内。
①研究人员找到了一段被称为 loxP 位点的DNA序列，该序列是酶C的作用位点，如下图所示，当基因X位于
③在肾脏集合管细胞中，AQP2启动子特异性地与RNA 聚合酶结合并表达，现已获得另一种转纯合基因小鼠B，在转入的
(4)已知酶C 基因所在的染色体与loxP 序列所在染色体为非同源染色体、请利用AB小鼠，设计杂交实验获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的纯合小鼠：
您最近一年使用：0次
2 . 马铃薯Y病毒可致使烟草叶片黄化、斑驳，整株凋萎。研究发现，马铃薯Y病毒的连接蛋白可与植物特定的elF4E基因表达的转录起始因子相互作用，从而启动自身在植物体内的翻译与增殖。研究人员利用CRISPR-Cas9基因编辑系统敲除烟草的elF4E基因，研究烟草对马铃薯病毒的抗性。CRISPR-Cas9基因编辑系统表达特定的sgRNA，引导同时表达的Cas9蛋白结合到靶DNA序列上，Cas9蛋白对DNA双链进行定向切割，断裂的DNA在修复过程中可发生突变。下图是用于编辑eIF4E基因的CRISPR-Cas9载体示意图。请回答下列问题：______ （填“相同”或“互补”）。启动Cas9基因转录的元件是______ 。
(2)将CRISPR-Cas9载体先导入农杆菌，目的是______ 。利用农杆菌将目的基因导入烟草细胞中，利用选择培养基初步筛选含重组质粒的农杆菌和烟草细胞，培养基中添加的抗生素分别是______ 、______ 。
(3)研究人员对野生型烟草（WT）和gl-18、gl-19等转基因阳性植株进行eIF4E基因测序，部分序列如下图所示。由此可知，经CRISPR-Cas9基因编辑后，g1-18、g1-19等转基因阳性植株的eIF4E基因在修复过程中发生了______ 。转基因阳性植株g1-30和g1-100经自交后获得纯合基因敲除植株并表现出马铃薯Y病毒抗性，其他植株自交后代则无抗性，原因可能是______
WT：TGGATGAATCTGATGATACGG
g1-18：TGGACGCATCTGATGATACGG
gl-19：TGGATGAATCTGATGATGCGG
g1-30：TGGATGAATCTGAT.ATACGG
g1-86：TGGATGAATCTAATGATACGG
g1-100：TGGATGAATCTGAT.ATACGG
注：除图中的序列之外，其他碱基序列均相同。
(2)将CRISPR-Cas9载体先导入农杆菌，目的是
(3)研究人员对野生型烟草（WT）和gl-18、gl-19等转基因阳性植株进行eIF4E基因测序，部分序列如下图所示。由此可知，经CRISPR-Cas9基因编辑后，g1-18、g1-19等转基因阳性植株的eIF4E基因在修复过程中发生了
WT：TGGATGAATCTGATGATACGG
g1-18：TGGACGCATCTGATGATACGG
gl-19：TGGATGAATCTGATGATGCGG
g1-30：TGGATGAATCTGAT.ATACGG
g1-86：TGGATGAATCTAATGATACGG
g1-100：TGGATGAATCTGAT.ATACGG
注：除图中的序列之外，其他碱基序列均相同。
您最近一年使用：0次
3 . CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术，可用于基因敲除、定向基因突变和插入外源DNA分子。CRISPR具有靶向特异性，这是由两部分决定的，一部分是向导RNA和靶DNA之间的碱基配对，另一部分是Cas9蛋白复合体和一个短DNA序列（PAM序列），序列通常在靶DNA的3'末端作用。Cas9内切酶是一种RNA引导的内切核酸酶，用于通过产生序列特异性双链断裂进行基因组编辑，向导RNA则作用于体内一种称为RNA编辑的后转录修饰过程中。下图为借助CRISPR/Cas9基因编辑技术插入外源基因的过程图，回答下列问题：
(1)CRISPR是在细菌DNA中发现的一些重复序列，外来病毒DNA往往会被整合到这段序列附近并转录出向导RNA以引导Cas9内切酶切割病毒DNA。细菌细胞中的________ 也能起到类似Cas9内切酶的作用，使脱氧核苷酸之间的________ 断开。Cas内切酶________ （填“会”或“不会”）切割细菌自身DNA，原因是________ 。
(2)在对目的细胞进行基因编辑时，需要构建含Cas9蛋白基因和设计好的向导RNA基因的________ 并导入受体细胞内，使其在细胞中表达出Cas9蛋白和向导RNA，并进入细胞核发挥作用。研究发现，即便向导RNA与目的序列完全互补，在PAM序列突变的情况下也无法引导Cas9内切酶，结合上图推测PAM序列的作用是________ 。
(3)真核细胞的DNA被切割后，会发生修复连接，便有可能实现连入供体DNA分子，也可能不会连入。若要利用CRISPR/Cas9技术敲除实验动物某个致病基因获得正常细胞，试提出操作思路：________ 。
(1)CRISPR是在细菌DNA中发现的一些重复序列，外来病毒DNA往往会被整合到这段序列附近并转录出向导RNA以引导Cas9内切酶切割病毒DNA。细菌细胞中的
(2)在对目的细胞进行基因编辑时，需要构建含Cas9蛋白基因和设计好的向导RNA基因的
(3)真核细胞的DNA被切割后，会发生修复连接，便有可能实现连入供体DNA分子，也可能不会连入。若要利用CRISPR/Cas9技术敲除实验动物某个致病基因获得正常细胞，试提出操作思路：
您最近一年使用：0次
4 . CRISPR/Cas9基因编辑技术可以按照人们的意愿精准剪切、改变任意靶基因的遗传信息，对该研究有突出贡献的科学家被授予2020年诺贝尔化学奖。其原理是由一条单链向导RNA（SgRNA）引导Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割，从而达到基因定点敲除、敲入、突变的目的。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（如图所示）。
（1）CRISPR/Cas9基因编辑技术中，SgRNA是根据靶基因设计的引导RNA，准确引导Cas9切割与SgRNA配对的靶基因DNA序列。Cas9借助向导RNA对目标DNA分子进行精准定位，依赖于_______ ；Cas9蛋白能对目标位点进行准确切割，是因为_____________ ，由此可见，Cas9在功能上属于_______ 酶。
（2）在使用Cas9对不同目标DNA进行编辑时，应使用Cas9蛋白和__________ （填“相同”或“不同”）的向导RNA进行基因编辑。在设计向导RNA识别序列时，若目标DNA的а链切点附近序列为…GAATCTCCA…，则向导RNA上识别序列为_______ 。
（3）已知玉米中赖氨酸含量较低，原因是与赖氨酸合成过程中的两个关键酶——天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的活性，受细胞内赖氨酸浓度影响较大。当赖氨酸浓度达到一定量时就影响这两种酶的活性，从而使赖氨酸含量很难提高，不能满足需求。现使用CRISPR/Cas9基因编辑技术对天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶基因进行改造，首先需要构建由启动子、____________ （目的基因）、标记基因、终止子等组成的基因表达载体，然后使用________ 法导入玉米细胞，完成转化后CRISPR/Cas9系统可在玉米体细胞中特定的基因位点改写遗传信息，再经______ 技术培育成赖氨酸高产的玉米植株。
（1）CRISPR/Cas9基因编辑技术中，SgRNA是根据靶基因设计的引导RNA，准确引导Cas9切割与SgRNA配对的靶基因DNA序列。Cas9借助向导RNA对目标DNA分子进行精准定位，依赖于
（2）在使用Cas9对不同目标DNA进行编辑时，应使用Cas9蛋白和
（3）已知玉米中赖氨酸含量较低，原因是与赖氨酸合成过程中的两个关键酶——天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的活性，受细胞内赖氨酸浓度影响较大。当赖氨酸浓度达到一定量时就影响这两种酶的活性，从而使赖氨酸含量很难提高，不能满足需求。现使用CRISPR/Cas9基因编辑技术对天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶基因进行改造，首先需要构建由启动子、
您最近一年使用：0次
2021-03-18更新
|
1559次组卷
|
2卷引用：2021届山东省泰安市高三一模生物试题
名校
5 . 下图是采用CRISPR技术对某生物基因进行编辑的过程，该过程中用sgRNA可指引核酸内切酶Cas9结合到特定的位点进行切割，下列叙述正确的是（ ）
| A．根据破坏B基因后生物体的功能变化，可推测B基因的功能 |
| B．基因定点编辑前需要设计与靶基因全部序列完全配对的sgRNA |
| C．图中sgRNA1的碱基序列和sgRNA2碱基序列相同或互补 |
| D．可利用此技术编辑生殖细胞相关基因以期生育出免疫艾滋病的婴儿 |
您最近一年使用：0次
2020-02-23更新
|
1961次组卷
|
13卷引用：山东省济南市2022届高三一模（3月）生物试题变式题11-15
山东省济南市2022届高三一模（3月）生物试题变式题11-15江苏省镇江市2019-2020学年高三上学期期末生物试题江苏省南通市启东中学2019-2020学年高二下学期期初考试生物试题安徽省合肥一六八中学2019-2020学年高二下学期第四次线上测试生物试题（已下线）专题九 现代生物科技专题（江苏专版）（已下线）【浙江新东方】+【高中生物31】2020学年浙江省杭州市新东方学校高二试卷（已下线）解密26 基因工程（分层训练）-【高频考点解密】2021年高考生物二轮复习讲义+分层训练（已下线）考点56 基因工程和蛋白质工程的关系-备战2022年高考生物一轮复习考点帮（已下线）专练10 现代生物科技专题50题-【尖子生创造营】2022年高考生物总复习高频考点必刷800题（全国通用）黑龙江省实验中学2021-2022学年高三上学期第五次月考生物试题山东省青岛市五十八中2020—2021学年高三上学期期中生物试题（已下线）专题20基因、蛋白质工程山东省泰安市新泰市一中北校2022-2023学年高三上学期期中生物试题
6 . CCR5是人体的正常基因，其编码的细胞膜CCR5蛋白是HIV－Ⅰ(人类免疫缺陷病毒Ⅰ型)感染的“入口”。有学者用“CRISPR/Cas9”技术对该基因进行定点编辑后植入志愿者体内，诞生了两位婴儿。这就是学术界和社会伦理界引起激烈争论的“基因编辑婴儿”事件请分析回答：
(1)将Cas9蛋白和向导RNA序列注入受精卵的方法称为________ 。据图推测，“CRISPR/Cas9”技术中，首先由________ 引导定位至目标DNA序列，然后由Cas9蛋白将DNA切断。这两种物质的作用结果类似于基因工程中________ 的作用。基因编辑过程中可能会产生“脱靶”(对CCR5基因以外的其他基因进行了编辑)现象，最可能的原因是________________________________________________________________________ 。
(2)细胞对被切断的DNA进行重新连接前大都会随机切掉或增加几个碱基对，此过程导致的变异属于________ 。胚胎2的两个变异CCR5基因编码的蛋白质中，氨基酸数目都可能减少，原因是____________________________ 。变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，从而实现了________________________________________________________________________ 。
(3)CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种精准改变目标DNA序列的技术。下列现代生物科技中与该技术最接近的是________ 。
A.转基因技术 B.蛋白质工程 C.细胞核移植 D.胚胎工程
(4)现今基因编辑技术门槛低，很多人在实验室里都可以做，如果不及时制止，就有泛滥的可能性。基因编辑婴儿事件，在社会上引起了激烈的争论，从科研工作者应具备的科学道德、科学精神来思考，你应持有的正确观点是________________________________________________________________________ 。
(1)将Cas9蛋白和向导RNA序列注入受精卵的方法称为
(2)细胞对被切断的DNA进行重新连接前大都会随机切掉或增加几个碱基对，此过程导致的变异属于
(3)CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种精准改变目标DNA序列的技术。下列现代生物科技中与该技术最接近的是
A.转基因技术 B.蛋白质工程 C.细胞核移植 D.胚胎工程
(4)现今基因编辑技术门槛低，很多人在实验室里都可以做，如果不及时制止，就有泛滥的可能性。基因编辑婴儿事件，在社会上引起了激烈的争论，从科研工作者应具备的科学道德、科学精神来思考，你应持有的正确观点是
您最近一年使用：0次
名校
7 . 下图1是获取用于构建基因表达载体的含人生长激素基因的DNA片段(DNA复制子链延伸方向是5′→3′，转录方向为左→右)示意图，图2是所用质粒示意图，其上的Ampr表示青霉素抗性基因，Tett表示四环素抗性基因。有关限制酶的识别序列和酶切位点如下表。请据图回答：
限制酶识别序列和酶切位点表
(1) ①过程催化形成磷酸二酯键的酶有____________________ ，合成的人生长激素基因中________ (选填“有”或“无”)与终止密码子相应的碱基序列。
(2) 引物1由5′→3′的碱基序列为________________________ ，引物2应含有限制酶________ 的识别序列；从图1的过程②开始进行PCR扩增，第六次循环结束时，图中用于构建基因表达载体的DNA片段所占比例是________ 。
(3) 在构建表达载体的过程中对图中质粒、DNA片段进行合适的完全酶切后，向两者的混合物中加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成________ 种环状DNA。
(4) 2018年11月基因编辑婴儿事件震惊了世界，舆论一片哗然，某科研团队利用“CRISPR/Cas9”技术将受精卵中的艾滋病病毒受体基因CCR5进行修改，拟培育出具有艾滋病免疫能力的基因编辑婴儿。下图3为向导RNA引导Cas9蛋白切割CCR5基因(目标DNA)示意图。
①向导RNA的合成需要________ 酶。Cas9蛋白是一种________ 酶。
②“GRISPR/Cas9”技术，是利用________ 法将Cas9蛋白和特定的引导序列导入受精卵中发挥基因编辑作用。
③基因编辑婴儿引起舆论的关注，很多科学家表示反对，请给出合理的理由______________ 。
限制酶识别序列和酶切位点表
| 限制酶 | HindⅢ | BamHⅠ | PstⅠ | EcoRⅠ | SmaⅠ | BglⅡ |
| 识别序列(5′→3′) | A↓AGCTT | G↓GATCC | C↓TGCAG | G↓AATTC | CCC↓GGG | A↓GATCT |
(1) ①过程催化形成磷酸二酯键的酶有
(2) 引物1由5′→3′的碱基序列为
(3) 在构建表达载体的过程中对图中质粒、DNA片段进行合适的完全酶切后，向两者的混合物中加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成
(4) 2018年11月基因编辑婴儿事件震惊了世界，舆论一片哗然，某科研团队利用“CRISPR/Cas9”技术将受精卵中的艾滋病病毒受体基因CCR5进行修改，拟培育出具有艾滋病免疫能力的基因编辑婴儿。下图3为向导RNA引导Cas9蛋白切割CCR5基因(目标DNA)示意图。
①向导RNA的合成需要
②“GRISPR/Cas9”技术，是利用
③基因编辑婴儿引起舆论的关注，很多科学家表示反对，请给出合理的理由
您最近一年使用：0次
2019-02-28更新
|
1882次组卷
|
5卷引用：【全国百强校】甘肃省天水市一中2019届高三下学期第五次模拟考试理科综合生物试题
【全国百强校】甘肃省天水市一中2019届高三下学期第五次模拟考试理科综合生物试题（已下线）三轮冲刺卷14-【赢在高考·黄金20卷】备战2022年高考生物模拟卷（山东专用）【市级联考】江苏省泰州市2019届高三上学期期末考试生物试题（已下线）专题19 基因工程、PCR技术及生物技术的伦理问题——《备战2020年高考精选考点专项突破题集》天津一中2018-2019学年高二（下）期中生物试题
8 . Hedgehog基因（H）广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中，在胚胎发育中起重要作用。我国科研工作者利用基因敲除和核酸分子杂交技术研究了H基因在文昌鱼胚胎发育中的作用。
（1）在脊椎动物各个不同类群中，H基因的序列高度相似。H基因高度保守，是由于该基因的突变类型在_______________________ 中被淘汰。
（2）研究者使用了两种TALE蛋白对文昌鱼的H基因进行敲除，TALE蛋白的结构是人工设计的，蛋白质的中央区能够结合H基因上特定的序列，F区则能在该序列处将DNA双链切开，如图1所示。
①根据TALE蛋白的功能设计出其氨基酸序列，再根据氨基酸序列对应的___________ 序列推测出编码TALE蛋白的DNA序列，人工合成DNA序列之后再以其为模板进行______ 生成mRNA。
②将两种mRNA用_____________ 法导入文昌鱼的卵细胞中，然后滴加精液使卵受精，此受精卵发育成的个体为F0代。
③F0代个体细胞内被两种TALE蛋白处理过的DNA重新连接后，H基因很可能因发生碱基对的__ 而丧失功能，基因丧失功能则被称为“敲除”。
（3）提取F0代胚胎细胞DNA，克隆H基因，用________ 进行切割，电泳后用放射性同位素标记的H基因片段为探针进行DNA分子杂交，实验结果如图2所示。图中样品_____ 代表的F0个体中部分H基因已被敲除．研究者发现，在F0个体产生的所有配子中，通常只有部分配子的H基因被敲除，可能的原因是__________________________________ ．
（4）将F0代与野生型鱼杂交，再从F1代鱼中筛选出某些个体相互交配，在F2代幼体发育至神经胚期时进行观察和计数，结果如表所示。
根据杂交实验结果可知，F1代鱼中筛选出的个体均为____________ （杂合子/纯合子），H基因的遗传符合___________ 定律，随着幼体继续发育，进一步检测到的各组中正常个体数与畸形个体数的比例将会____________ 。
（1）在脊椎动物各个不同类群中，H基因的序列高度相似。H基因高度保守，是由于该基因的突变类型在
（2）研究者使用了两种TALE蛋白对文昌鱼的H基因进行敲除，TALE蛋白的结构是人工设计的，蛋白质的中央区能够结合H基因上特定的序列，F区则能在该序列处将DNA双链切开，如图1所示。
①根据TALE蛋白的功能设计出其氨基酸序列，再根据氨基酸序列对应的
②将两种mRNA用
③F0代个体细胞内被两种TALE蛋白处理过的DNA重新连接后，H基因很可能因发生碱基对的
（3）提取F0代胚胎细胞DNA，克隆H基因，用
（4）将F0代与野生型鱼杂交，再从F1代鱼中筛选出某些个体相互交配，在F2代幼体发育至神经胚期时进行观察和计数，结果如表所示。
| F2中正常幼体数 | F2中畸形（无口和鳃，尾部弯曲）幼体数 | |
| 第一组 | 101 | 29 |
| 第二组 | 106 | 33 |
| 第三组 | 98 | 31 |
根据杂交实验结果可知，F1代鱼中筛选出的个体均为
您最近一年使用：0次
2018-07-21更新
|
590次组卷
|
4卷引用：2018年高考生物学临考精品信息卷七
2018年高考生物学临考精品信息卷七【区级联考】北京市怀柔区2019届高三高考零模生物试题（已下线）《2020年高考押题预测卷》2020年高考押题预测卷03（北京卷）-生物（已下线）热点06 基因编辑技术-2022年高考生物【热点·重点·难点】专练（北京新高考新题型）
