1 . 镉（Cd）作为一种重金属元素，会严重威胁人体健康。科研人员将Cd响应启动子CadR与绿色荧光蛋白基因（EGFP）组合在一起导入大肠杆菌，构建能够检测环境中Cd污染的生物传感器。已知LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。相关信息如图所示，其中P1、P2、P3表示引物。

   

限制酶识别序列及切割位点：
Mun I：5'-C↓AATTG-3'   Xho I：5'-C↓TCGAG-3'   EcoR I：5'-G↓AATTC-3'   Sal I：5'-G↓TCGAC-3'
(1)构建重组质粒的过程中需要用到E．coli DNA连接酶，该酶的作用是______________________。据图分析，应选用___________酶切割质粒，以保证质粒与目的基因高效重组。
(2)已知EGFP基因转录得到的RNA中缺乏起始密码子AUG。利用PCR技术获取EGFP基因时，为保证EGFP基因能正确插入载体且可以正常表达，除选择引物P1外，还需要选择引物___________，并在其5'端增加碱基序列5'-___________-3'。
(3)通过琼脂糖凝胶电泳可将不同的DNA片段区分开来，该技术所依据的原理是______________________。对PCR产物进行电泳检测，结果显示除EGFP基因条带外，还有多条非特异性条带（引物和模板不完全配对导致）。为减少非特异性条带的产生，可适当___________（填“提高”或“降低”）PCR中复性过程的温度。
(4)为筛选出成功导入重组质粒的目标菌，需要将转化后的大肠杆菌接种到含有四环素和X-gal的培养基上，结果发现长出了蓝色和白色两种菌落。若需进一步鉴定该生物传感器是否制备成功，需要进行的操作是______________________。

2 . 酸牛奶是以优质鲜牛奶为原料，添加活性乳酸菌经发酵后制成的。因活性乳酸菌能调节肠道菌群平衡，且鲜牛奶经发酵后，其营养物质如蛋白质、脂肪、乳糖等能得到部分分解，易被人体吸收，具有一定的营养保健功能。有些国家将乳酸菌的活菌数量作为区分酸奶质量的重要依据。请回答：

蛋白胨	10.0
牛肉浸粉	5.0
酵母浸粉	4.0
葡萄糖	20.0
磷酸氢二钾	2.0
柠檬酸三铵	2.0
醋酸钠	5.0
硫酸镁	0.2
硫酸锰	0.05
琼脂	15.0
吐温80	1.0

(1)将样品接种于MRS培养基中，让乳酸菌生长并形成可计数的菌落。MRS培养基的成分（g/L）如表所示，蛋白胨为乳酸菌的生长提供______。配制好的培养基需用_____方法进行灭菌。
(2)某同学采用如下操作研究某品牌酸奶中的乳酸菌含量。
①移取10mL充分摇匀的检样于含有90mL生理盐水的广口瓶内制成1：10的均匀稀释液。
②用1mL移液管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL生理盐水0的试管内。
③另取1mL移液管，按上述操作顺序，作梯度稀释，每稀释一次，换用1支移液管。
④将冷至50℃的MRS培养基注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。
⑤选择3个适宜稀释度，分别移取0.1mL稀释液涂布，每个稀释度做3个平行重复。
⑥待琼脂凝固后，翻转平板，置于恒温厌氧培养箱内培养48h取出，观察乳酸菌菌落特征，选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。
上述操作存在的主要错误有两个，分别是______；_____。
(3)若该同学培养和操作正确，在检样为10^-4的稀释液接种平板上，生成的可疑菌落平均为30个，随机取10个鉴定，证实的乳酸菌有8个，则1mL检样中乳酸菌数为_______个。
(4)酸奶中乳酸菌的含量还可采用显微计数法，与上述方法相比，显微计数法统计的乳酸菌含量可能_____（填“多”、“少”或“大体相当”），原因是_____。

3 . 研究发现，异种植物细胞融合时受体细胞会排出结构完整的供体细胞染色体。若在融合前用大剂量的X射线使供体细胞染色体发生断裂、易位、染色体消除等破坏后，与一个正常受体细胞原生质体融合，可得到含全部受体遗传物质及部分供体遗传物质植株。该技术称为不对称植物体细胞杂交技术。下图为利用不对称植物体细胞杂交技术培育抗青枯病马铃薯植株的过程示意图。

   

(1)过程①通常用______试剂对外植体进行消毒，然后用含有___________的培养液来处理细胞即可获得原生质体。
(2)过程②常用_______试剂对原生质体进行诱导融合，且该过程需要在培养液中加入一定量的渗透压缓冲物质，目的是_______。
(3)过程③选择________的细胞进行培养，形成的愈伤组织更容易获得抗青枯病的马铃薯植株。
(4)对过程④获得的15株抗病马铃薯植株检测，发现所有植株细胞内染色体数目与普通马铃薯一致，但有部分植株随机获得了供体茄子的其他性状，据此推测产生此现象的原因可能是_____。

4 . 单克隆抗体免疫疗法能够抑制恶性肿瘤的发展。奥加伊妥珠单抗是一种新型的抗体—药物偶联物，由识别肿瘤细胞表面CD22蛋白的单克隆抗体和具有细胞毒性的卡奇霉素结合组成。卡妥索单抗是一种双特异性抗体，其制备原理与作用原理如图所示。

   

(1)一般无法通过只培养B淋巴细胞获取大量抗体，主要原因是___。体外培养细胞时为保证无菌、无毒的环境，可采取的措施是___（答出两点即可）。
(2)制备卡妥索单抗时，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞A需要进行两步筛选，第一步筛选的方法和目的是___。杂交瘤细胞A和B融合后，可向培养液添加___（物质）用于筛选产生卡妥索单抗的杂交瘤细胞AB。
(3)奥加伊妥珠单抗在治疗肿瘤的过程中，单克隆抗体主要发挥___的作用。单克隆抗体还被广泛用作诊断试剂，原因是___。
(4)科研人员推测奥加伊妥珠单抗和卡妥索单抗联合给药对恶性肿瘤的抑制效果更好。为验证这一推测，某兴趣小组设计如下实验方案：将培养好的癌细胞悬浊液对无胸腺裸鼠（简称裸鼠）进行皮下接种，接种后2周可观察各裸鼠背部长出肿块，证明实验接种成功；将上述处理的裸鼠随机分为2组：生理盐水组和奥加伊妥珠单抗+卡妥索单抗组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药后每两日测量并记录1次肿瘤体积。
请完善上述实验方案的不足之处：___（答两点）。

5 . 噬菌蛭弧菌是一类专门以捕食细菌为生的胞内寄生菌，主要以机械钻孔和酶解的方式破坏病原菌的细胞壁。下列叙述错误的是（       ）

A．可以用牛肉膏蛋白胨培养基培养噬菌蛭弧菌

B．用噬菌蛭弧菌对水质进行消毒属于生物消毒法

C．探究噬菌蛭弧菌的生长规律时，可用细菌计数板计数

D．与使用抗生素相比，噬菌蛭弧菌能解决病原菌出现的耐药性问题

6 . 科研人员2015年和2020年两次对攀枝花苏铁国家级自然保护区内所有木本植物进行调查，部分调查结果如下（图中已含群落中重要值大于1的全部木本植物）。

物种	年死亡率（%）	年补员率（%）	种群大小变化率（%）
攀枝花苏铁	0.15	0.18	0.04
铁橡栎	0.70	6.46	5.75
滇榄仁	0.24	15.03	14.79
蒙桑	1.08	6.57	5.49
岩柿	0	4.01	4.01
山槐	0	11.60	11.60

(1)重要值是研究某个物种在群落中的地位和作用的综合数量指标，表征物种在群落中的优势程度。重要值的计算可能与下列___________指标相关。

A．种群密度（该种群全部个体数/样地面积）

B．种群频度（该种群个体出现样方数/总样方数）

C．种群显著度（该种群全部个体主茎横截面积/样地面积）

D．种群年死亡率（该种群死亡的个体数/种群个体数）

E．种群年补员率（该种群新出现的个体数/种群个体数）

F．种群大小变化率（该种群增加的个体数/种群个体数）

(2)根据调查数据推测，该保护区群落演替方向___________（填“有利于”或“不利于”）攀枝花苏铁的就地保护，依据是______________________。
(3)攀枝花苏铁有较强的耐火能力，因此可采用人为控制计划烧除的方法，清除地面积累物。科研人员在划定区域内使用计划烧除方式干预后，与对照区域内的成年攀枝花苏铁进行研究，结果如下。

比较项目	株高（m）	新生叶片数目	新生叶片长度（cm）
计划烧除组	0.89	30.83	91.76
对照组	0.83	10.22	112.33

据结果分析，计划烧除干预对成年攀枝花苏铁的影响是___________。火烧会对土壤产生复杂影响，请从土壤的角度分析，计划烧除对攀枝花苏铁可能产生的利与弊___________。

7 . 已知鸡的金羽、银羽由一对等位基因控制，其中银羽为显性。现有一群鸡自由交配，F₁中金羽♀∶金羽♂∶银羽♀∶银羽♂＝2∶1∶1∶2。已知金羽、银羽基因对鸡的生存能力、繁殖能力均无影响，不考虑突变。
(1)金羽、银羽的遗传属于伴性遗传，判断依据是______________________。据杂交结果，___________（填“能”或“不能”）排除控制金羽、银羽基因位于Z、W同源区段，理由是______________________。
(2)研究发现，金羽、银羽为Z染色体上的基因控制，F₁雄鸡中金羽基因的基因频率是___________。若每代都自由交配，雄鸡中金羽基因的基因频率会逐渐趋向于___________。
(3)现有一批纯种黑羽鸡，黑羽鸡与金羽、银羽杂交后，后代均表现为黑羽鸡。已知黑羽是由11号染色体一对基因控制。用两只金羽鸡与该品种黑羽鸡杂交，F₁自由交配，F₂中银羽鸡占比为3/16，这两只金羽鸡的性别是___________（填“雄性”或“雌性”或“一雌一雄”）。为对黑羽基因进行精准定位，科研人员从F₂中选出4只鸡，利用分子标记（P1～P16）研究其11号染色体的组成情况，结果如图（不同颜色代表染色体片段来自不同亲本）。已知染色体交换位置均不在基因内部，由该实验结果可以确定黑羽基因在11号染色体上的位置在分子标记___________之间。

   

8 . Q蛋白是植物体内参与光反应的一种蛋白质，高温会导致Q蛋白含量下降，进而对光合作用造成影响，药物L会完全抑制Q蛋白合成。为研究高温如何影响Q蛋白的含量，科研人员以番茄为实验材料进行了相关实验，实验结果如表所示。

		Q蛋白相对含量
清水处理	常温	100
	高温	70
药物L处理	常温	62
	高温	20

(1)Q蛋白在植物细胞内的分布部位最可能是___________。植物光反应产生的NADPH在暗反应中的作用是______________________。
(2)本实验的自变量是___________。为排除番茄植株生长状况对实验的影响，选择植株的要点有___________（答出两点即可）。
(3)据实验结果分析，高温时Q蛋白含量下降的主要原因是______________________（填“合成减少”或“降解增加”或“合成减少和降解增加”），判断依据是_________________________________。

9 . 急性高钾血症会引起肌肉软弱无力，严重的还可以引起心脏骤停。下列说法正确的是（       ）

A．人体血钾正常时，肾上腺皮质不再分泌醛固酮

B．肌肉软弱无力可能与钾离子影响肌细胞的兴奋性有关

C．人体缺钠时应通过补充钾离子来提高细胞外液渗透压

D．血钾高是由肾脏功能受损不能及时排出钾离子所致

10 . 某地冰川退缩后逐渐从原生裸地演替到顶级群落，研究人员采用空间代替时间的方式，按照冰川退缩时间在冰川退缩地设置若干连续样地，通过评估不同样地土壤矿质元素、固碳释氧、土壤保持、涵养水源等方面的功能价值，分析植被演替规律。下列说法错误的是（       ）

A．该冰川退缩地上进行的演替是初生演替

B．距离冰川最近的样地，地表植被最简单

C．演替的最终群落类型受人类活动影响

D．固碳释氧、土壤保持、涵养水源均体现了生物多样性的直接价值