名校
1 . 嗜热菌又称高温细菌，是一类生活在高温环境中的微生物。研究者从温泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示。将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法正确的是（ ）
| A．甲、乙试管为液体培养基，液体培养基能分离获得嗜热菌单菌落 |
| B．只有能产生淀粉酶的微生物才能在I、Ⅱ号培养基上生长 |
| C．丙试管中嗜热菌数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和室温条件 |
| D．图2中周围不显蓝色的菌落含有所需的嗜热菌 |
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2023-05-04更新
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217次组卷
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4卷引用：浙江省A9协作体2022-2023学年高三上学期暑假返校联考生物试题
2 . 铁皮石斛作为一种集观赏和药用价值于一身的重要中药材，在人们长期掠夺式采挖与生存条件的破坏下，野生资源濒临灭绝，药材价格不断攀升。现利用农杆菌介导的铁皮石斛遗传转化方法，不仅能上调植物有益成分表达水平， 还能增强其抗逆性和抗病虫能力，同时还能 控制其生长发育进程，以利市场需求。请回答下列问题：
(1)农杆菌的活化培养：挑取农杆菌于____________ （填“液体”或“固体”）培养基中活化并扩 大培养，培养基中含有 0 ．5％氯化钠，其作用是__________________________ 。
(2)侵染石斛原球茎：挑选生长状态良好、颜色呈嫩绿色、质地均匀且较为松散的原球茎置于 36-45khz 条件下超声波处理 1-3min，把原球茎切割为 3-5mm方块，再对其进行_________ 处理后浸入农杆菌侵染液。该过程中超声波和对原球茎进行切割处理的目的是____________ 。
(3)共培养和筛选：侵染结束后，用滤纸吸干原球茎上多余侵染液，然后迅速将原球茎转移至共培养基培养；培养基中的蔗糖的作用是_________ 。将共培养后的原球茎用___________ 冲洗 4-5 次，再用浓度为 480-520mg/L 的头孢溶液清洗 1-2min，将原球茎用滤纸吸干水分，迅速置于筛选培养基中培养。该过程中使用头孢类抗生素的作用是_____________________________ 。
(4)植株再生：将筛选得到的原球茎接种于筛选培养基中培养，待分化出芽后转入__________ 中培养至组培苗，后要进行炼苗操作，炼苗目的是______________________________________ 。
(5)实验过程中用不同种类、浓度的激素对铁皮石斛原球茎形成愈伤组织和不定芽进行了研究，具体的实验结果如下表所示：
请分析若要进行大规模的培养铁皮石斛，最好选择___________ 号培养基，判断的依据是___________________________ 。
(1)农杆菌的活化培养：挑取农杆菌于
(2)侵染石斛原球茎：挑选生长状态良好、颜色呈嫩绿色、质地均匀且较为松散的原球茎置于 36-45khz 条件下超声波处理 1-3min，把原球茎切割为 3-5mm方块，再对其进行
(3)共培养和筛选：侵染结束后，用滤纸吸干原球茎上多余侵染液，然后迅速将原球茎转移至共培养基培养；培养基中的蔗糖的作用是
(4)植株再生：将筛选得到的原球茎接种于筛选培养基中培养，待分化出芽后转入
(5)实验过程中用不同种类、浓度的激素对铁皮石斛原球茎形成愈伤组织和不定芽进行了研究，具体的实验结果如下表所示：
培养基号 | 培养基（MS） | 6-BA（mg/L） | 2,4-D（mg/L） | 蔗糖（g/L） | 接种数（个） | 原球茎死亡数（个） | 诱导愈伤组织数（个） | 每块愈伤不定芽数（个） |
1 | 1/2 | 0.5 | 1.2 | 30 | 30 | 5 | 25 | 3 |
2 | 1/2 | 1.0 | 1.5 | 20 | 30 | 4 | 26 | 3 |
3 | 1/2 | 1.25 | 0.8 | 25 | 30 | 3 | 27 | 11 |
4 | 3/2 | 0.5 | 1.5 | 25 | 30 | 6 | 24 | 3 |
5 | 3/2 | 1.0 | 0.8 | 30 | 30 | 4 | 26 | 7 |
6 | 3/2 | 1.25 | 1.2 | 20 | 30 | 3 | 27 | 5 |
请分析若要进行大规模的培养铁皮石斛，最好选择
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2023-02-16更新
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316次组卷
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3卷引用：浙江省七彩阳光浙南名校联盟2022-2023学年高三下学期返校考试生物试题
3 . 阅读下列材料，完成下面小题：
酿酒酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养的特点。可利用特定的培养基培养和分离高产酿酒酵母。在果酒的制作活动中，通常加入适宜浓度的蔗糖，以增加果酒制作的成功率。
1．下列适宜用于酿酒酵母的培养和分离的培养基是（ ）
2．在果酒的制作过程中，适当添加蔗糖，其原因不包括（ ）
酿酒酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养的特点。可利用特定的培养基培养和分离高产酿酒酵母。在果酒的制作活动中，通常加入适宜浓度的蔗糖，以增加果酒制作的成功率。
1．下列适宜用于酿酒酵母的培养和分离的培养基是（ ）
| A．马铃薯培养基 | B．LB培养基 |
| C．MS培养基 | D．鸡胚浸出液 |
| A．使果酒的酒精含量更高 |
| B．为酵母的增殖和发酵提供更多的碳源和能源 |
| C．特异性支持酵母细胞的增殖和生长，起选择作用 |
| D．适当提高溶液的渗透压可以抑制某些杂菌的生长 |
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4 . 回答下列（一）（二）小题：
（一）某科研小组尝试从自然发酵的泡菜中分离纯化优良乳酸菌，并对其进行产酸能力、生长能力和亚硝酸盐降解能力的测定，以挑选最优菌种。下表为该小组制作的提取分离乳酸菌的培养基配方，其中溴甲酚绿遇酸变黄。
请回答下列问题：
(1)配制该培养基，除表中的成分外还需添加2g的______ ；添加碳酸钙除了方便观察是否产酸，还可以产生CO2，以维持培养基______ 的恒定。
(2)初步筛选：应用____________ 方法进行分离，挑选出______ 的菌落作为初筛菌，再分别挑取其中形态大小各不相同的菌落进行菌种纯化；最终获得若干个不同的菌种用于后续测定。
(3)生长能力和亚硝酸盐降解能力的测定：光电比色法可用于细菌细胞密度的测定，OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。吸光值与溶液中吸光物质的浓度呈正比，通常用于细菌细胞密度（OD600）测量。在无菌条件下将不同菌种分别接种至MRS—NaNO2的培养基中，37℃厌氧培养24h。再将菌液______ ，测定OD600值，OD600值相对较小的菌株生长能力______ 。并通过测定发酵前后亚硝酸盐的含量，可以计算出______ 。
（二）面对新冠疫情，最常见的检测方法是新冠病毒核酸检测，原理为实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测法，技术流程如下图所示，①②③表示相关步骤。请回答：
(4)PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是____________ 。RT—PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加______ 酶。
(5)过程①中，RNA提取裂解液可同时灭活病毒，原因是______ 。采集到的样本要迅速进行病毒灭活处理，其目的是____________ 。步骤③需要的酶是______ ，引物F和引物R是根据______ 序列合成的。
(6)在进行新冠病毒核酸检测时，通常以病毒的ORFlab基因为检测的目标基因，是因为ORF1ab基因具有______ 的特点。检测试剂中还加有“阳性对照”和“阴性对照”，阴性对照的主要作用是____________ .
（一）某科研小组尝试从自然发酵的泡菜中分离纯化优良乳酸菌，并对其进行产酸能力、生长能力和亚硝酸盐降解能力的测定，以挑选最优菌种。下表为该小组制作的提取分离乳酸菌的培养基配方，其中溴甲酚绿遇酸变黄。
| 水 | 牛肉膏 | 蛋白胨 | 酵母膏 | 番茄汁 | 葡萄糖 | 吐温 | 碳酸钙 | 溴甲酚绿 |
| 100mL | 1g | 1g | 1g | 20g | 1g | 0.05mL | 1.7g | 0.01g |
请回答下列问题：
(1)配制该培养基，除表中的成分外还需添加2g的
(2)初步筛选：应用
(3)生长能力和亚硝酸盐降解能力的测定：光电比色法可用于细菌细胞密度的测定，OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。吸光值与溶液中吸光物质的浓度呈正比，通常用于细菌细胞密度（OD600）测量。在无菌条件下将不同菌种分别接种至MRS—NaNO2的培养基中，37℃厌氧培养24h。再将菌液
（二）面对新冠疫情，最常见的检测方法是新冠病毒核酸检测，原理为实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测法，技术流程如下图所示，①②③表示相关步骤。请回答：
(4)PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是
(5)过程①中，RNA提取裂解液可同时灭活病毒，原因是
(6)在进行新冠病毒核酸检测时，通常以病毒的ORFlab基因为检测的目标基因，是因为ORF1ab基因具有
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5 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）尽管除草剂的使用减轻了农民的劳动强度，但是因除草剂在土壤中不易被降解，且长期使用会导致土壤被污染，也影响农作物的生长及产量。为修复被某除草剂污染的土壤，科研人员选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂是一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。
(1)选育能降解该除草剂的细菌，应从______________ 中采集1g土样制备成细菌悬液，配制以_____________ 的固体培养基。
(2)在固体培养基中通过_____________ 方法分离培养出目的菌的单菌落，然后需通过测量______________ 的直径，比较它们的比值从而确定并筛选出降解除草剂的能力最强的菌株。
(3)取4个平板，在培养皿底部分别标记A、B、C、D，其中A、B、C平板分别取10-4稀释液加入0.1mL，D平板不加稀释液作对照，置于37℉恒温箱培养24小时，A、B、C平板上的菌落数分别是37、41、39，且对照的D平板上_____________ ，则可以推测1g土样中能降解该除草剂的菌数约为______________ 个。
(4)科研人员用射线处理该细菌进行_____________ 育种，获得两个突变株A和B，分别将A和B菌种接种在一般培养基中均不能生长，但是在一般培养基中添加营养物质甲后A菌种能生长，添加营养物质乙后B菌种能生长。如果将A菌种和B菌种混合接种在一般培养基中不加营养物质甲和乙也能生长，为什么?
__________________ 。
（二）甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更有应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示。
（说明：强启动子是一段有特殊结构的DNA片段：BamH、HindⅢ、EcoRI、NotI、SacI代表不同的限制酶；T-DNA是农杆菌的Ti质粒上的DNA片段；）
(5)构建超量表达P基因载体，需选用________________ 限制酶的组合和DNA连接酶。
(6)为了特异性扩增P基因序列，一般要加入的原料为_______________ ，需根据_______________ 设计特异性引物。
(7)经农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织，超量表达P基因会随T-DNA_______________ ，从而获得转基因植物细胞。继而进行植物组织培养，培养能中需加入_______________ 进行筛选，筛选出的愈伤组织再分化形成丛芽，然后在_______________ 培养基上形成根，最终获得多个玉米株系。发现某株系的P蛋白表达量较低，请对该现象作出合理的解释：______________________________ 。
（一）尽管除草剂的使用减轻了农民的劳动强度，但是因除草剂在土壤中不易被降解，且长期使用会导致土壤被污染，也影响农作物的生长及产量。为修复被某除草剂污染的土壤，科研人员选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂是一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。
(1)选育能降解该除草剂的细菌，应从
(2)在固体培养基中通过
(3)取4个平板，在培养皿底部分别标记A、B、C、D，其中A、B、C平板分别取10-4稀释液加入0.1mL，D平板不加稀释液作对照，置于37℉恒温箱培养24小时，A、B、C平板上的菌落数分别是37、41、39，且对照的D平板上
(4)科研人员用射线处理该细菌进行
（二）甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更有应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示。
（说明：强启动子是一段有特殊结构的DNA片段：BamH、HindⅢ、EcoRI、NotI、SacI代表不同的限制酶；T-DNA是农杆菌的Ti质粒上的DNA片段；）
(5)构建超量表达P基因载体，需选用
(6)为了特异性扩增P基因序列，一般要加入的原料为
(7)经农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织，超量表达P基因会随T-DNA
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6 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）在造纸过程中，热磨机械纸浆会使溶解性的果胶等物质从木料中释放，严重影响过滤。利用高产菌株制备碱性果胶酶进行处理，可以有效降低纸浆黏稠度。请回答：
(1)原理：果胶酶能将果胶分解为______________ ，从而提高纸浆澄清度和出浆率。
(2)高产产果胶菌种的分离：自然界中青霉菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌都存在分泌果胶酶的高产菌株，其中获取碱性果胶酶一般选择枯草芽孢杆菌，判断的依据是____________ 。用于分离产果胶酶菌株的培养基配方中，除了水、无机盐、氮源和必要的生长因子外，还应加入_____________ ，调节到适宜的pH后，再用______________ 灭菌。在冷凝形成的平板上，用____________ 法接种，经培养后长出的菌落中筛选____________ 即为高产菌株。
(3)生产优化：生产中，为了实现纸浆澄清的连续化处理，可以______________ ，该技术还具有____________ 等优点（至少答1点）。
（二）人参中含有多种固醇类化合物，统称为人参皂苷。其中人参皂苷Rg3能有效抗肿瘤血管生成。通过特定的细胞培养可以大量生产人参皂苷Rg3。具体的培养流程如下：首先利用人参组织制备出人参单细胞悬液，再通过植物细胞培养技术获得细胞的次生代谢产物，最后通过分离纯化获得特定产物Rg3。请回答：
(4)制备单细胞悬液。细胞分离有三种方法；其一是直接从外植体分离，包括机械法或酶解法，后者常用______________ 酶处理；其二是愈伤组织诱导法，愈伤组织相对松散，可直接放入______________ 在摇床上进行振荡培养，获得单细胞悬浮液；其三是原生质体再生法，在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液（作用是______________ ）中，用纤维素酶和果胶酶处理根尖、叶片、愈伤组织等细胞，获得球形的原生质体，然后在适宜条件下诱导再生出_____________ ，获得单个植物细胞。
(5)特定细胞系的培养。上述细胞经过初步培养，选出____________ 的细胞，在液体培养基中进行悬浮培养，通过多次____________ 培养，获得大量能合成人参皂甙的细胞系，用于工业化生产。在该培养过程中，能影响人参皂甙产量的因素除培养基因素外，还有哪些因素?____________ （列举两项）
(6)Rg3产物分离纯化。用乙醇溶解提取出总皂甙，然后加入硅胶柱，乙醇挥发后，皂甙吸附在胶柱上，然后从胶柱上端加注乙醇进行层析，先后分离出不同类型的皂甙。硅胶层析的方法能从总皂甙中分离出Rg3依据的原理是______________ 。
（一）在造纸过程中，热磨机械纸浆会使溶解性的果胶等物质从木料中释放，严重影响过滤。利用高产菌株制备碱性果胶酶进行处理，可以有效降低纸浆黏稠度。请回答：
(1)原理：果胶酶能将果胶分解为
(2)高产产果胶菌种的分离：自然界中青霉菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌都存在分泌果胶酶的高产菌株，其中获取碱性果胶酶一般选择枯草芽孢杆菌，判断的依据是
(3)生产优化：生产中，为了实现纸浆澄清的连续化处理，可以
（二）人参中含有多种固醇类化合物，统称为人参皂苷。其中人参皂苷Rg3能有效抗肿瘤血管生成。通过特定的细胞培养可以大量生产人参皂苷Rg3。具体的培养流程如下：首先利用人参组织制备出人参单细胞悬液，再通过植物细胞培养技术获得细胞的次生代谢产物，最后通过分离纯化获得特定产物Rg3。请回答：
(4)制备单细胞悬液。细胞分离有三种方法；其一是直接从外植体分离，包括机械法或酶解法，后者常用
(5)特定细胞系的培养。上述细胞经过初步培养，选出
(6)Rg3产物分离纯化。用乙醇溶解提取出总皂甙，然后加入硅胶柱，乙醇挥发后，皂甙吸附在胶柱上，然后从胶柱上端加注乙醇进行层析，先后分离出不同类型的皂甙。硅胶层析的方法能从总皂甙中分离出Rg3依据的原理是
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7 . 植物基因工程可以改造农作物性状，使农作物变得更加高产。如图是培育良种水稻的有关原理和步骤，有关叙述错误的是（ ） 
| A．图中表达载体中的T-DNA插入外源基因后将失去作用 |
| B．图中②过程需要在无菌环境下用Ca2+处理土壤农杆菌 |
| C．需要用除草剂检测转基因植株是否具有抗除草剂性状 |
| D．该过程需要用到固体和液体培养基 |
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2021-09-05更新
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1138次组卷
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4卷引用：浙江省“山水联盟”2021-2022学年高三上学期开学考试生物试题
浙江省“山水联盟”2021-2022学年高三上学期开学考试生物试题（已下线）2020年浙江省高考生物试卷（5）（已下线）第4章 基因工程 第2节 基因工程及其延伸技术应用广泛 思考与练习山西省运城市教育联盟2022-2023学年高二5月月考生物试题
8 . 椰毒假单胞菌是一种耐温性极强的细菌，对人体的肝、肾等器官会造成较大危害，下列相关叙述正确的是（ ）
| A．可通过在液体培养基中培养获得椰毒假单胞菌的单菌落 |
| B．利用豆芽汁配制的天然培养基是培养椰毒假单胞菌最适宜的培养基 |
| C．培养椰毒假单胞菌时可将接种好的培养皿倒置于4℃冰箱中 |
| D．利用涂布分离法测定椰毒假单胞菌的密度较实际值低 |
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2021-08-30更新
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265次组卷
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2卷引用：2022届浙江省高三百校秋季开学联考试题生物
9 . 回答下列（一）、（二）小题：
（一）某环保公司从污泥中分离到一种高效降解含氮污水的反硝化细菌菌株，能将硝态氮转化为氮气（2 NO3-- +10e-+12H+→N2+6H2O），菌株的筛选和固定化过程如下。
（1）目的菌的筛选：将1g活性污泥梯度稀释，各取0．1ml稀释液____________ 到选择培养基上，该培养基的唯一N源是_________ 。为了鉴别是否为反硝化细菌，在此培养基中应该加入________ ，适宜条件下培养获得单菌落，再进行选择纯化。
（2）目的菌的固定：配制海藻酸钠等溶液并用________ 法灭菌。然后采用_______________ 法固定，获得固定化小球，用_______________ 冲洗并保存。制作的凝胶球不宜过大，否则会使小球的_______________ 减小，影响小球内外物质交换，进而影响反硝化效率。
（3）目的菌的反硝化效率测定：配制不同C/N的培养液，分别加入100粒固定化小球，振荡培养48h后，测定培养液中NO3-的去除率，结果如图。
用反硝化细菌进行污水处理过程中，有时需要向污水中加入少量淀粉。结合实验结果分析，添加淀粉的主要目的是______________________________ 。
（二）如图为某一科研机构培育纯合的转基因抗除草剂玉米的过程图，据此回答：
（1）培育该转基因抗除草剂玉米的核心环节是______________________________ 。如果抗除草剂基因的碱基对序列未知，可以从_______________ 中获得目的基因。
（2）采用农杆菌转化法导入抗除草剂基因时，将农杆菌与单细胞混合培养一段时间后，在培养基中应加入_______________ ，以便在培养植物细胞的同时去除农杆菌。
（3）在将单细胞培养成幼苗前，要配制有适当营养物质和植物生长调节剂的含_______________ 琼脂的培养基，倒在灭菌试管中凝固成_______________ （A．固体 B液体 C．半固体）。
（4）欲在组培阶段筛选出抗除草剂的植物细胞，最简便的方法是______________________________ 。
（5）经过组织培养得到的幼苗常移至草炭土中，再逐渐降低环境中的__________ 进行锻炼，最后移至土中定植。
（6）为了提高育种的成功率，应该尽量选择性状优良、_______________ 的玉米品种。
（一）某环保公司从污泥中分离到一种高效降解含氮污水的反硝化细菌菌株，能将硝态氮转化为氮气（2 NO3-- +10e-+12H+→N2+6H2O），菌株的筛选和固定化过程如下。
（1）目的菌的筛选：将1g活性污泥梯度稀释，各取0．1ml稀释液
（2）目的菌的固定：配制海藻酸钠等溶液并用
（3）目的菌的反硝化效率测定：配制不同C/N的培养液，分别加入100粒固定化小球，振荡培养48h后，测定培养液中NO3-的去除率，结果如图。
用反硝化细菌进行污水处理过程中，有时需要向污水中加入少量淀粉。结合实验结果分析，添加淀粉的主要目的是
（二）如图为某一科研机构培育纯合的转基因抗除草剂玉米的过程图，据此回答：
（1）培育该转基因抗除草剂玉米的核心环节是
（2）采用农杆菌转化法导入抗除草剂基因时，将农杆菌与单细胞混合培养一段时间后，在培养基中应加入
（3）在将单细胞培养成幼苗前，要配制有适当营养物质和植物生长调节剂的含
（4）欲在组培阶段筛选出抗除草剂的植物细胞，最简便的方法是
（5）经过组织培养得到的幼苗常移至草炭土中，再逐渐降低环境中的
（6）为了提高育种的成功率，应该尽量选择性状优良、
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10 . （一）疫情下，各地的口罩使用量居高不下，为加快废弃口罩的处理，避免污染环境，某科研团队准备从土壤中筛选出能高效降解一次性口罩（熔喷布）的细菌（不分解琼脂），请回答下列问题。
（1）培养基的配置和灭菌：根据目标微生物的特性，配置相应的培养基，熔喷布主要成分为聚丙烯纤维（PP，组成仅含有C、H两种元素），用于筛选的固体培养基除需加入经过处理的聚丙烯粉末作为______________ 外，还应加入____________________________ 。配置好后，进行高压蒸汽灭菌，影响高压蒸汽灭菌效果的因素有温度、压力、灭菌时间，以及___________________________ 等（答出一点即可）。
（2）目的菌的获取、选择、扩大培养：目的细菌大多分布在距地表约5～10cm的潮湿土壤层， 因此土壤取样时，一般______________ 。在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，目的菌的作用可使目的菌落周围出现透明圈，应当选择______________ 的菌落作为目的菌群，接种于液体培养基中再进行扩大培养。
（3）目的菌的保存：在无菌操作下，用______________ 获取目的菌接种在斜面培养基上，培养适当时间后，置于4℃冰箱中保存。
（4）工业化使用：已知目的菌分解PP需要多种酶的共同参与，目的菌比酶分子大得多，工厂化降解PP时，通常采用______________ 法来固定目的菌。影响目的菌降解熔喷布效果的因素有温度、pH以及______________ 等（答出两点即可）。
（二）草甘膦是一种广谱高效的灭生性除草剂，它通过与 EPSPS（叶绿体中的一种酶）结合，抑制EPSPS的作用，阻断芳香族氨基酸的合成，从而引起细胞死亡。为了提高普通棉花对草甘膦的抗性，科学家通过转基因的方法获得转基因抗草甘膦棉花植株。请回答下列问题：
（1） 方法一叶绿体基因工程：科学家通过转基因的方法将某外源EPSPS基因转入棉花植株的叶绿体中，使其产生更多的 EPSPS，使得转基因棉花对草甘膦的抗性可达5mmol/L （比野生型棉花高10倍）。体外扩增 EPSPS基因常采用PCR技术，其原理是______________ 。将外源基因导入叶绿体需穿过________ 膜（具体名称），科研人员为将EPSPS基因导入叶绿体，利用压缩气体产生的动力，将EPSPS基因包裹在钨粉粒子表面成功打入叶绿体中。EPSPS基因导入成功后，是否赋予了棉花对草甘膦的预期抗性，还需要对转基因棉花进行的鉴定操作是____________________ 。
（2） 方法二细胞核基因工程：获取目的基因，将获取的三个抗草甘膦基因G10插入质粒，重组质粒的部分结构（箭头表示转录方向）如图所示。G10插入质粒后，不能影响质粒的___________________ 。将消毒后的棉花胚与含重组质粒的农杆菌在培养基上共培养，目的是___________________ 。将共同培养后的棉花胚转入含有营养物以及___________________ 的培养基中脱菌、诱导培养和筛选，从而得到转基因抗草甘膦棉花植株。
（3）从生物安全角度分析，叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比，安全性更高的原因是___________________ 。
（1）培养基的配置和灭菌：根据目标微生物的特性，配置相应的培养基，熔喷布主要成分为聚丙烯纤维（PP，组成仅含有C、H两种元素），用于筛选的固体培养基除需加入经过处理的聚丙烯粉末作为
（2）目的菌的获取、选择、扩大培养：目的细菌大多分布在距地表约5～10cm的潮湿土壤层， 因此土壤取样时，一般
（3）目的菌的保存：在无菌操作下，用
（4）工业化使用：已知目的菌分解PP需要多种酶的共同参与，目的菌比酶分子大得多，工厂化降解PP时，通常采用
（二）草甘膦是一种广谱高效的灭生性除草剂，它通过与 EPSPS（叶绿体中的一种酶）结合，抑制EPSPS的作用，阻断芳香族氨基酸的合成，从而引起细胞死亡。为了提高普通棉花对草甘膦的抗性，科学家通过转基因的方法获得转基因抗草甘膦棉花植株。请回答下列问题：
（1） 方法一叶绿体基因工程：科学家通过转基因的方法将某外源EPSPS基因转入棉花植株的叶绿体中，使其产生更多的 EPSPS，使得转基因棉花对草甘膦的抗性可达5mmol/L （比野生型棉花高10倍）。体外扩增 EPSPS基因常采用PCR技术，其原理是
（2） 方法二细胞核基因工程：获取目的基因，将获取的三个抗草甘膦基因G10插入质粒，重组质粒的部分结构（箭头表示转录方向）如图所示。G10插入质粒后，不能影响质粒的
（3）从生物安全角度分析，叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比，安全性更高的原因是
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