1 . 玉米原产亚热带，幼苗抗寒能力弱，为提高玉米植株的抗寒性，科学家利用基因工程将耐寒蛋白基因（LEA基因）导入玉米细胞中获得转基因玉米。如图为Ti质粒和LEA基因的酶切位点，其中酶A、B、C均为限制性核酸内切酶。回答下列问题：

(1)获取LEA基因的常用方法有___________________________________（答两种）。将Ti质粒和LEA基因构建成基因表达载体需要利用酶_____切割DNA，原因是__________________________________。
(2)构建好的基因表达载体导入土壤农杆菌前，需要用含Ca²⁺的溶液处理土壤农杆菌，目的是_________________。Ti质粒中的氨苄青霉素抗性基因的作用是__________________。
(3)将导入基因表达载体的土壤农杆菌与玉米根尖或茎尖制成的愈伤组织混合培养，经_________________获得玉米植株。为确保获得的玉米植株是抗寒性较强的转基因玉米，可进行__________________检测，之后再进行玉米植株的耐寒性实验。

2 . 回答下列与培育转基因植物有关的问题：
(1)要获得已知序列的目的基因，可采用化学合成或______的方法。

(2)如果不构建基因表达载体，直接将目的基因导入受体细胞，通常无法得到基因表达产物，其原因是目的基因在受体细胞中不能______，也不能____________。
(3)目的基因经BanHI酶切后，为与载体连接，应选择限制酶______对上述载体进行切割。
(4)若植物材料对农杆菌不敏感，将目的基因导入植物细胞可采用的转化方法是________________________。
(5)转化成功的植物细胞还需通过______技术才能获得再生植株。某些植物激素在高温下极易降解，一般在______除菌后再加入已经高温灭菌的培养基中。

3 . 根据所学，回答与分子克隆、动物克隆和植物克隆有关的问题：
(1)PCR技术用于体外复制DNA片段，属于分子克隆技术，它的原理是DNA双链复制利用PCR扩增目的基因的前提是________________________。
(2)目前动物克隆所用的技术是_______________，就是通过显微操作将供体的细胞核移入去核的____________中，使后者不经过受精即可被激活、分裂并发育成新个体。
(3)利用带侧芽的茎段可以获得丛状苗，利用茎段诱导产生愈伤组织也可获得丛状苗，前者总培养时间_________，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
(4)与发芽培养基相比，配制丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加___________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化、发育形成根。

4 . 草甘膦是一种非选择性内吸传导型茎叶处理除草剂，其机理是抑制与植物多种代谢途径有关的EPSP合酶的活性。科研人员试图培育抗草甘膦作物，主要过程如图所示。请回答下列问题：
   
(1)科研人员从草甘膦严重污染的土壤中分离出一株高抗草甘膦菌株——假单胞杆菌G6，利用______技术扩增其基因组，得到具有抗草甘膦特性的G6基因，该基因的表达对EPSP合酶的活性具有______（“促进”或“抑制”）作用。
(2)通过①过程将G6基因插入Ti质粒的______，并利用农杆菌将重组DNA导入矮牵牛细胞，通过②过程可将目的基因插入矮牵牛染色体DNA的原理是_________________。
(3)③过程可通过____________技术将经过培养、筛选后的矮牵牛细胞培育得到转基因矮牵牛植株。抗草甘膦基因来自假单胞杆菌G6，但经检测它可以在水稻细胞中表达，其原因是细菌和植物共用__________________。
(4)科研人员通过④过程对转基因矮牵牛进行个体生物学水平鉴定，最为合理有效的方法是________，为了使结果更具有说服力，进行该过程时可选择_____________作为对照。

5 . 草莓芳香浓郁，营养丰富。请回答下列与草莓栽培有关的问题。
(1)野生草莓是二倍体，通过特殊技术培育成的多倍体草莓更受大众欢迎，这利用了多倍体植株的____（答出两点）等特点。多倍体草莓的大量快速繁殖需要采集外植体细胞经过____与____过程，获得试管苗。该技术证明了已分化的植物细胞仍具有____。
(2)草莓植株感染病毒后会出现结实率下降，品质变差等问题。若要恢复其品质，可选取植物的____进行植物组织培养，获得脱毒苗。此外，也可将抗病毒基因导入细胞中培育出转基因抗病毒草莓植株。为了检测抗病毒基因是否导入转基因植物的组织细胞，需提取该细胞中的____（填“蛋白质”“总RNA”或“总DNA”）与基因探针进行分子杂交。
(3)在植物组织培养过程中，由于愈伤细胞处于分裂状态，可以对其进行射线诱变处理，促使其细胞内发生____，再进一步培养筛选获得草莓新品种。
(4)若想利用植物体细胞杂交技术培养出马铃薯—草莓杂种植物以提高土地的利用率，____（填“能”或“不能”）把两个物种细胞直接融合。

6 . 北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图表示将抗冻基因导入番茄细胞中以获取转基因抗冻番茄植株的过程。回答下列问题：

(1)利用PCR技术将北极比目鱼细胞中获取的抗冻基因进行大量扩增，PCR技术的原理是__________，扩增抗冻基因时需要设计引物，合成引物的前提条件是__________。
(2)农杆菌的Ti质粒上具有一段T-DNA，该DNA的特点是__________。通过基因工程技术获取抗冻番茄植株，该技术的核心步骤是__________。
(3)将导入了表达载体的农杆菌与取自番茄的细胞共同培养，通过农杆菌的__________，就可使目的基因进入番茄的叶肉细胞，再通过__________技术将细胞培养成完整的植株，与常规的种子繁殖方法相比，利用该技术培育抗冻番茄植株的特点是__________。

7 . 生物科技广泛应用于农业生产，以改善农作物品质、提高产量。植物成熟果实细胞中会表达大量的半乳糖醛酸酶（PG），导致成熟果实易于损伤。科学家利用番茄的PC基因构建反义PG基因表达载体，导入番茄细胞，培育出转基因延熟番茄。图甲是反义PG基因的作用机理，图乙是质粒结构图及相应的酶切位点。回答下列问题。

(1)从番茄细胞中提取PG基因转录的mRNA，经过___________产生cDNA，再用___________技术体外扩增。该技术需先设计合成___________，并使用___________酶来催化。
(2)构建反义PG基因表达载体时需在启动子和终止子之间反向插入PG基因。为使目的基因与质粒正确连接，并提高两者重组的成功率，需在扩增的目的基因两端分别引入____________（填“EcoRⅠ和EcoRI”“BamHⅠ和BamHI”或“BamHⅠ和EcoRI”）限制酶的识别序列。质粒上有标记基因，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是___________。
(3)用含反义PG基因的农杆菌侵染番茄细胞，再通过___________技术培育出转基因番茄。在转基因番茄中，反义PG基因能抑制PG合成的原因是阻断了____________。

9 . 索马甜是从非洲竹芋中提取的一种天然甜味蛋白，具有甜度高、能量低等优点。研究人员利用生物技术，让索马甜基因在微生物和动植物细胞中表达来获得索马甜。回答下列问题：
(1)将索马甜基因导入大肠杆菌前，需用______处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞：若要从牛乳汁中获得索马甜，构建基因表达载体时，应将索马甜基因和______重组在一起，并且选用牛的______作为受体细胞。
(2)若将目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的____________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。利用农杆菌转化植物细胞时，______（填“正常”或“受损”）的植物细胞更有利于农杆菌的侵染。
(3)导入索马甜基因的植物细胞可通过脱分化形成____________，然后经过再分化形成转基因植株。为避免外源基因通过花粉传播给其他植物造成基因污染，可将外源基因导入植物细胞的______（填“细胞质”或“细胞核”）中。

10 . 下表列出了4种限制酶的识别序列及切割位点，其中↓表示切割位点；图1表示含目的基因的DNA结构与限制酶酶切图谱，其中β链为转录模板链；图2表示某质粒的结构与限制酶酶切图谱。现利用表中所列限制酶、图示目的基因和质粒构建基因表达载体，进而培育转基因植物。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	Sau3AⅠ	BclⅠ	EcoRⅠ
识别序列	-G↓GATCD-	-↓GATC-	-T↓GATCA-	-G↓AATTC-

(1)运用PCR技术扩增图1所示目的基因时，需要选用的引物是引物B和______。
(2)为利于目的基因的定向插入和减少随意连接，处理含目的基因的DNA片段时应选用______两种限制酶，图2中卡那霉素抗性基因的作用是____________。
(3)Ti质粒上的T-DNA具有可转移并整合到受体细胞______上的特性。培育转基因植物时，受体细胞可以是受精卵或分化的体细胞，而培育转基因动物只能将基因表达载体导入受精卵，原因是____________。
(4)转基因植物细胞经过______过程可培育成试管苗，运用的是______技术。