1 . 科研人员利用PCR技术扩增X基因片段，需加入两种引物，引物结合位置如图1所示。PCR循环后产生5种DNA分子，如图2所示。下列叙述正确的是（       ）   

A．此过程中只需要热稳定的DNA聚合酶的催化

B．引物1和引物2可以重复利用，故无需加入较多的引物

C．获得图2中5种不同的产物至少要经过4轮循环

D．第4轮复制得到的DNA分子中，⑤所占比例为1/2

2 . 用质粒(图1)和含目的基因的DNA片段(图2)构建基因表达载体获得转基因大肠杆菌，下列叙述错误的是（       ）

A．若通过PCR技术获取该目的基因，应该选用引物甲和引物丙

B．在受体细胞中，氨苄青霉素抗性基因和目的基因可同时表达

C．若将基因表达载体导入受体细胞中，需先用Ca2＋处理大肠杆菌

D．利用质粒和目的基因构建表达载体，应选用BclⅠ和HindⅢ剪切

3 . 脱水素是青稞植株中的一种抗冻物质，脱水素基因Dhn4的结构如图1所示，其中B链为模板链。研究人员利用图2所示的质粒，通过农杆菌转化法将该基因导入草莓中，成功培育出了抗冻草每植株。回答相关问题。

说明：Xho Ⅰ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ为三种产生不同黏性末端的限制酶的识别位点：amp^r基因为氨苄青霉素抗性基因。
(1)利用PCR获取目的基因，提取青稞细胞的mRNA，经______过程获得PCR所需的模板。扩增Dhm4时应选择的引物组合是______，为使扩增后的产物按照正确方向与质粒连接，需在两个引物的______（填“5’”或“3’”）末端添加限制酶____________的识别序列。
(2)图2所示的质粒为农杆菌的______质粒，其中启动子的作用是_______________。
(3)将重组质粒导入用______处理过的农杆菌内，然后在含____________的培养基上筛选农杆菌，再将筛选后的农杆菌与草莓叶片共培养。1
(4)通过PCR技术检测草莓染色体上是否插入了Dhn4基因或____________；然后通过____________处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。

4 . 多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fatl，培育转fatl基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。据图回答下列问题：

(1)用PCR技术在体外扩增目的基因应用的是_____原理，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、______（答出2点）等。
(2)由图可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化，即线性DNA的末端相互连接形成圆环，以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用_______和____。
(3)构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是_____。除GFP基因外，未标注出的必需元件还有_______。
(4)猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期_______，以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为_____。此过程中，对于悬浮培养的细胞直接用___法收集细胞处理成细胞悬液。
(5)经检测，fatl基因成功整合在猪基因组DNA后，不能说明成功培育转基因猪，还需要_______。

5 . 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1-4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（       ）

A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键

B．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化

C．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置

D．在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基因

6 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

7 . 二十碳五烯酸（EPA）是人体需要的一种营养物质。某实验室利用转基因技术从海洋细菌中提取了EPA合成途径的关键基因。下图表示通过PCR获取和扩增基因的部分过程。下列叙述正确的是（       ）
   

A．PCR体系中需要加入引物、原料和等

B．据图可知，可以选择引物①④或者②③

C．PCR第n次循环需要个引物

D．用于PCR的两个引物的碱基序列一般相同

8 . 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（       ）

A．操作过程中需要用到的工具有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体

B．构建表达载体时应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温

D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

9 . PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：
   
(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_________________，提取到的DNA可以用_____________试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是______________；不科学的原因是_________________________________。

基因	引物序列
PO	F-5'GGGATT-3' R-5'AATCCC-3'
NOS	F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3' R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'
CP4-EPSPS	F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3' R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、___________酶、__________等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3)扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过_____________对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与________________________________等有关。

10 . COVID—19的抗原性与感染性与其表面的S蛋白（刺突糖蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建S蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。请回答下列问题。

(1)①过程所使用的酶为______，为保证PCR技术扩增S蛋白基因正常进行，该反应体系的主要成分有______。PCR技术中低温复性的目的是______。
(2)通过PCR技术可在cDNA分子中专一性扩增出S蛋白基因，其原因是______。PCR过程经过4次循环，需要的引物的数量是______个。
(3)构建好的重组质粒长度共2000bp，用限制酶HindⅢ及限制酶HindⅢ和BamHⅠ分别对重组质粒进行切割并电泳，结果如图乙所示，可推测BamHⅠ在重组质粒上有______个酶切位点。为使S蛋白基因在受体细胞中高效表达，需要把S蛋白基因正确插入重组质粒的______之间。