1 . PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：
   
(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_________________，提取到的DNA可以用_____________试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是______________；不科学的原因是_________________________________。

基因	引物序列
PO	F-5'GGGATT-3' R-5'AATCCC-3'
NOS	F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3' R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'
CP4-EPSPS	F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3' R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、___________酶、__________等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3)扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过_____________对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与________________________________等有关。

2 . 二十碳五烯酸（EPA）是人体需要的一种营养物质。某实验室利用转基因技术从海洋细菌中提取了EPA合成途径的关键基因。下图表示通过PCR获取和扩增基因的部分过程。下列叙述正确的是（       ）
   

A．PCR体系中需要加入引物、原料和等

B．据图可知，可以选择引物①④或者②③

C．PCR第n次循环需要个引物

D．用于PCR的两个引物的碱基序列一般相同

3 . 下列关于利用PCR技术扩增目的基因的叙述，错误的是（       ）

A．PCR技术利用DNA半保留复制的原理，使核糖核苷酸序列呈指数方式增加

B．扩增目的基因前，需要设计可与目的基因的碱基序列互补的两种双链引物

C．基因的扩增依赖于模板、耐高温的DNA聚合酶和原料等物质

D．加热至90 ℃以上的目的是使基因的磷酸二酯键断裂

4 . COVID—19的抗原性与感染性与其表面的S蛋白（刺突糖蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建S蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。请回答下列问题。

(1)①过程所使用的酶为______，为保证PCR技术扩增S蛋白基因正常进行，该反应体系的主要成分有______。PCR技术中低温复性的目的是______。
(2)通过PCR技术可在cDNA分子中专一性扩增出S蛋白基因，其原因是______。PCR过程经过4次循环，需要的引物的数量是______个。
(3)构建好的重组质粒长度共2000bp，用限制酶HindⅢ及限制酶HindⅢ和BamHⅠ分别对重组质粒进行切割并电泳，结果如图乙所示，可推测BamHⅠ在重组质粒上有______个酶切位点。为使S蛋白基因在受体细胞中高效表达，需要把S蛋白基因正确插入重组质粒的______之间。

5 . 高危型HPV持续感染人体可导致宫颈癌，常用HPV抗体检测血清中的HPV含量，进行宫颈癌的临床诊断。如图所示的是HPV单克隆抗体的制备流程示意图。回答下列问题：
   
(1)若①过程表示扩增HPV基因，则采用的技术手段是__________技术，该过程可以在__________中自动完成，常采用__________来鉴定PCR的产物。
(2)构建重组质粒时，为确保HPV基因与质粒准确连接，可采用的限制酶为__________；过程②一般先用__________处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种___________的生理状态，然后再将重组质粒导入其中。
(3)诱导能产生特定抗体的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的常用方法有___________，③表示__________过程，获得的C细胞的特点是__________。

6 . 被称为“水中小白鼠”的斑马鱼是一种体长4厘米左右的热带淡水鱼，与人类基因同源性高达87%，并有相似的器官、生理功能和信号通路。由于发育周期短、费用低、体外受精、透明等优点，斑马鱼现在越来越广泛地应用于毒性检测、疾病模型创制、药物筛选等领域中。
研究人员欲通过使胰岛素基因表达受阻从而构建糖尿病模型斑马鱼。吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，通过将其注入斑马鱼受精卵可阻碍相关基因的表达。针对其作用原理，现有两种假说：
假说1：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切。
假说2：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。
   
为了验证上述假说，研究人员进行了如下实验：
(1)从受精卵发育了3天的实验组和对照组的细胞中提取总RNA，再通过逆转录获得cDNA。若假说1成立，选择上图所示引物2和引物3进行PCR后的结果为______（填字母）。

A．实验组有杂交带

B．实验组无杂交带

C．对照组有杂交带

D．对照组无杂交带

(2)若要证明假说2成立，进行PCR时，需要选择上图所示引物组合有__________。
(3)采用PCR技术扩增DNA需要引物的原因是__________________。
(4)为了获取大量斑马鱼胚胎干细胞用于药物筛选，可加入__________________，用于分散斑马鱼囊胚中的__________________。再取分散细胞作为初始材料进行______培养，然后分瓶继续培养。

7 . 双链DNA的两条链在复制过程均可作为模板。下图为DNA的复制示意图。以下有关说法错误的是（       ）
   

A．图中的甲、乙分别为解旋酶、DNA聚合酶

B．丙、丁两条链的延伸方向都是5'→3'

C．完成一次复制所需的胞嘧啶和胸腺嘌呤数量相等

D．若进行PCR，引物之间应避免相互碱基互补配对

8 . 荧光定量PCR技术可定量检测样本中的DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当子链延伸至探针处时会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有一个荧光分子生成，荧光监测系统随时接收荧光信号的变化，如图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．在反应体系中，检测到的荧光信号越强则消耗的引物越多

B．1个DNA分子经过3次循环会得到8个两条链等长的DNA分子

C．PCR所用引物1和引物2均是由脱氧核苷酸组成的

D．人工设计合成的引物1的碱基序列不能与引物2的互补配对

9 . 我国科学家利用苏云金杆菌中的Bt基因培育出转基因抗虫棉，下列说法错误的是（       ）

A．科学家已对Bt基因的序列信息，表达产物等有了较为深入的了解

B．筛选Bt基因后可以利用PCR技术对其进行大量的扩增

C．培育转基因抗虫棉的核心工作是将Bt基因导入棉花细胞中

D．检查转基因抗虫棉是否培育成功首先要进行分子水平的检测

10 . 下面关于聚合酶链式反应（PCR）的叙述，错误的是（       ）

A．PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合

B．PCR过程中DNA聚合酶能够将4种脱氧核苷酸加到引物的5’端

C．PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成

D．PCR的每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步