1 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

2 . 大量研究表明，家畜的肉类产量与肌生长抑制素（MSTN）基因有关，MSTN蛋白在体内主要调控骨骼肌的生长发育。多种动物研究已经证实，敲除基因MSTN可以显著增加动物的肌肉质量。科研人员希望利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得敲除了基因MSTN的家禽。请回答下列问题：

(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统原理如图1，Cas9酶可催化DNA分子的断裂，实现对目的基因的特异性切割，在切割过程中破坏的化学键是____________。图中向导RNA的作用是定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，其原理是____________。
(2)科研人员希望在鸡胚细胞中表达CRISPR/Cas9基因编辑系统，构建的基因表达载体如图2。

①在对向导RNA对应的DNA片段进行PCR扩增时，需要在其两端分别添加限制酶____________、____________的识别序列。
②用①中限制酶切割质粒和向导RNA对应的DNA片段，选择这种酶切方式的目的是____________。
③基因表达载体上，除了图示序列和标记基因外，还需要连接的DNA片段是____________。
(3)将鸡胚分为三组并提取DNA，用图2中的引物Ⅰ和引物Ⅱ进行PCR扩增，并对PCR结果进行电泳检测，结果如图3。

1组电泳的结果小于2组，其原因是____________。3组电泳无结果，其原因是____________。

3 . 东北酸菜是白菜经腌制而成的传统食品。发酵过程中若霉菌等微生物大量繁殖会导致酸菜腐败发臭。研究人员从酸菜中分离出具有抑菌活性的乳酸菌，该类乳酸菌因能分泌新型细菌素（多肽）而具有抑菌活性。为获得细菌素表达量更高的工程菌用于生产，进行了相关研究。回答下列问题。
(1)乳酸菌产生的乳酸能溶解碳酸钙而产生溶钙圈。研究人员为从市售多个品牌的酸菜中分离纯化乳酸菌，配制含有碳酸钙的固体培养基，利用_____法对该培养基进行灭菌，并采用_____法将酸菜液接种到培养基中，选择有溶钙圈的菌落并继续进行纯培养。
(2)通过上述方法筛选得到6种乳酸菌，测得它们对霉菌的抑菌率如下表，应选择乳酸菌编号为_____的菌株进行后续操作。

乳酸菌编号	Ll	L2	L3	L4	L5	L6
抑菌率/%	28．57	19．48	58．44	14．28	6．49	36．36

(3)研究人员从上述乳酸菌中提取细菌素基因，将其导入受体菌，再对受体菌做进一步的检测与鉴定。下面是细菌素基因及构建的基因表达载体的示意图。

①利用PCR技术扩增细菌素基因时，应选择的一对引物是_____。PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是_____。
②若以细菌素基因甲链为转录的模板链，为构建基因表达载体，应在与甲链结合的引物的5＇端加入_____（填“BamH I”或“Nde I”）的识别序列。
③转化操作后提取受体细胞中的DNA，并利用选择的引物进行扩增，再对扩增产物进行电泳检测，结果如下图。

1：DNA标准样 2：普通受体菌的DNA 3：转化操作后受体菌的DNA 4：无菌水

设置4号的目的是_____（答出1点即可），电泳结果表明_____。

5 . 磷脂酸（PA）是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化，研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白（PABD）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合，构建有效监测细胞PA变化的荧光探针，并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如图所示，请回答下列问题。

注：bar为草胺膦抗性基因；Kan^r为卡那霉素抗性基因。
(1)无缝克隆时，T5核酸外切酶沿_____（填“5´→3´或“3´→5´”）的方向水解DNA，其目的是形成_____。T5核酸外切酶催化的最适温度为37℃，而过程①选择的温度为50℃，目的是降低酶活性， _______。
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”的原因是______，过程③所需的酶有_______。
(3)与传统的酶切再连法相比无缝克隆技术构建重组质粒的优点有________。

A．不受限制酶切位点的限制

B．不会引入多余碱基，不会出现移码突变

C．操作相对简单，成功率高

D．不需要使用PCR技术扩增目的基因

(4)PCR扩增PABD基因时需依据______的核苷酸序列设计引物R1。据图分析扩增目的片段的所用的引物F1和R2可对应下表中的________（填序号）。

①	5´-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-3´
②	5´-AGCTATAGTTCTAGATCTAGATTAACTAGTCTTAGTGGCGTC-3´
③	5´-TATCGATGGCGCCAGCTGAGGATGGTGAGCAAGGGCGA-3´
④	5´-GCTCGAGATCTGAGTCCGGACTTGTACAGCTCGTCCA-3´

(5)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥，将获得的种子进行表面消毒，均匀铺在含有______的MS培养基上进行筛选和鉴定，将筛选得到的种子种植可得到转基因拟南芥，通过观测转基因拟南芥根尖细胞中_____，了解PA的分布和含量。

6 . 图1表示的是细胞内DNA复制的过程，图2表示图1中RNA引物去除并修复的过程，下列有关叙述错误的是（       ）

   

A．DNA体内复制和PCR过程所需的引物不同，且PCR反应引物不需要去除

B．细胞内核酸形成过程中都存在A//U碱基对

C．酶3为DNA聚合酶，其在“被修复链”上的移动方向是5'→3'，DNA聚合酶还能够从引物的3'开始连接脱氧核苷酸

D．酶4能催化磷酸二酯键的形成，PCR反应也需要酶4的参与

7 . 土壤盐渍化会影响水稻生长发育，研究人员将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图所示，其中Tet^R为四环素抗性基因，Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，①~⑤表示操作过程。回答下列问题：

限制酶	BanHI	BclI	SmaI	Sau3AI
识别位点及切割位点	－G↓GATCC－	－T↓GATCA－	－CCC↓GGG－	－↓GATC－

(1)为了防止质粒自身环化，保证OsMYB56基因和酶切后的质粒定向连接，在目的基因复制前，设计PCR引物时最好在引物的_______端添加含有限制酶______的识别序列。根据上图信息可知，设计的引物序列一种是5'－CCCGGGTCTGTTGAAT－3'，另一种是_______（共写出16个碱基的序列）。
(2)过程②中需要先用_______处理根瘤农杆菌，使根瘤农杆菌处于_______的状态，以便将基因表达载体导入细胞。
(3)过程③中利用了质粒中的T－DNA______的特点；过程④中，从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素主要有生长素和________，该过程还需要光照，其作用是______（答出1点）。

8 . 传统的基因测序往往需要从大量细胞中提取DNA。科研人员应用单细胞基因组扩增技术，成功地在体外对分离得到的极体进行了基因组扩增（PCR），并完成了测序，从而推测出与被测极体同时产生的卵细胞不含致病基因，最终借助试管婴儿技术帮助女性遗传病患者获得健康婴儿，试管婴儿技术涉及体外受精、胚胎移植等技术。下列有关叙述，正确的是（　　）

A．被测极体的单细胞基因组只包含一个染色体组上的基因

B．体外扩增DNA需要引物，体内DNA复制不需要引物

C．精子获能指精子在获能液中获得ATP后才具备受精能力

D．PCR反应缓冲溶液中要添加Mg2+、耐高温的DNA解旋酶

9 . 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（       ）

A．操作过程中需要用到的工具有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体

B．构建表达载体时应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温

D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

10 . 环境DNA（eDNA——环境中的总DNA）技术在鱼类生态学中应用的基本方法是：从目标水体环境（如池塘）中获得eDNA，对鱼类科、属、种等的特定核酸序列扩增、定量和测序。应用该技术理论上不易实现的是（     ）

A．外来物种入侵的监测	B．种群年龄结构的建立
C．两个种群密度的比较	D．两个物种生物量的比较