2 . 为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。

为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（       ）

A．①+③

B．①+②

C．③+②

D．③+④

3 . 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然 EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述错误的是（       ）

A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因的启动子的上游

B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达

C．可用显微注射技术将含有EPO基因的表达载体导入羊的受精卵中

D．用PCR扩增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列

4 . 新冠病毒通过表面的S蛋白与靶细胞膜上的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合实现入侵，血清中新增的新冠病毒特异性抗体IgM和IgG可作为病原学诊断标准。图1为病毒感染及发病流程，图2为相关抗体含量的变化曲线。请回答下列问题：

(1)对易地流动人员实行集中隔离不少于14天的理论依据是____________________。目前新冠病毒的检测方法主要有核酸和抗体检测，与抗体检测相比，核酸检测的优点有________、________等。
(2)分析图1和图2可知，检测________抗体呈阳性可作为近期感染的指标。若某人抗体检测阳性，核酸检测阴性，可能的原因是____________________________________。
(3)血清抗体检测常采用下图所示的试纸条，添加后的待检血样通过毛细作用沿试纸条向前移动，红色标记的新冠病毒抗原可随之移动，最终根据T线和C线的颜色对检测结果作出分析。

① 据题中信息推测，试纸条上新冠病毒抗原的成分最可能是____________________。
② 血清抗体检测过程中反复发生____________的特异性结合；若检测结果为阳性，则这种结合发生________次。
③ 若____________________，则检测为阳性，说明血样中含有新冠病毒特异性抗体；若________，则检测为阴性，说明血样中不含有新冠病毒特异性抗体。
(4)新冠病毒的预防主要是接种疫苗，灭活病毒疫苗是一种常见的疫苗，灭活病毒疫苗制备前期需用细胞膜上具有____________________的细胞培养新冠病毒。两次接种需间隔一段时间，若时间过短，接种效果不理想的原因是疫苗会与__________________结合，导致不能产生足够多的新抗体和记忆细胞。

5 . 环境DNA（eDNA——环境中的总DNA）技术在鱼类生态学中应用的基本方法是：从目标水体环境（如池塘）中获得eDNA，对鱼类科、属、种等的特定核酸序列扩增、定量和测序。应用该技术理论上不易实现的是（     ）

A．外来物种入侵的监测	B．种群年龄结构的建立
C．两个种群密度的比较	D．两个物种生物量的比较

6 . 磷脂酸（PA）是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化，研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白（PABD）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合，构建有效监测细胞PA变化的荧光探针，并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如图所示，请回答下列问题。

注：bar为草胺膦抗性基因；Kan^r为卡那霉素抗性基因。
(1)无缝克隆时，T5核酸外切酶沿_____（填“5´→3´或“3´→5´”）的方向水解DNA，其目的是形成_____。T5核酸外切酶催化的最适温度为37℃，而过程①选择的温度为50℃，目的是降低酶活性， _______。
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”的原因是______，过程③所需的酶有_______。
(3)与传统的酶切再连法相比无缝克隆技术构建重组质粒的优点有________。

A．不受限制酶切位点的限制

B．不会引入多余碱基，不会出现移码突变

C．操作相对简单，成功率高

D．不需要使用PCR技术扩增目的基因

(4)PCR扩增PABD基因时需依据______的核苷酸序列设计引物R1。据图分析扩增目的片段的所用的引物F1和R2可对应下表中的________（填序号）。

①	5´-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-3´
②	5´-AGCTATAGTTCTAGATCTAGATTAACTAGTCTTAGTGGCGTC-3´
③	5´-TATCGATGGCGCCAGCTGAGGATGGTGAGCAAGGGCGA-3´
④	5´-GCTCGAGATCTGAGTCCGGACTTGTACAGCTCGTCCA-3´

(5)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥，将获得的种子进行表面消毒，均匀铺在含有______的MS培养基上进行筛选和鉴定，将筛选得到的种子种植可得到转基因拟南芥，通过观测转基因拟南芥根尖细胞中_____，了解PA的分布和含量。

7 . 脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP，ddN-P_α～P_β～P_γ）的结构均与核苷三磷酸（NTP）类似，仅是所含五碳糖的羟基（-OH）数目不同。在DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，从而终止DNA片段延伸。现有一些序列为5＇-GACTATGATCGTA-3＇的DNA分子单链片段，将其作为模板与引物、底物、Taq DNA聚合酶、Mg^2﹢及缓冲溶液加入反应管中，底物中仅有一种被³²P标记。通过PCR获得被³²P标记且3＇端为碱基A的不同长度子链DNA．下列叙述错误的是（       ）

A．dNTP做PCR的原料时也可为DNA复制提供能量

B．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和α位32P标记的ddATP

C．ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的3＇末端

D．实验结束后最多可得到4种被32P标记的子链DNA

8 . 人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。通过基因工程技术可以大量制备基因工程药物t-PA。
(1)研究人员采用PCR技术可以获得大量t-PA基因，PCR的原理是_______________。此外，大量获得t-PA基因的方法还有___________________（答出1种）。
(2)高质量的DNA模板是成功扩增目的基因的前提条件之一，在制备DNA模板时，可以用高温处理的方法去除其中的蛋白质，原因是________________。
(3)研究表明，为心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高，若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：如图1表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）请回答下列问题：

①以上制造出性能优异的改良t-PA蛋白的过程被称为___________。已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为___________。
②如图所示，需选用限制酶XmaI和___________切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接。与单一酶酶切相比，本操作采用的双酶切方法的优点是___________。
③将连接好的DNA分子导入大肠杆菌，含t-PA改良基因重组DNA分子的细胞应具有的性状是________
A．新霉素抗性且呈蓝色                    B．新霉素敏感且呈蓝色
C．新霉素抗性且呈白色                    D．新霉素敏感且呈白色

9 . 癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后，可抑制T细胞活性并启动其凋亡程序，导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定，为制备抗体打基础。研究中所用引物a和β碱基序列见图1，几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2:

   

(1)首先提取细胞中的mRNA逆转录生成cDNA作为模板：设计含有不同的限制酶切位点的α和β序列为引物，通过______技术扩增目的基因。
(2)为保证目的基因和载体正向连接，选用图中的名称为______的限制酶将质粒和目的基因进行切割，再用DNA连接酶构建表达载体。该表达载体的组成，除了目的基因、标记基因（抗卡那霉素基因）外，还必须具有______等（写出2点即可）。
(3)而后一定温度下，与经过Ca²⁺处理的感受态大肠杆菌混合培养在含______培养基中，可筛选出已经完成转化的大肠杆菌，继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
(4)将扩增后的“载体A/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后，为确定PD-1基因是否表达，检测细胞膜表面是否具有______研究中还会有一步骤是只将载体A转入293T细胞，其目的是______。

10 . RDX是一种弹药使用后残留的危险污染物。研究人员将两个源于细菌的RDX 降解酶基因 XplA 和 XplB 插入柳枝稷草染色体中，如图所示，使柳枝稷草获得降解实弹射击场土壤中RDX的能力。若要通过PCR检测所获转基因柳枝稷草中是否含有正确插入的XplA 和 XplB 基因，应选择的引物组合是（　　）

   

A．引物 1+引物3

B．引物 1+引物4

C．引物2 +引物3

D．引物2+引物4