2 . 科研人员利用PCR技术扩增X基因片段，需加入两种引物，引物结合位置如图1所示。PCR循环后产生5种DNA分子，如图2所示。下列叙述正确的是（       ）   

A．此过程中只需要热稳定的DNA聚合酶的催化

B．引物1和引物2可以重复利用，故无需加入较多的引物

C．获得图2中5种不同的产物至少要经过4轮循环

D．第4轮复制得到的DNA分子中，⑤所占比例为1/2

3 . 重叠延伸PCR技术是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸．将不同来源的扩增片段重叠拼接起来的技术，可通过定点诱变在体外改造DNA分子。如图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列说法正确的是（       ）

A．在引物1、引物2组成的反应系统中，经过②形成图示双链DNA至少要经过3次循环

B．引物2中有一个碱基不能与目的基因片段配对，但引物与模板链依然能配对

C．经过过程④获得的杂交DNA有2种，都可以经过过程⑤获得目的基因

D．以过程⑤获得的双链DNA为模板，用引物1和引物4进行PCR可扩增定点诱变目的基因

4 . 传统的PCR反应体系中各成分一次性加入并进入循环，在反应温度由室温（25℃）上升至高温（90℃）过程中，可能发生引物与模板中的非靶位点错配，在热稳定的DNA聚合酶的作用下延伸，形成非特异性产物。热启动PCR可优化目标扩增产物，方法之一是先将除DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到70℃以上，再混入酶，然后启动PCR扩增。下列说法错误的是（       ）

A．非特异性产物可能会在以后的循环中继续扩增

B．热启动PCR可减少非特异性产物的形成

C．模板DNA双链解聚前不会与引物结合

D．PCR反应中温度的周期性变化会引起DNA聚合酶结构的周期性改变

5 . 脱水素是青稞植株中的一种抗冻物质，脱水素基因Dhn4的结构如图1所示，其中B链为模板链。研究人员利用图2所示的质粒，通过农杆菌转化法将该基因导入草莓中，成功培育出了抗冻草每植株。回答相关问题。

说明：Xho Ⅰ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ为三种产生不同黏性末端的限制酶的识别位点：amp^r基因为氨苄青霉素抗性基因。
(1)利用PCR获取目的基因，提取青稞细胞的mRNA，经______过程获得PCR所需的模板。扩增Dhm4时应选择的引物组合是______，为使扩增后的产物按照正确方向与质粒连接，需在两个引物的______（填“5’”或“3’”）末端添加限制酶____________的识别序列。
(2)图2所示的质粒为农杆菌的______质粒，其中启动子的作用是_______________。
(3)将重组质粒导入用______处理过的农杆菌内，然后在含____________的培养基上筛选农杆菌，再将筛选后的农杆菌与草莓叶片共培养。1
(4)通过PCR技术检测草莓染色体上是否插入了Dhn4基因或____________；然后通过____________处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。

6 . 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1-4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（       ）

A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键

B．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化

C．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置

D．在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基因

7 . 脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—P_α~P_β~P_γ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被³²P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺及缓冲溶液。下列叙述正确的是（　　）

A．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP

B．TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，并需要Mg2+激活

C．ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端

D．实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA

8 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

9 . 大量研究表明，家畜的肉类产量与肌生长抑制素（MSTN）基因有关，MSTN蛋白在体内主要调控骨骼肌的生长发育。多种动物研究已经证实，敲除基因MSTN可以显著增加动物的肌肉质量。科研人员希望利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得敲除了基因MSTN的家禽。请回答下列问题：

(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统原理如图1，Cas9酶可催化DNA分子的断裂，实现对目的基因的特异性切割，在切割过程中破坏的化学键是____________。图中向导RNA的作用是定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，其原理是____________。
(2)科研人员希望在鸡胚细胞中表达CRISPR/Cas9基因编辑系统，构建的基因表达载体如图2。

①在对向导RNA对应的DNA片段进行PCR扩增时，需要在其两端分别添加限制酶____________、____________的识别序列。
②用①中限制酶切割质粒和向导RNA对应的DNA片段，选择这种酶切方式的目的是____________。
③基因表达载体上，除了图示序列和标记基因外，还需要连接的DNA片段是____________。
(3)将鸡胚分为三组并提取DNA，用图2中的引物Ⅰ和引物Ⅱ进行PCR扩增，并对PCR结果进行电泳检测，结果如图3。

1组电泳的结果小于2组，其原因是____________。3组电泳无结果，其原因是____________。