1 . 雪花莲凝集素（GNA，一种植物外源激素）和穗苋凝集素（ACA）均能够杀死害虫，但对高等动物安全。研究人员构建了GNA-ACA融合基因（两种基因的核苷酸序列不同），并将该融合基因构建基因表达载体后导入棉花细胞中，以期获取转基因抗虫棉新品种，相关过程如图所示。回答下列问题：

   

(1)研究人员利用PCR技术扩增GNA基因和ACA基因时所选择的引物并不相同，原因是____。
(2)需要使用限制酶和____酶构建GNAACA融合基因，其中限制酶应该选择____。
(3)将GNA-ACA融合基因与载体pBI121正确连接后导入棉花细胞中，该过程常用方法是____，其中Ti质粒上的T-DNA的作用是____。
(4)成功获取含GNA-ACA融合基因的棉花细胞后，可通过植物组织培养技术获取转基因抗虫棉植株，其依据的原理是____。为检测转基因抗虫棉是否培育成功，个体水平鉴定的思路是____。

2 . 毕氏酵母重组菌是将木聚糖酶基因（XynA）连接到含有自主复制序列（PARS）的游离表达载体上，然后转化至毕氏酵母中，筛选得到毕氏酵母重组菌（如图）。质粒中的Ori代表复制原点，Amp^R代表氨苄青霉素基因。回答下列问题：

   

(1)XynA的基本组成单位是______；过程②为PCR，对XynA进行PCR扩增时并不需要知道XynA全部的核苷酸序列，但是必须知道XynA______（填“一端”或“两端”）的核苷酸序列，以便______。若XynA中C—G碱基对所占比例较高，则PCR时的变性温度也高，原因是______。
(2)PCR产物中出现了部分非目标序列，可能的原因有______（答一点）。
(3)根据重组质粒分析，切割原质粒和XynA的限制酶最可能是______，若XynA两端具有Pst I的识别位点，但并不建议用限制酶PstⅠ构建重组质粒，理由是______（答两点）。

3 . 生物钢的强度比钢的强度大4～5倍，但有蚕丝般的柔软和光泽，可用于制造高级防弹衣。科学家从蜘蛛中获取蜘蛛丝蛋白基因并将其植入山羊体内，让羊奶含有蜘蛛丝蛋白，再利用特殊的纺丝程序，将羊奶中的蜘蛛丝蛋白纺成丝。回答以下问题：
(1)将蜘蛛丝蛋白基因的mRNA逆转录，再进行PCR可获得蜘蛛丝蛋白基因，整个过程中所需要的酶是______，所需要的原料是______。
(2)通过PCR获得蜘蛛丝蛋白基因时需要引物，引物的作用是______。
(3)为获得多只能产含有蜘蛛丝蛋白的羊奶的转基因山羊，相关流程如图所示。

   
①A步骤中将蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入甲羊的受精卵中常用______法。
②一般情况下，C步骤中选择乙羊的供体细胞来进行核移植时，有胚胎细胞和体细胞的细胞核可供选择，前者进行核移植的难度明显______后者的，原因是______。
③G步骤中，可采用胚胎分割技术来提高早期胚胎的利用率，该过程中应选择发育良好、形态正常的______胚。

4 . 肌肉生长抑制素（MSTN）是一种骨骼肌生长发育的负调控因子，可抑制肌细胞的增殖，MSTN基因沉默则可增加的方面。科研人员通过构建MSTN基因的反义基因（其转录出的mRNA会与MSY。A因转录出的mRNA特异性结合）表达载体，将其是山羊胎儿纤维细胞，实现了人成纤维细胞中MSTN基因的沉默，再结合体细胞核移植技术，成功制备了转基因。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增MSTN基因的反义基因前提是要有_____，以便合成引物。在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(2)将MSTN基因的反义基因与质粒构建成目的基因表达载体时，所需要的两种酶是_____。
(3)将构建好的MSTN基因的反义基因表达载体导入山羊胎儿成纤维细胞，从中筛选反义基因成功表达的细胞。在成纤维细胞体外培养过程中会出现细胞贴壁和_____现象，导致成纤维细胞的增殖不能一直进行。将具有反义基因的成纤维细胞注入经去核处理后的卵母细胞中，通过电刺激使二者融合，形成重组胚胎，去核的目的是_____。
(4)用特定方法激活并促进重组胚胎细胞分裂和发育。在养殖过程中发现，公羊的肌肉量比母羊的更高，为获得更多公羊，需在胚胎发育早期进行相关操作，具体操作是_____。

5 . 天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于其缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在基因B，现用基因工程技术培育蓝玫瑰。回答下列问题：
(1)可提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经______获得目的基因，再利用PCR进行扩增。PCR每次循环分为3步，其中温度冷却至55~60℃的目的是______。为获取基因B，也可以提取矮牵牛的全部DNA，切割后与载体连接，导入受体菌的群体中储存，这个群体称为矮牵牛的_______。
(2)若将基因B插入农杆菌Ti质粒上的T-DNA中，得到含目的基因的重组Ti质粒，则可用农杆菌转化法将该基因导入玫瑰的叶肉细胞中。用农杆菌感染时，应优先选用玫瑰受伤的叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_______。将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA的原因是_____。
(3)将转基因玫瑰的叶肉细胞，经过组织培养培育出转基因蓝色玫瑰植株，具体的操作方法是_____。
(4)若获得的转基因玫瑰（目的基因已经整合到玫瑰的基因组中）并没有开蓝色花，根据中心法则分析，其可能的原因是_______。

6 . 干旱，盐碱和冻害是限制植物生长发育的主要逆境因子，胚胎晚期丰富蛋白（LEA）是一类重要的植物细胞脱水保护蛋白，在抵御干旱等非生物胁迫过程中发挥着保护功能。科研工作者将拟南芥的LEA基因转入小麦体内培育转基因耐盐品系小麦，以提高小麦的抗盐碱性。回答下列问题：
(1)为获取LEA基因，可以从拟南芥细胞中提取总RNA，经过逆转录过程得到___________，再利用___________技术进行大量扩增。
(2)在体外人工扩增LEA基因的过程中，要控制反应体系的温度变化。加热至90~95℃的目的是___________；随后冷却至55~60℃，再加热至70～75℃的目的是__________。
(3)构建基因表达载体是基因工程的核心，操作过程中用到的有关酶是____________。常用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞，转基因植物的基因组中含有目的基因片段，原因是____________。
(4)为检测转基因小麦是否表达出了LEA，常用___________法进行检测。

7 . 沃森和克里克发现了DNA规则的双螺旋结构后，标志人类对生物遗传和变异的研究真正进入到分子水平。下列关于DNA的叙述错误的是（       ）

A．真核细胞中DNA分子均具有两个游离的磷酸基团

B．DNA分子中碱基对发生变化不一定会引起基因序列的改变

C．DNA分子中氢键可通过解旋酶、RNA聚合酶或高温作用打开

D．DNA分子一条单链上相邻两个碱基通过脱氧核糖、磷酸和脱氧核糖相连

8 . dMAb技术是一种通过DNA编码产生单克隆抗体的技术，比传统单克隆抗体制备方法更有发展潜力。此前发表的研究显示，以埃博拉病毒为目标且高度优化的基于DNA的单克隆抗体，单次给药在小鼠血液中产生了高水平的抗体表现。下图表示dMAb技术在埃博拉病毒感染疾病的临床研究中的操作流程。回答下列问题：

(1)根据抵御埃博拉病毒的抗体的结构获得目的基因，常用PCR技术快速扩增目的基因。在扩增过程中，需要的原料是__________，将温度控制在90℃以上的目的是__________。
(2)构建重组质粒时，一般用相同的限制酶切割目的基因和Ti质粒的脱氧核苷酸片段，目的是__________。重组质粒中含有启动子，其作用是___________。
(3)单克隆抗体与埃博拉病毒结合利用的原理是___________。利用动物细胞融合技术生产单克隆抗体时，经选择性培养基筛选出的杂交瘤细胞还需要进行抗体检测，其目的是___________。与传统利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的技术相比，dMAb技术的优势是__________（写出2点）。