1 . 随着全球气候变暖趋势加剧，高温胁迫成为制约世界粮食生产安全的最主要因素之一。据报道，平均气温每升高1℃，会造成水稻减产3%左右。我国科学家研究发现，非洲栽培稻（CG14）的TT3基因具有较强的高温抗性。科研人员提取了非洲栽培稻TT3基因的成熟mRNA，通过基因重组技术，以Ti质粒为表达载体，导入水稻叶片细胞中，使水稻获得对高温的较强抗性。回答下列问题：

   

(1)与非洲栽培稻（CG14）的TT3基因序列相比，图中的TT3基因的cDNA序列所含碱基对数目__________（填“较多”“较少”或“相等”）。采用PCR技术扩增TT3基因的cDNA序列时，需要设计引物，引物的作用是__________。为了使TT3基因的cDNA序列能够被限制酶切割，并与载体准确连接，所选用的限制酶是__________。
(2)PCR完成后常采用__________来鉴定产物。对于PCR扩增后符合要求的产物，通常还需要进行基因测序，原因是__________。
(3)利用农杆菌转化法将构建的Ti重组质粒转入水稻愈伤组织细胞后进行植物组织培养，培养基中需加入__________进行筛选，最终获得四个水稻株系b1、b2、，b3、b4，对这四个水稻株系的TT3蛋白表达量进行测定，结果如图2所示。图2结果__________（填“能”或“不能”）说明b4株系未导人TT3基因，原因是__________。

   

(4)鉴定转基因水稻是否表现出了更强的抗性，需要进行个体水平的检测，检测的思路是__________。

2 . 下列关于物质分离实验依据的原理，正确的是（       ）

选项	实验	原理
A	纸层析法分离光合色素	色素在层析液中溶解度越高，层析时与滤纸的结合能力越低
B	单克隆抗体制备	应用免疫学原理，给实验小鼠注射抗原以获得特定的抗体
C	琼脂糖凝胶电泳分离DNA	不同的DNA分子在电泳缓冲液中溶解度不同
D	DNA的粗提取	DNA分子在2mol/LNaCl溶液中沉淀析出

A．A

B．B

C．C

D．D

3 . 干扰素是抗病毒的特效药，科学家利用基因工程和细胞工程技术制得了重组干扰素。请回答下列问题：
(1)获取干扰素基因的途径之一是：提取总RNA，利用_________酶合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增干扰素基因，已知干扰素基因一条链两端的序列为5'—AAGGGCGG—干扰素基因—GG—GAAACT—3'，根据其两端序列，则需要选择的一对引物序列是_________（填字母）。若某一双链cDNA在PCR仪中进行了4次循环，需要消耗_________个引物。
A．引物I是5'—AAGGGCGG—3'，引物Ⅱ是5'—GGGAAACT—3'
B．引物I是5'—AAGGGCGG—3'，引物Ⅱ是5'—AGTTTCCC—3'
C．引物I是5'—CCGCCCTT—3'，引物Ⅱ是5'—GGGAAACT—3'
D．引物I是5'—CCGCCCTT—3'，引物Ⅱ是5'—AGTTTCCC—3'
(2)图甲为获取的含有干扰素基因的DNA片段，中间一段为干扰素基因。Sau3AI、EcoRI、BamHI为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图乙是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图丙是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。

为保证目的基因和质粒正确连接，切割含有目的基因的DNA片段和质粒经常都会用到两种限制酶，在该实验中，切割含有目的基因DNA片段的两种限制酶和切割质粒的两种限制酶是否完全相同?_________（填“是”或“否”），原因是_________。
(3)若要在水稻胚乳细胞中提取重组干扰素，需要用到植物组织培养技术，该技术的原理是_________；若要利用乳腺生物反应器来生产重组干扰素，则应将构建的基因表达载体导入_________中。

4 . 稻米胚乳直链淀粉含量高会导致食用品质差。研究发现，水稻蜡质基因（Wx）编码直链淀粉合成酶。Wx基因模板链第226位碱基为G，此时胚乳中直链淀粉含量最高，记为品种G；若该位点突变成T，胚乳中直链淀粉的合成水平会降低，记为品种T。请回答下列问题：
(1)Wx基因控制稻米胚乳直链淀粉含量这一性状的途径是：通过控制______________，进而控制该性状。
(2)为检测某水稻Wx基因的第226位碱基是G还是T，研究人员以待测水稻叶片总DNA为材料进行PCR扩增，除加入模板和四种脱氧核苷酸外，反应体系中还需加入__________，并且需在含________（填离子）的缓冲液中进行。如图为品种G和品种T中Wx基因的部分碱基序列，已知引物1为5＇-GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3＇，则引物2为_________。AccⅠ酶的识别位点为   两引物之间无另外的AccⅠ酶的识别位点。产物经AccⅠ酶切后电泳，若电泳结果观察到长度为_______bp的DNA条带，则表明该水稻品种为T。

   

(3)若要利用基因工程的方法改造水稻，通过抑制Wx基因表达来培育低直链淀粉含量水稻品种，请你提出改造思路：_________。将目的基因导入水稻细胞，可采用__________法（答出2种）。

6 . 巢式PCR指利用两套PCR引物对模板进行两轮PCR扩增，从第二轮的扩增产物中获得目的基因片段，具体过程如图。巢式PCR首先要根据DNA模板序列设计两对引物。利用第一对外引物对靶DNA进行15到30个循环的标准扩增。第一轮扩增结束后，将一小部分起始扩增产物稀释后加入到第二轮扩增体系中作为模板，利用第二对引物进行标准扩增并得到产物。下列相关叙述错误的是（       ）

A．PCR反应体系的缓冲液中需要加入Mg2+用于激活DNA聚合酶

B．与传统PCR相比，巢式PCR能减少非特异性产物的形成

C．第一轮的扩增产物是第二轮扩增的模板，第二轮扩增产物更短

D．如果第一次PCR引物过量，剩余引物在第二次PCR后不会有产物

7 . 用A和B两种限制酶同时和分别处理某DNA分子，酶切位点及酶切产物的电泳结果如图所示。下列叙述错误的是（       ）

   

A．图中X代表的碱基对数为5500

B．图中Y是限制酶A的酶切位点

C．用A和B两种限制酶同时处理图中同- DNA片段得到8个末端

D．若要从上述DNA分子中通过扩增得到X片段，至少需要3次PCR

8 . HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列叙述正确的是（　　）

A．①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4种游离的核糖核苷酸等组分

B．目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入EcoRI和HindⅢ的识别序列，拼接前载体用MfeI和HindⅢ切割

C．利用PCR扩增目的基因时，反应缓冲溶液中一般要加入Mg2+的目的是维持渗透压稳定

D．利用鸡输卵管生物反应器生产HA蛋白可以大规模用于禽流感疫苗制备

10 . “玉米的祖先”——大刍草经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米，成为世界上最高产的农作物之一。中国科学院的科学家经过不懈努力，从野生玉米中成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP₉，克隆出来并将此基因导入玉米细胞的染色体上，使玉米蛋白含量大幅提高并在三亚南繁基地进行了大规模田间试验。请回答下列问题：
(1)扩增优良基因THP₉常使用______技术，主要依据的原理是______。扩增时，需在DNA聚合酶催化下，在引物______端进行DNA链的延伸。
(2)利用野生玉米的优良基因THP₉并将其导入玉米自交系培育转基因玉米的主要四个步骤是目的基因的筛选与获取、______、______、目的基因的检测与鉴定。在该过程中，需要将优良基因THP₉插入启动子与终止子之间，其目的是______。
(3)将从新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，筛选转化细胞并生成转基因植株。欲从个体水平检测转基因玉米是否培育成功，实验方法是____________。
(4)若转基因玉米体内含两个THP₉基因，且其自交后代全部表现为高蛋白子代，则说明______。