1 . 目的基因和载体如果用同一种限制酶处理，连接时会出现正反接的情况，为鉴定筛选出的表达载体中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR后，结合电泳技术鉴定，图示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，其中目的基因为长度300bp的片段。下列有关说法错误的是（       ）

   

A．PCR复性温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链

B．电泳条带迁移的位置和速度与DNA分子的大小、带电量和构象有关

C．选取引物甲、丙，扩增出450bp长度片段时，可以说明目的基因正接

D．选取引物甲、乙，扩增出400bp长度片段时，可以说明目的基因反接

2 . 荧光蛋白的发现可以说是革新了生物学研究，下列叙述错误的是（       ）

A．荧光蛋白中一定含有C、H、O、N四种元素

B．荧光蛋白可作为标记蛋白，用于研究癌细胞的转移

C．利用PCR技术准确扩增出荧光蛋白基因的关键是引物的正确设计

D．为了确保荧光蛋白基因在受体细胞中表达，应在荧光蛋白基因的下游添加启动子

3 . 巢式PCR是指先后用外内引物扩增目的基因的方法。其原理为：先以比目的基因大的DNA片段为模板，用外引物（F1，R1）进行扩增，获得大量含目的基因的中间产物，再以扩增后的中间产物为模板，用内引物（F2，R2）扩增目的基因，如图所示。下列说法错误的是（       ）   

A．两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段

B．第二轮PCR反应能否进行，是对第一轮PCR反应正确性的鉴定

C．由于和两套引物都互补的靶序列较少，该技术可大大提高扩增的特异性

D．如果两套引物一起加入反应体系中，外引物的复性温度应显著低于内引物

4 . 为初步探究某动物phb2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因(简称phb2基因)编码序列，大小约为0.9 kb，并利用大肠杆菌表达该蛋白。图1为所用质粒示意图，已知phb2基因序列不含图1中限制酶的识别序列。从转化后的大肠杆菌中提取质粒，再用选中的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，下列叙述错误的是（　　）

A．为使phb2基因与载体正确连接，应在扩增的phb2基因两端分别引入KpnⅠ和EcoRⅠ两种不同限制酶的识别序列

B．需设计特异性的引物通过PCR技术扩增phb2基因

C．需用CaCl2处理大肠杆菌，以提高转化率

D．图2中的3号质粒有可能是含目的基因的重组质粒

5 . 新冠病毒（SARS-CoV-2）和肺炎球菌均可引发肺炎，两者结构不同。新冠病毒是具外套膜的单股正链RNA病毒，其遗传物质是目前所有RNA病毒中最大的，该病毒在宿主细胞内的增殖过程如图所示，a～e表示相应的生理过程。
   
(1)新冠病毒和肺炎球菌结构上最本质的区别是___________。
(2)下列有关叙述正确的是（       ）

A．新冠病毒与肺炎链球菌均需利用人体细胞内的核糖体进行蛋白质合成

B．人体感染新冠病毒或肺炎球菌都可以通过抑制逆转录来治疗该肺炎

C．新冠病毒与肺炎球菌的遗传均不遵循孟德尔遗传定律

D．人体细胞与新冠病毒含有的RNA聚合酶种类有所不同

(3)据上图分析，下列有关叙述错误的是（       ）

A．a和b过程中碱基互补配对的方式不同

B．a和c过程形成的RNA碱基排列顺序相同

C．病毒RNA中含有的基因种类不止一种

D．图中mRNA与RNA（+）相同

(4)艾弗里完成肺炎球菌体外转化实验后，持反对观点者认为：“DNA 可能只是在细胞表面起化学作用形成荚膜，而不是起遗传作用”。已知 S 型肺炎球菌中存在能抗青霉素的突变型（这种青霉素的抗性不是荚膜产生的）。下列实验设计思路能反驳上述观点的是（       ）

A．R 型菌+抗青霉素的 S 型菌 DNA→预期出现抗青霉素的 S 型菌

B．R 型菌+抗青霉素的 S 型菌 DNA→预期出现 S 型菌

C．R 型菌+S 型菌 DNA→预期出现 S 型菌

D．R 型菌+S 型菌 DNA→预期出现抗青霉素的 R 型菌

疫情防控期间，需要做新冠病毒核酸检测。 TaqMan 探针荧光原理如图1及病毒核酸检测技术流程如图 2。其中，Taq 聚合酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，适用于 DNA 片段的 PCR 扩增、DNA 标记等。
   
(5)图1中的 TaqMan 探针应为（       ）

A．容易自身碱基互补配对的 DNA 单链片段

B．不易自身碱基互补配对的 DNA 单链片段

C．容易自身碱基互补配对的 RNA 单链片段

D．不易自身碱基互补配对的 RNA 单链片段

(6)在图2的核酸检测技术流程中，涉及到的中心法则过程有（       ）

A．DNA 复制

B．RNA 复制

C．转录

D．逆转录

(7)核酸检测结果会出现“假阴性”，即实际已经感染新冠病毒，但却没检测出来，你认为可能的原因有哪些？____________针对原因，提出合理建议以提高检测的准确率：____________

7 . 为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），大小为0．9kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表，phb2基因序列不含图1中限制酶的识别序列。转化后的大肠杆菌提取质粒，再用选中的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2．下列叙述错误的是（       ）

相关限制酶的识别序列及切割位点（注：箭头表示切割位点）

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindⅢ	A↓AGCTT TTCGA↑A	EcoRI	G↓AATTC CTTAA↑G
PvitⅡ	CAG↓CTG GTC↑GAC	PstI	CTGC↓AG GA↑CGTC
KpnI	G↓GTACC CCATG↑G	BamHI	G↓GATCC CCTAG↑G

A．需设计特异性的引物通过PCR技术扩增phb2基因

B．为使phb2基因与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入KpnⅠ和EcoRⅠ两种不同限制酶的识别序列

C．需用CaCl2处理大肠杆菌制备感受态细胞，以提高转化率

D．图2中3号的质粒很可能是含目的基因的重组质粒

8 . 目前研究发现，人感染禽流感的传染源为携带禽流感病毒的禽类。科学工作者经研究发现了数种快速检验禽流感病原体的方法，以正确诊断禽流感。下列与禽流感病原体研究、诊断有关的说法中错误的是（       ）

A．镜检法：在光学显微镜下直接观察病人的痰液或血液，以发现病原体

B．PCR技术：体外基因复制技术，可在几十分钟内把病原体的基因扩增到数百万倍

C．抗原—抗体法：用特殊制备的病原体蛋白质与病人血清中的相关抗体特异性结合，发现病原体

D．DNA探针技术：用放射性同位素、荧光因子等标记的DNA分子作探针，利用DNA分子杂交原理来检测

9 . 2019 年 12 月以来，新型冠状病毒导致的肺炎在世界范围爆发。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。经科学工作者研究，发现了数种快速检验新冠肺病原体的方法，以正确诊断。下列与新型冠状病毒的研究、诊断有关的说法中错误的是（       ）

A．镜检法：在光学显微镜下直接观察病人的痰液或血液，可发现病原体

B．PCR技术：体外基因复制技术，可在几十分钟内把病原体的基因扩增到数百万倍

C．抗原－抗体法：用病原体蛋白质与病人血清中相应抗体特异性结合，可确认是否感染过

D．DNA 探针技术：用放射性同位素、荧光因子等标记的 DNA 分子做探针可检测病原体

10 . 基因定点整合可替换特定基因，该技术可用于单基因遗传病的治疗。苯丙酮尿症 是由 PKU 基因突变引起的，将正常 PKU 基因定点整合到 PKU 基因突变的小鼠胚胎干细胞的 染色体 DNA 上，替换突变基因，可用来研究该病的治疗过程。定点整合的过程是：从染色体 DNA 的突变 PKU 基因两侧各选择一段 DNA 序列 HB1 和 HB2，根据其碱基序列分别合成 HB1 和 HB2，再将两者分别与基因 K1、K2 连接，中间插入正常 PKU 基因和标记基因 neor，构建 出如图所示的重组载体。重组载体和染色体 DNA 中的 HB1 和 HB2 序列发生交换，导致两者之 间区域发生互换，如图所示。回答下列问题：

(1)构建重组载体，常用的工具酶有__________。构建重组载体时，需要大量 PKU 基因，常 用__________技术合成 PKU 基因。
(2)题干中所用胚胎干细胞可以来自____________。培养过程中大部分细胞会贴附在培养瓶 壁生长，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂，这种现象称为 ____________。
(3)实验过程中，为了提高胚胎的利用率，可采用胚胎分割技术，若选用囊胚期的胚胎，操 作过程中要特别注意将内细胞团均等分割，原因是____________。
(4)用图中重组载体转化胚胎干细胞时，会出现 PKU 基因错误整合。错误整合时，载体的两 个 K 基因中至少会有一个与 neor 一起整合到染色体 DNA 上。已知含有 neor 的细胞具有 G418 的抗性。Kl、K2 的产物都能把 DHPG 转化成有毒物质而使细胞死亡。转化后的胚胎干细胞依 次在含有 G418 及同时含有 G418 和 DHPG 的培养液中进行培养，在双重选择下存活下来的是 ________（填“正确整合”或“错误整合”）的胚胎干细胞，理由是_________。