1 . 为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入D基因中，致使该基因失活，失活后基因记为d。为验证F植株基因型（DD、Dd、dd），研究者根据D基因T-DNA的序列设计了3种引物。随机选取F植株若干，提取各植株的总DNA分别用引物“I+II”组合（A组）及“I+I”组合（B组）进行PCR扩增，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR扩增）。下列叙述正确的是（       ）

A．引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸

B．PCR扩增需要2种引物，确保特异地复制处于两个引物之间的DNA序列

C．若A组进行PCR可完成扩增，B组不能，则相应植株的基因型是DD

D．若A、B组进行PCR均可完成扩增，则相应植株的基因型是Dd

3 . 纤维素是自然界中分布最广、含量最丰富的一种多糖，水解纤维素的酶系包括内切酶（EG）、外切酶（CBH）和B-葡萄糖苷酶（BGL）。已知酿酒酵母菌不能吸收纤维素，科研人员利用基因工程技术依次将EG基因、CBH基因和BGL基因分多步导入酿酒酵母菌，获取可以直接利用纤维素发酵的酿酒酵母工程菌。
(1)科研人员常用PCR技术获取和扩增EG基因、CBH基因和BGL基因，该过程不需要添加解旋酶，但DNA也能解旋的原因是____ 。若PCR产物中出现了部分非目标序列，可能的原因有____ （答出两点即可）。
(2)构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，科研人员采用以下两种方法构建含有EG基因的表达载体。
①双酶切法：如图甲标注了载体、EG基因的限制酶切点、EG基因插入部位及两端的部分序列，已知酿酒酵母菌不能合成尿嘧啶，图中的标记基因为尿嘧啶合成基因。

   

结合图中信息分析，在扩增EG基因时应在引物的____ （填“5′”或“3′”）端添加____ 限制酶的识别序列，设计的引物序列为____ 。（从5'端书写，写出前12个碱基序列即可）
②同源重组法：该操作可通过PCR技术在任一位点实现质粒的线性化，只要将目的基因两端带有与线性化质粒两端同源的DNA序列，在相关酶的作用下即可实现质粒上的同源重组（如图乙所示）。与双酶切法相比，同源重组法构建基因表达载体的突出优点是____

   

(3)导入上述重组质粒的酿酒酵母菌应在____ 的培养基上筛选培养。将筛选得到的菌株接种到液体培养基中培养一段时间，通过检测____ ，以确定其发酵效果。

4 . 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是通过猪细胞膜上的受体CD163 进行感染的。为实时监控受体CD163的表达和转运过程，科研人员将红色荧光蛋白 RFP 基因与CD163 基因拼接在一起，如图1所示，使其表达为一条多肽。 图2 表示用PCR 扩增后的CD163 基因的部分碱基序列。回答下列问题：

   

(1)为了完整的扩增CD163 基因序列，科研人员设计了一对碱基序列相等的引物，其中一个引物序列为 另一个引物序列为________。在PCR 扩增过程中引物与两条单链DNA结合时的温度一般要控制在________℃左右。
(2)为了扩增后的 CD163 基因能够与 RFP 基因拼接在一起，科研人员从图3的三种限制酶中选择了两种，然后对CD163 基因进行切割，切割结果如图3 所示。科研人员选择的限制酶是________，判断的依据是_______。

   

(3)根据图1分析，为了使拼接后的重组基因能够表达成一条多肽，需要除去 CD163 基因中编码________（填“起始密码子”或“终止密码子”）的序列。
(4)将图1所示表达载体导入猪的细胞，该表达载体转录时以________（填“a”或“b”）链为模板；翻译时，RFP蛋白与CD163蛋白合成的顺序是________。

6 . 为获得Gata3-GFP融合基因纯合小鼠，某科研小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白（GFP）基因整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合雌、雄小鼠各1只，交配后获得了4只新生小鼠。为了鉴定4只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物1、引物2和引物3用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。下列分析正确的是（　　）

      

A．据图分析，PCR扩增时选择的引物组合是引物1和引物3

B．分析图乙可知，4号小鼠为Gata3-GFP融合基因纯合小鼠

C．图甲中启动子区是RNA聚合酶识别和结合的位点，能够驱动GFP基因的转录

D．若用引物1和引物3扩增甲图中插入后的片段，循环4次后，产物中等长片段所占的比例为3/8

7 . 利用Sanger法对未知序列DNA进行测序的原理如下：将含有适量待测单链DNA模板、引物、四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）和DNA聚合酶等混合物分别加到4支试管中，每支试管中再分别加入1种足量的放射性同位素标记双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），在子链合成过程中，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。最终分离4支试管中的所有子链片段，分泳道进行电泳，用放射自显影法显示后结果如下图。下列说法正确的是（       ）

A．图中X含有11个碱基，在所有单链中相对分子质量最大，电泳速度最慢

B．图中所测单链DNA片段中胸腺嘧啶数与鸟嘌呤数相等

C．在含ddTTP的试管中含有2种子链DNA片段

D．图中所测单链DNA模板的序列为5'-CTTGACGACGA-3'

8 . 为获得转G3-GFP融合基因纯合小鼠，科研人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因和G3基因拼接到一起（如图1），然后导入小鼠受精卵，再通过PCR和琼脂糖凝胶电泳检测了新生小鼠的基因型（如图2）。下列说法错误的是（       ）

A．基因表达时图1中基因的启动子区和编码区均能转录

B．拼接GFP基因和G3基因时需要限制酶和DNA连接酶

C．由图可知，PCR检测时选择的引物是引物1和引物3

D．图2中的小鼠乙是转入G3-GFP融合基因的纯合小鼠

10 . 基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。研究发现，叶用莴苣（俗称生菜）细胞中的FANCM蛋白能够阻止减数分裂过程中互换的发生，科学家借助CRISPR/Cas9基因编辑技术（如图1所示，CRISPR/Cas9基因编辑系统包含Cas9编码基因和gRNA编码序列gRNAs），研发出人工FANCM基因驱动系统，从而在叶用莴苣中实现了外部引入的基因多代遗传。图2表示利用基因驱动技术获得FANCM突变基因的过程，利用同源定向修复功能，可以使另一条同源染色体上也插入基因驱动元件，从而获得FANCM基因纯合突变体。

(1)图1中gRNA的作用是________，为确定图2中基因驱动元件是否完整插入FANCM基因，最好选择的两组引物是________（从图2中P1～P4四种引物中选择）进行PCR。
(2)PCR反应体系的成分中，能够决定复制特定DNA片段的是________（填“模板”、“引物”或“taq酶”）；为保证目的基因正确插入质粒中，需要在引物的________（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶的识别序列。在PCR过程中需要加入引物的原因是________。
(3)用FANCM基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交，F₁中有多达7%的植株为纯合突变体。请解释纯合突变体产生的原因是________。利用基因驱动技术获得FANCM基因突变纯合体，在叶用莴苣遗传育种中的应用价值是________。