4 . 大肠杆菌改造
I.甲醇（分子式CH₃OH）是一种重要的有机化工原料，价格低廉，来源广泛，但不能被大肠杆菌利用。为获得能够高效利用甲醇的大肠杆菌，研究人员根据图1所示甲基芽孢杆菌中的甲醇代谢途径，对大肠杆菌进行改造。其中，F6P、FBP是各种细胞进行糖酵解过程的重要中间产物，而甲醛和H6P是甲醇代谢途径中特有的。

图1

(1)甲基芽孢杆菌甲醇代谢途径中的各种酶都具有相同的____。（多选）
A化学本质       B 活性中心       C合成场所       D 空间结构
(2)酶4发挥作用的场所是____。（单选）
A质膜       B细胞质基质       C 线粒体       D核糖体
II.对大肠杆菌的改造过程如图2，其中I~IV代表操作步骤，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因。在步骤IV，研究人员向大肠杆菌中引入突变的dnaQ基因（正常dnaQ基因是DNA聚合酶保真性的关键），并利用以甲醇为唯一碳源的液体培养基进行连续培养，即可实现菌株的定向进化，从而获得高效利用甲醇的大肠杆菌。

图2

(3)图2获取的目的基因应包括甲基芽孢杆菌中的____。（编号选填）
①酶1基因②酶2基因③酶3基因④酶4基因
(4)图2步骤II为____。
(5)在图2步骤I和步骤II中，应选用的工具酶分别是____。（单选）

	步骤I	步骤II
A	DNA解旋酶、限制酶	DNA连接酶
B	DNA连接酶、限制酶	耐热DNA聚合酶
C	耐热DNA聚合酶、限制酶	DNA连接酶
D	耐热DNA聚合酶、DNA连接酶	限制酶

(6)引入突变的dnaQ基因影响的是下图所示的过程____。（编号选填）

(7)以下对步骤IV中大肠杆菌定向进化过程的分析，正确的是____。（多选）
A甲醇代谢相关基因发生定向突变
B 甲醇代谢相关基因发生随机突变
C使大肠杆菌更容易在通用培养基中生长
D使大肠杆菌更容易在以甲醇为唯一碳源的培养基中生长
(8)为尽快获得甲醇利用效率更高的菌株，在配制步骤IV所需培养基时，配方中除甲醇外至少还应该有____。（编号选填）
①葡萄糖②NH₄Cl③Amp④琼脂⑤水
(9)下列实验方法①~⑧中，可用于分离纯化能高效利用甲醇菌株的是____，可用于测定甲醇代谢有关酶活性的是____，可用于追踪大肠杆菌细胞中甲醇代谢情况的是____。（编号选填）
①分光光度法②差速离心法③显微注射法④显微镜计数法
⑤平板划线法⑥凝胶电泳法⑦稀释涂布法⑧同位素标记法
(10)图2改造大肠杆菌时涉及的生物工程有____。（多选）
A发酵工程       B 细胞工程       C基因工程       D 蛋白质工程

6 . 多年生野生大豆主要生活在澳大利亚等热带地区，具有遗传多样性丰富、抗性强、耐旱以及耐热等优势，也具有基因组庞大、高度杂合等特性，其丰富的遗传变异为重要农艺性状的挖掘和育种提供了宝贵资源。下列关于利用多年生野生大豆育种的叙述错误的是（       ）

A．利用转基因技术可将多年生野生大豆的优良基因转移到其他植物体内

B．利用同种多年生野生大豆随机受粉可获得具有多种优良性状的新品种

C．秋水仙素处理多年生野生大豆幼苗可能获得染色体数目加倍的多倍体

D．通过射线照射多年生野生大豆幼苗一定能获得具有更优良性状的植株

7 . 疫苗是人类预防疾病强有力的手段，疫苗产业也是医疗卫生事业和生物技术产业的重点发展领域之一，目前生产疫苗的两种方法主要有：利用转基因工程菌和借助动物细胞的大规模培养。例如，生产乙肝疫苗时，可以将S基因导入大肠杆菌构建工程菌生产重组乙肝疫苗，或者大规模培养能够表达S蛋白的中国仓鼠卵巢细胞获得乙肝疫苗。下列有关两种方法叙述错误的是（       ）

A．两种方法都需用转基因技术构建工程菌或工程细胞

B．将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞

C．体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以创造无菌环境

D．哺乳动物细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白