2 . 人血清白蛋白（HSA）主要由肝细胞产生，在临床上的需求量大，由于其来源有限和有生物污染的风险，重组人血清白蛋白（rHSA），成为其重要的替代品。科研人员将HSA基因转入酵母菌细胞，获得了重组人血清白蛋白。如图为酵母菌基因改造以及工业化发酵生产rHSA的过程示意图，其中I、II、III、IV是四种不同的限制酶，具各自识别的酶切位点如表所示。

限制酶	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ
识别序列及切割位点

(1)若要将HSA基因正确插入质粒中，最好选择限制酶____进行共同切割，重组基因表达载体中的启动子的作用是____。
(2)为筛选出含重组质粒的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到甲、乙、丙三类菌落，三类菌落形态相同，生长情况如下图所示，则成功导入目的基因的重组质粒的菌落类型是____类，未导入质粒的菌落类型是____类；（填字母类型）

(3)科研人员提取人肝细胞中的mRNA，并通过反转录法构建了HSA基因，该基因其中一条链的序列为（5'-CCGATCGTTGGAGA…GAATTTCGACCTAG-3'），若通过PCR进行扩增，已知其中一种引物I是5'-CTAGGTCGAAATTC-3'，则另一种引物的序列为____（答出6个碱基序列即可）。
(4)PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测，常采用电泳的方法。电泳一段时间后进行检测，若电泳带有____条，且与DNAMarker对比，产物大小正确，表明PCR扩增成功。
(5)有人提议将乳腺反应器改成膀胱反应器，请分析利用膀胱反应器比乳腺反应器产量高的原因____（答出两点即可）。

5 . DNA是主要的遗传物质，遗传信息蕴藏在四种脱氧核苷酸的排列顺序中。有一种对DNA进行测序的方法，称作Sanger法。回答下列问题：
(1)Sanger法的本质是在试管中进行DNA复制。操作时，可通过加热进行解旋，因此试管中需要添加的物质有原料、模板和______酶，此过程中需严格遵循______原则。
(2)已知当脱氧核苷酸中的脱氧核糖脱去3'C（碳原子）上的氧原子，就变为双脱氧核苷酸（四种，简写为ddA，ddT，ddG，ddC）。在DNA复制过程中，由于双脱氧核苷酸无法与下一个核苷酸发生脱水缩合反应，DNA子链的延伸停止。如图所示，在每支试管中加入正常的四种脱氧核苷酸后，再向每支试管中加入一种双脱氧核苷酸，配制好溶液后，在试管中进行DNA复制。在1号管中，有一条新合成的子链在复制到第14个核苷酸处停止，停止的原因是在该位点掺入的是_____，而不是正常的脱氧核苷酸，因此可知子链14位的碱基为A.复制时，每个位点掺入正常和双脱氧核苷酸是随机的。1号试管中有多种长度不同的DNA子链，原因是________。按此思路，可根据DNA子链不同的长度读出每一个位点上的碱基种类，进而推测整条DNA的核苷酸序列。

(3)DNA复制是通过____方式进行的，经Sanger法测序，某生物一条DNA单链上部分核苷酸序列为5'—ATCAACAG—3'，则以该链为模板合成的子链的相应碱基序列是________。
(4)基因测序是近代科学的重大进步，在健康、医疗领域有广泛应用，举出一例具体的应用_____。

6 . 某科学家成功地把人的抗病毒干扰素基因“嫁接”到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，试分析回答下列问题。
(1)烟草抗病毒能力的获得属于________。

A．基因工程

B．细胞工程

C．微生物工程

D．酶工程

(2)人的基因之所以能接到植物体上，原因是_________________。
(3)烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生了________________。
(4)该工程应用于实践，将给农业、医药等诸多领域带来革命，目前已取得了许多成就。请你列举你所知道的或你所设想应用该工程的三个具体实例：________________。
(5)有人认为，转基因产品也是一把双刃剑，如水能载舟亦能覆舟，甚至可能带来灾难性的后果，请你列举出一个可能出现的灾难性后果的实例________________。

7 . 利用基因工程技术，可以让哺乳动物批量生产药物。如图为利用乳腺生物反应器生产血清白蛋白的技术流程。回答下列问题：

   

(1)①过程为构建基因表达载体，其目的是___。为使血清白蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达，应将血清白蛋白基因与___的启动子重组在一起。
(2)构建好的基因表达载体常利用___技术导入动物受精卵中。为筛选雌性胚胎，在胚胎移植前应从囊胚中的___取样做DNA分析，鉴定性别。
(3)④过程指___，该过程的实质是___。
(4)利用乳腺生物反应器生产蛋白质类药物的优势有___（答出一点即可）。

8 . 《本草纲目》记载：“菠菜甘、冷、滑、无毒。主通血脉，开胸膈，下气调中，止渴润燥，根尤良。”此外，菠菜还富含类胡萝卜素、维生素C、维生素K等多种营养。下图1为菠菜叶肉细胞光合作用部分过程的示意图。其中，PSⅠ、PSⅡ是蛋白质和光合色素组成的复合物，PQ与电子传递有关，字母A~F 表示物质，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示反应场所。

(1)图1中PSⅠ、PSⅡ中光合色素的作用是___________；能为暗反应提供能量的物质有___________（填字母）；在光照条件下，叶绿体内发生的能量转换途径是光能→___________→___________。
(2)菠菜叶绿体类囊体腔内建立了高浓度的H⁺，这些H⁺来源于___________的分解和___________的传递。
(3)利用基因工程将某一抗冻基因导入菠菜后获得的转基因菠菜具有较高的抗冻能力。为了研究其机理，某同学用不同温度处理非转基因菠菜和转基因菠菜，3天后测得相关指标如图2、图3。

注：表观电子传递率是光合作用中光能转化最大效率的一种度量方式，可以反映光合作用中光反应阶段的强度
①该实验的自变量是___________。
②与非转基因菠菜相比，低温处理对转基因菠菜的表观电子传递效率的影响较___________（填“大”或“小”）。
③由图2和图3的数据变化可得出结论，低温不仅影响光合作用的光反应阶段，还影响别的方面。请写出依据：___________。
④综上所述，请写出转基因菠菜抗寒能力高的原因：___________。

9 . Ⅰ、赖氨酸是人体细胞不能合成的必需氨基酸。科学家把某种必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因（R）导入玉米中，使玉米中赖氨酸的含量提高30%。回答下列问题。

   

(1)随着测序技术的发展，通过检索___查询R基因序列，通过化学合成法得到R基因。利用PCR技术扩增R基因时，需要在一定的缓冲液中才能进行，其中需要加入___酶。为了特异性扩增R基因序列，需根据___设计特异性引物。
(2)在构建基因表达载体时，其中载体上启动子的作用___，若为了避免R基因和质粒的自连或反向连接，提高重组效率，应该选择的限制酶是___。
(3)随着转化方法的突破，农杆菌侵染玉米这种单子叶植物也取得了成功。科研人员从新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，当农杆菌侵染玉米细胞后，能将Ti质粒上的___转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。
(4)检测R基因是否表达的方法是___。
(5)在基因工程中若要培养转基因小鼠，将基因表达载体导入受体细胞常用的方法是___。
Ⅱ、乳腺生物反应器是将外源基因定位表达于哺乳动物的乳腺中，通过转基因动物分泌的乳汁来生产重组蛋白，例如，生产可用于治疗血液病、创伤性出血等疾病的重组人凝血因子VⅡ（rhFVⅡ）。请回答下列问题：
(6)为获得人凝血因子，首先要从细胞中获取总RNA，通过___获得cDNA，再进行PCR获得人凝血因子基因。该方法获得的基因不具有___（至少答出3点）。
(7)人凝血因子cDNA中不含限制酶识别序列，无法直接构建基因表达载体，因此，在PCR时需要在引物上加入限制酶的识别序列，应加在引物的___（填“3”或“5”）端才能不影响PCR的顺利进行。
(8)膀胱生物反应器与乳腺生物反应器的优点相同：收集产物蛋白比较容易，不会对动物造成损伤。此外，膀胱生物反应器还具有的显著优势在于不受转基因动物的___（答出1点即可）限制，而且从尿液中提取蛋白质比从乳汁中提取更简便、高效。

10 . 长期以来优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程技术和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机。

(1)在试管牛E和克隆牛G的培育过程中均用到的现代生物工程技术有______和______。
(2)通过试管动物技术培养发育为早期胚胎后，再经_________产生多个基因型相同的后代．对囊胚进行分割时，要特别注意将___________均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。
(3)科学家将人体的ɑ-抗胰蛋白酶基因转入上图的重构卵中，发现克隆牛G的乳汁中含人的ɑ-抗胰蛋白酶，其原因是________________________。
(4)我国禁止生殖性克隆实验，原因是__________________________。（至少写出两点）