2 . 我国科学家经过多年的反复试验，可以在10s之内对卵母细胞进行去核操作，在15s之内将体细胞注入去核的卵母细胞里。有评论者认为：该研究的研究者利用“聪明的化学方法和操作技巧”，攻克了多年来导致体细胞克隆猴失败的障碍。培育克隆猴的流程如下图所示，结合图回答问题：

   

(1)研究人员在将胎猴的体细胞注入去核的卵母细胞前，用灭活的仙台病毒进行了短暂处理。在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用____。
(2)哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎细胞核移植获得克隆动物的难度小于体细胞核移植，其原因是____。动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是____。一般利用____作为受体细胞，而不用精子。
(3)假如用胚胎分割移植的方式来克隆猴，胚胎分割时应注意将____均等分割。进行胚胎移植的优势是____。

3 . 北方白犀牛曾经广泛分布于非洲中部等地，但由于猖獗的盗猎和自然栖息地的丧失。它们的数量不断减少。2018年3月，世界上最后一头雄性北方白犀牛去世，该物种仅剩下两头雌性；在此之前，研究人员设法保存了北方白犀牛的精子。结合相关知识回答下列问题：
(1)为了快速繁殖北方白犀牛，可采用_________技术手段。具体的步骤是：首先对这两头雌性白犀牛注射促性腺激素进行_________处理，以获得更多的卵母细胞。第二步：获得的卵母细胞培养到一定时期后与经过_________的白犀牛的精子在体外的受精液中完成受精，形成受精卵。
(2)将受精卵培养在营养全面、温度适宜、pH和渗透压正常的培养液中，培养过程中需要_________的环境和气体环境；把受精卵一般培养到_________胚，然后移植到同种的_________相同的雌性动物体内生产后代，这样繁殖的牛就是试管牛。
(3)若北方白犀牛的精子没有保存，为了繁衍该白犀牛可采用_________技术手段，具体的操作流程是：从雌性白犀牛体内取出体细胞在体外进行培养，再取出卵母细胞在体外培养到MII期通过显微操作去核，将供体细胞注入去核的卵母细胞，通过_________法使两细胞融合，让细胞核进入卵母细胞，形成重构胚，再将该胚通过胚胎移植技术移入受体母牛体内，这样培养出的牛叫克隆牛。
(4)试管牛和克隆牛的最本质的区别是_________。

4 . 下图1、2分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

(1)图1和图2所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是____________。
(2)图1中①步骤引发了小鼠的__________________免疫反应，从而可获得产生特异性抗体的B淋巴细胞，但B细胞分裂能力差；获取小鼠新鲜的骨髓瘤组织，在37℃下用__________________消化30-40分钟形成离散细胞，在_____________培养箱中培养，在培养基中加入一定量的抗生素，其目的是______________________。
(3)图1中②过程常在_______________诱导下完成，两两融合形成的细胞共有_____种，所以需要利用_____培养基筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的________________细胞。单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是___________________。
(4)图2克隆羊“多莉”是_______（填序号）羊的克隆，从理论上证明了_____________；若不考虑环境因素影响，亲代和其克隆子代性状_________（填“是”或“不是”）完全相同的，原因是___________。

5 . 2017年11月~12月，中科院神经科学研究所研究团队利用体细胞克隆技术克隆出了猕猴“中中“和“华华”，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代。如图是体细胞克隆猴的技术流程，请据图同答下列问题：

(1)图中猕猴胚胎成纤维细胞刚放入培养瓶中会沉降到瓶底部后细胞贴壁，贴壁细胞生长增殖时，还会发生____现象。传代培养时，常利用酶处理，分散成单细胞，再用____法收集，制成____后转入新的培养瓶中。
(2)图中所示过程涉及的主要技术有____。（答出两点即可）
(3)体细胞核移植比胚胎细胞核移植难度较高，原因是____。而在体细胞核移植中，非人灵长动物的细胞核移植非常困难，一方面是对非人类灵长动物胚胎操作技术尚不完善，另一方面是____，导致胚胎发育率低。
(4)体细胞克隆猴的另外一个技术难点是猴的体细胞克隆胚胎发育差。科学家发现，胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关。由此推测，图2中KDM4dmRNA 翻译产生的酶的作用是____。
(5)体细胞核移植技术有广阔的应用前景，在医药卫生领域，通过建立转基因体细胞系，培育的转基因克隆动物可以作为____，生产医用蛋白：在治疗人类疾病时，转基因克隆动物的细胞、组织、器官可以用于异种移植；以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织、器官，移植给患者时可以避免发生免疫排斥。

6 . 回答下列与生物技术工程有关的问题：
(1)抗体—药物偶联物(ADC)通过细胞素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，其作用机制如图，请回答下列问题

①ADC在治疗肿的作用是___________。
②细胞毒素药物对机体正常组织会有毒性，若抗体的选择性较差或正常组织存在与抗体对应的抗原，则会造成细胞毒素药物投递到________________，造成靶向毒性。
③接头不稳会造成________，在体内暴露，从而造成脱靶毒性。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段基序列补配对的短单链核酸，用于PCR的引物长度通常为20~30个核酸，在配对时引物是与母链的________(填“3′”或“5′”)端配对，在DNA聚合用下将4种脱核添加到引物的_______(填“3′”或“5′”)端。
(3)高产奶牛的繁殖可以通过克隆，普通奶牛提供卵细胞，高产奶牛提供体细胞核若研究发现供体高产奶牛细胞中线粒体发达，故它的产奶量高，则获得的克隆小牛成年后________(填“具有”或“不具有”)这一优良性，分析的依据是______________。

7 . 2018年1月25日，我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请分析回答：

(1)2001年，美国科学家已经培育出胚胎细胞核移植猴，获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是_____，恢复其全能性较难。
(2)进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有_____。在进行细胞原代培养时会出现_____和细胞接触抑制现象。
(3)动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是_____。
(4)图中过程⑤用到胚胎移植技术，其实质是早期胚胎在_____条件下空间位置的转移。
(5)研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是_____。

8 . 动物的某种退行性神经疾病由基因t突变为基因T导致。随着生物工程技术的发展和基因编辑（CRISPR/Cas9）技术的出现，为治疗该疾病提供了如下新思路。回答下列问题：

(1)利用CRISPR/Cas9编辑基因时，Cas9蛋白依据sgRNA片段（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列），能精准识别并切割动物纤维细胞中的致病基因T，并在DNA连接酶的作用下将正常基因t连接到染色体DNA的相应位置上，获得不含致病基因T的动物成纤维细胞。可见，sgRNA片段能够精准识别致病基因T的核苷酸序列的原因是_____________，CRISPR/Cas9还具有_______________________________的作用。
(2)过程①所利用的生物技术是_______________，过程②的培养条件十分苛刻，需要无菌、无毒环境，充足的营养物质、适宜的温度和pH；培养时，对气体环境的要求是_______________。过程④的培养基中需要添加__________，以促进ES细胞的增殖分化。
(3)利用上述思路治疗该退行性神经疾病，理论上不会产生免疫排斥反应，原因在于__________________。

9 . 长期以来，优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机，请据图完成下列问题：

   

(1)和受精有关的过程有：①第一次卵裂开始；②卵细胞膜反应；③透明带反应；④穿越透明带；⑤精子入卵。其正确的顺序为___________________（填序号）。
(2)超数排卵技术的处理措施是对供体母牛注射___________________。
(3)从A到E中，适宜于牛的胚胎移植时期有__________；图中标号3为__________细胞，它将来可发育为胎膜和胚盘。
(4)动物的早期胚胎移植到同种且___________________与供体相同的动物体内，使之继续发育为新个体的技术叫做胚胎移植。用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是细胞膜具有___________功能。
(5)图1中胚胎移植的犊牛的性别为___________（雌性、雄性、不能确定），克隆羊多利的性状和_____（黑面绵羊\白面绵羊）最接近。

10 . Ⅰ：美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方法如下图。回答下列问题：

   

(1)步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射__________和_________。步骤②所用的SP2/0细胞的特点是____________。
(2)吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原—抗体杂交原理，需加入________进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14抗体，原因是___________________。
Ⅱ：科学家利用动物细胞培养和核移植技术获得克隆动物的流程如下图所示。请回答下列问题。

   

(3)从供体身上取下的器官或组织进行细胞培养时，首先要用_____________处理一段时间使细胞分散开来。细胞培养过程中需要定期更换培养液，目的是________________。
(4)采集的卵母细胞在体外培养成熟，通过显微操作除去细胞核，然后用_____________法与供体细胞构成重组胚。