1 . 如图表示畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，请分析回答下列有关问题。

(1)用方法I和方法Ⅱ培育优良种牛，从繁殖方式上比较，前者是______，后者是______。
(2)②过程常用_______激素处理B牛，可使供体母牛超数排卵。从B牛体内获得的卵母细胞需要培养到_______(时期)。
(3)A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵子结合，完成受精作用，这一生理变化现象称为_______。在实际胚胎工程操作中常以观察到_______作为受精的标志。
(4)为使移植后的胚胎具有相同的发育环境需要对供受体母牛做___________处理。
(5)移入的胚胎能在D牛子宫中存活的生理基础是___________。
(6)为培育雌性子代小牛，胚胎移植前须进行性别鉴定，需取滋养层细胞进行___________。
(7)为提高胚胎利用效率，尽快获得数量较多的子代和牛，使用的技术称为___________。

2 . 2020年5月中国科研团队发现了可有效阻断新冠病毒（SARS-CoV-2）感染的单克隆抗体，可用于抗新冠药物和疫苗的研发。该单克隆抗体如注射进人体，将抢先与新冠病毒的刺突蛋白（S蛋白）结合，使病毒无法感染人体细胞，从而被免疫系统清除。如图是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答下列问题：

   

(1)d过程是诱导两个细胞融合，诱导动物细胞融合相比于诱导植物细胞融合所特有的方法是_____。
(2)在单克隆抗体制备过程的中要进行两次筛选，第二次筛选的目的是____________。
(3)通过上述过程得到的细胞C有特点是_____。单克隆抗体的特点是___________________。
(4)核移植技术与产生单克隆抗体都用到的技术手段是_______________和______________。
(5)在体外培养细胞时，除了给予一定量的O₂以维持细胞呼吸外，还需要提供_____气体以维持___________。

3 . 如图为纯种荷斯坦小奶牛的繁殖过程，请据图回答下列问题：

(1)克隆动物培养过程与图示繁殖过程相比特有的技术手段是_____技术，这两种繁殖动物的方式相比，实质性的区别为前者是_____，后者是_____。
(2)如果培养转基因荷斯坦奶牛，可采用_____技术将药用蛋白基因导入到_____中，在检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了目的基因时，常采用的方法是_____技术，根据是否显示出杂交带进行鉴定。
(3)上述技术应用于人类所得到的婴儿通常叫_____，在生育方面有什么积极意义？_____。
(4)“试管婴儿”技术诞生后，继而出现了“设计试管婴儿”技术，二者在对人类作用上的区别是_____，在技术手段上的区别是_____，现在大多数人反对设计婴儿性别，其原因是_____。

4 . 克隆技术又称生物放大技术，为探究克隆技术能否用于人帕金森病的治疗，科研人员利用“人帕金森病模型鼠”进行了如图所示实验。请回答下列问题：

(1)在动物体细胞核移植技术中，通常选择卵母细胞作为受体细胞，原因有__________（答出两点）等。从卵巢中采集的卵母细胞需在体外培养至______期才能用于体细胞核移植，目前使用的对卵母细胞去核的方法有_________（答出两种）等。
(2)过程②中所使用的培养液除含有必需的营养物质外，还需要加入______等一些天然成分，培养过程中需通入一定浓度的CO₂，其主要作用是___________。胚胎干细胞存在于______中，______（填“具有”或“不具有”）组织特异性。
(3)过程⑤中是否需要对人帕金森病模型鼠注射相应的免疫抑制剂以避免发生免疫排斥反应，回答并说明理由：_______________。

5 . 研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：

   

(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的_________负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越_____________（填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于______________的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是____________。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射_______________，获得的卵母细胞应在体外培养到_______________期。在对卵母细胞去核时，可采用的方法有________________________（至少答出两种）。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是________________。胚胎移植前，需对供、受体犬进行_____________处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到_____________阶段才能进行胚胎移植。

6 . 作为实验中重要的模式动物，小鼠与人类在基因水平上高度同源，其生理生化指标及体内调控机制和人类相同或相似，因此常用于人类某些疾病的研究。研究人员欲以小鼠为实验材料，将细胞核移植技术与干细胞技术相结合，培养所需要的细胞、组织或器官，其部分实验过程如图所示。请回答下列问题：

(1)干细胞包括胚胎干细胞和____，后者具有____性，只能分化成特定的细胞或组织。
(2)体外培养胚胎干细胞时所需气体主要有____，前者是细胞代谢所必需的，后者的主要作用是____。培养胚胎干细胞的培养液要定期更换，目的是____。
(3)图中的X 细胞通常为____。培养重构胚时，需将其进行激活，激活的目的是____。
(4)将细胞核移植技术与干细胞技术相结合，培养所需要的细胞、组织或器官，其意义有____（答出点）等。

7 . 北方白犀牛曾经广泛分布于非洲中部等地，但由于猖獗的盗猎和自然栖息地的丧失，它们的数量不断减少。2018年3月，世界上最后一头雄性北方白犀牛去世，该物种仅剩下两头雌性；在此之前，非洲肯尼亚自然保护区的工作人员一直通过各种方法努力挽救北方白犀牛这一珍稀物种，设法保存了北方白犀牛的精子。
(1)为了快速繁殖北方白犀牛，将雌性北方白犀牛体内获得的卵母细胞培养到相应时期后与经过_________处理的白犀牛的精子在体外的受精液中完成受精，形成受精卵。
(2)将受精卵培养在营养全面、温度pH和气体环境适宜、渗透压正常的培养液中，还需保证环境_____________。把受精卵一般培养到______________阶段，进行胚胎移植。欲获得更多的胚胎并检测胚胎性别可分别进行___________和__________操作。
(3)还可以用__________技术拯救北方白犀牛。

8 . 以我国科学家为主的科研团队将OSNL（即4个基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的缩写）导入黑羽鸡胚成纤维细胞（CEFs），诱导其重编程为诱导多能干细胞（iPS），再诱导iPS分化为诱导原始生殖细胞（iPGCs），然后将iPGCs注射到孵化2.5天的白羽鸡胚血管中，最终获得具有黑羽鸡遗传特性的后代，实验流程如图。回答下列问题。

(1)CEFs是从孵化9天的黑羽鸡胚中分离获得的，为了获得单细胞悬液，鸡胚组织剪碎后需用___________________________处理。动物细胞培养通常需要在合成培养基中添加______________等天然成分，以满足细胞对某些细胞因子的需求。
(2)体外获取OSNL的方法有______________（答出1种即可）。若要在CEFs中表达外源基因的蛋白，需构建基因表达载体，载体中除含有目的基因和标记基因外，还须有启动子和______________等。启动子是______________识别和结合的部位，有了它才能驱动____________________________。
(3)iPS细胞和iPGCs细胞的形态、结构和功能不同的根本原因是______________。
(4)诱导iPS细胞的技术与体细胞核移植技术的主要区别是__________。
(5)该实验流程中用到的生物技术有________________（答出2点即可）。

9 . 回答下列有关动物细胞培养和核移植技术的问题：
(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是________。
(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成不死性细胞。
(3)在培养体细胞时需要创造无菌无毒的环境，“无菌无毒环境”中的“毒”是________。对培养液进行_____________________（答出2点）等操作，可创造无菌无毒的环境。
(4)目前核移植技术中常用的去核方法为_________________，作为核移植受体细胞的去核卵母细胞一般处在____________期，常通过____________（物理方法）进行激活，使其完成细胞分裂和发育进程。

10 . 研究人员将新霉素抗性基因（Neo^r）和绿色荧光蛋白基因（GFP）的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞，获得转基因细胞株，并以转基因细胞为核供体，获得转基因牛。回答下列问题：
(1)基因工程通常是利用______________作为载体，将基因送入受体细胞。双标记选择载体上的新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因的作用是_____________。
(2)特异性快速扩增目的基因的方法是_____________技术，该反应过程中需加入引物，其作用是_____________。对设计的两种引物之间的碱基序列的要求是_____________。
(3)用T4DNA连接酶构建基因表达载体时，研究人员常选用能产生黏性末端的限制酶，理由是_____________。培养并获得转基因细胞株时，需要定期更换培养液，目的是_____________（答出两点）。
(4)以转基因细胞为核供体，获得转基因牛时，要将其注入去核卵母细胞中。将卵母细胞去核的目的是_____________。