【推荐1】下图为大肠杆菌DNA分子的局部结构示意图。请据图回答：

（1）图中1表示______，2表示______，1、2、3结合在一起的结构叫______。
（2）图中3有______种，中文名字分别是______ 。3与4通过______相连接。
（3）若该DNA分子共有a个碱基，其中腺嘌呤有m个，则该DNA分子复制2次，需要游离的胞嘧啶脱氧核苷酸______个。
（4）某同学制作了DNA分子双螺旋结构模型，其中一条链所用A、C、T、G碱基模型的数量比为1∶2∶3∶4则该DNA分子模型中上述碱基模型的数量比应为______。
A．1∶2∶3∶4        B．3∶4∶1∶2            C．1∶1∶1∶1          D．2∶3∶2∶3

【推荐2】如图是某DNA分子的局部结构示意图。请据图分析回答：

(1)写出下列图中序号代表的结构的中文名称：①_____，⑥_____。
(2)该DNA分子应有_____个游离的磷酸基团。
(3)从主链上看，两条单链方向_____，从碱基关系看，两条单链_____。
(4)如果将¹⁴N标记的细胞培养在含¹⁵N标记的脱氧核苷酸的培养液中，此图所示的_____（填图中序号）中可检测到¹⁵N。若细胞在该培养液中分裂4次，该DNA分子也复制4次，则得到的子代DNA分子中含¹⁴N和含¹⁵N的比例为_____。
(5)若该DNA分子共有a个碱基，其中腺嘌呤有m个，则该DNA分子复制4次，需要游离的胞嘧啶脱氧核苷酸_____个。

【推荐3】下图1中DNA分子有a和d两条链，将图1中某一片段放大后如图2所示，请结合所学知识回答下列问题：

(1)若用放射性同位素³²P标记该DNA，则在图2的结构4、5、6中______（填数字）结构将出现较高的放射性。
(2)图1中，A和B均是DNA分子复制过程中所需要的酶，则A、B分别是______和______。图1过程在水稻根尖分生区细胞中进行的场所是______，此过程所需的能量是主要是在细胞的______（填结构名称）中产生的。
(3)上述结构模式图中，若一条DNA单链片段的序列是5′—GATACC—3′，那么它的互补链的序列是______（填字母）。

A．5′—CTATGG—3′	B．5′—GATACC—3′
C．5′—GGTATC—3′	D．5′—CCATAG—3′

(4)DNA分子具有一定的热稳定性，加热能破坏图2中9处氢键而打开双链，现在有两条等长的DNA分子甲和乙、经测定发现甲DNA分子热稳定性较高，你认为可能的原因是______。
(5)若用1个³²P标记的噬菌体侵染未标记的大肠杆菌，释放出300个子代噬菌体。其中含有³²P的噬菌体所占的比例是______（用分数表示）。若图2中亲代DNA分子在复制时，一条链上的G变成了A，则该DNA分子经过n次复制后，发生差错的DNA分子占DNA分子总数的比例是______（用分数表示）。

【推荐1】科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。回答下列问题：
(1)蛋白质工程流程如图所示，物质a是__________，物质b是__________ 。在生产过程中，物质b可能不同，合成的蛋白质氨基酸序列和空间构象却相同，原因是__________。

(2)蛋白质工程是基因工程的延伸，基因工程中可利用PCR技术扩增目的基因，在PCR反应缓冲液中需要加入的酶是__________，反应缓冲液中引物的作用是__________。
(3)获取目的基因（S基因）后，为了成功构建重组表达载体，确保目的基因插入载体中方向正确，最好选用__________切割S基因的cDNA和载体。

(4)科研工作者利用微生物发酵生产胰岛素，选择酵母菌做受体细胞比大肠杆菌效果更好，请你从细胞结构方面说明理由：_____________________________________。

【推荐2】某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，图1为其主要技术路线，图2为A基因和载体及有关限制酶的识别序列。基因A为0.98kb。
       

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindⅢ	A↓AGCTTTTCGA↑A	EcoRⅠ	G↓AATTCCTTAA↑G
PvitⅡ	CAG↓CTGGTC↑GAC	PstⅠ	CTGC↓AGGA↑CGTC
KpnⅠ	G↓GTACCCCATG↑G	BamHⅠ	G↓GATCCCCTAG↑G

回答下列问题：
(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增A基因。用于扩增A基因的引物需满足的条件是___________、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物的___________端（3’或5’）添加相应的限制酶识别序列，由图可知在A基因的两端应添加___________和___________两种不同限制酶的识别序列。这样就方便后面用这两种限制酶进行酶切，相比用同一种酶，该方法的优点在于___________（答出2点）。经过这两种酶酶切的A基因和载体连接时，可选用___________（填“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）
(2)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取单菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（1）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图3，可知___________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
   
(3)基因工程常用大肠杆菌作为受体细胞，是因为其具有___________等优点。般需用___________处理大肠杆菌细胞，以便将重组质粒导入其中。由图1可知，该转基因工程菌中的重组质粒是________（填“克隆载体”或“表达载体”）
(4)下列说法错误的有哪几项

A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞需要通过原代培养扩大细胞数量。

B．单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

C．进行酶切产物电泳时，加样孔一端朝向正极。

D．停止电泳后用0.1%的亚甲基蓝溶液对凝胶进行染色，染料使用后按规定灭菌后再废弃。

【推荐3】研究发现，成年小鼠的Y染色体上双外显子SRY（SRY-T）才是真正的睾丸决定因素。缺少SRY-T的雄性小鼠（XY）发育为雌性，而携带SRY-T转基因的雌性小鼠（XX）发育为雄性。回答下列相关问题：
(1)要确定从X染色体上获得的DNA片段中是否含有SRY-T，先获得相应DNA片段并进行PCR扩增，扩增时需要________种引物。PCR扩增过程中温度呈"升温→降温→升温"的周期性变化，“降温”的作用是___________。对扩增产物进行检测时用_________作为探针，若出现杂交带，则__________（填“含有”或“不含有”）SRY-T基因。
(2)图示为验证SRY-T能决定雄性性别，将含SRY-T的基因表达载体导入小鼠（性染色体为XX）体内，导入雄原核的原因是_________。

(3)植入代孕母鼠的小鼠早期胚胎性染色体需要为XX，可检测_______期滋养层细胞进行筛选。进行胚胎移植时代孕母鼠是_______（答出2点即可）的个体。在获得的子代小鼠中出现________（填性别）小鼠，证明SRY-T基因决定雄性性别。

【推荐1】【加试题】下列文题有关大肠杆菌的培养实验，请回答：

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和
作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的________。
（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在__________中进行扩大培养，培养液经________后，在LB固体培养基上进行_______ ，并将培养皿________放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。 为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及__________，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。
（3）通常对获得的纯菌种可以依据________的形状、大小等特征进行初步的鉴定。
（4）关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是(            )
A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种工具精火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
（5）科学家利用转基因技术，利用大肠杆菌生产胰岛素，其过程如下图。由甲和载体乙拼接形成的丙通常称为___________，构建得到丙时必需的工具酶有___________。在此过程中，用来处理丁以增加细胞壁通透性的化学试剂是(         )

A．氯化钠                 B．氯化钙               C．次氯酸钠             D．纤维素酶

【推荐1】请回答下列有关温度与酶活性的问题：
(1)温度对唾液淀粉酶活性影响的实验：
将盛有2mL唾液淀粉酶溶液的试管和盛有2mL可溶性淀粉溶液的试管编为一组，共四组。在0℃、20℃、37℃和100℃水浴中各放入一组，维持各自的温度5min。然后，将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中，摇匀后继续放回原来的温度下保温。
把______________________________的时间作为本实验的起始时间记录下来。再每隔一分钟，取一滴混合液滴在盛有碘液的点滴板上进行观察，记录每种混合液蓝色消失的时间。通过比较混合液中________消失所需时间的长短来推知酶的活性。预计________温度下混合液因其中的酶失去活性蓝色不会消失。
(2)科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象。在研究溶菌酶的过程中，得到了多种突变酶，测得酶50%发生变性时的温度（Tm），部分结果见下表：

酶	半胱氨酸（Cys）的位置和数目	二硫键数目	Tm/℃
野生型T4溶菌酶	Cys51，Cys97	无	41.9
突变酶C	Cys21，Cys143	1	52.9
突变酶F	Cys3，Cys9，Cys21，Cys142，Cys164	3	65.5

          （注：Cys上角的数字表示半胱氨酸在肽链的位置）
溶菌酶热稳定性的提高，是通过改变______________________和增加_______得以实现的。从热稳定性高的酶的氨基酸序列出发，利用____________方法获得目的基因，通过基因工程的手段，可以生产自然界中不存在的蛋白质。

【推荐2】酿酒酵母细胞质钙离子浓度的调控与酿酒酵母的抗逆性、生长增殖过程有关。Cchlp是一种位于酿酒酵母细胞膜的钙离子通道蛋白、调控细胞外钙离子流入细胞质。研究小组利用基因工程获取Cchlp抗原、制备Cchlp单克隆抗体来检测酿酒酵母Cehlp的表达情况。其中制备Cchlp抗原的流程如图1所示：
   
请回答以下问题：
(1)过程①需要_____________酶进行催化。
(2)Cchlp含2039个氨基酸，其中抗原区域约含300个氨基酸。现根据抗原区域氨基酸序列，查找对应基因序列，设计如下引物进行PCR。（引物F为基因上游引物，引物R为基因下游引物）
   
引物F：5'-AGGAGG……CCATT-3'
引物R：S-GATTCC……GGGTT-3'
为使PCR获得的Cchlp抗原基因能与PET-28a质粒正确连接，应在引物中加入合适的限制酶识别序列。加入限制酶序列后引物F序列为5'GACACCATATGAGGACG……CCATT-3'（下划线部分为限制酶识别序列），引物R序列应为_______________。

A．5'AGGACG……CCATTCATATGGACAC-3'

B．S'GACACCTCGAGGATTCC……GGGTT-3'

C．S-GATTCC……GGGTTCTCGAGGAGAC-3'

D．5'-GACACCCCGGGGATTCC……GGGTT-3'

(3)将PCR产物和标准参照物分别加入泳道1、泳道2进行电泳。加样孔位于_______________（填写“甲”或“乙”）端。泳道1条带中的PCR产物_____________（填写“一定”或“可能”或“不”）是目的基因，理由是_________________。
(4)应在含__________________的固体培养基中培养重组大肠杆菌，经鉴定获得含目的基因的大肠杆菌，分离提纯得到Cchlp抗原。
(5)利用杂交瘤细胞技术制备Cchlp单克隆抗体的过程中有两次需要用到Cchlp抗原，请写出其使用方法________________。

【推荐3】近年来，生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一。研究人员利用基因工程的方法将油料作物紫苏DGATI基因导入四尾栅藻（操作过程如图），获得转基因的产油微藻并利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。

限制酶及其识别序列

限制酶	识别序列
BamH I
Hind III
EcoR I
Xba I

注：LacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落则呈白色。
(1)提取紫苏细胞的总RNA经过____得到的cDNA，经____技术扩增得到DGAT1基因，与克隆质粒pMD19连接，将连接产物导入到经CaC1₂处理后的大肠杆菌细胞，并接种到添加____的培养基上培养，一段时间后，挑选颜色为____的菌落用液体培养基培养，提取质粒pMD19-DGAT1。
(2)用限制酶切pMD19-DGAT1获得DGAT1基因，并与酶切后的载体pBI121连接得到____，并导入到四尾栅藻。若DGAT1基因序列两端没有限制酶识别序列需要人工添加黏性末端，请根据表中信息写出DGAT1基因两端所添加脱氧核苷酸的碱基顺序____，使得目的基因左右侧分别与质粒上的BamH I、Xba I酶切末端相连。
(3)转DGATI基因四尾栅藻成功的标志是_____。