1 . 草食昆虫伤害番茄后，会诱导其系统抗性，如产生蛋白酶抑制剂（一类小分子蛋白质，对人畜无副作用，害虫不易产生耐受性），与昆虫消化道的特异蛋白消化酶相互作用，形成酶抑制剂复合物，阻断或减弱消化酶，导致害虫无法对外来蛋白有消化作用而发育异常或死亡。科研人员欲培育转番茄蛋白酶抑制剂基因的烟草植株并对其抗虫特性进行分析。
（1）在损伤番茄叶的韧皮部软组织细胞中，原系统素（200 个氨基酸的前体蛋白）被_________酶水解成含18个氨基酸分子的系统素：释放出的系统素与邻近细胞膜上的______________结合，经一系列过程，最终激活蛋白酶抑制剂基因的表达。
（2）以受伤番茄植株叶片总RNA为模板，通过_______获取cDNA编码序列，再利用PCR技术以特定引物扩增得到番茄蛋白酶抑制剂I基因的cDNA编码序列（tin2，见左图），与质粒（限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同，见图）构建成表达载体。为保证tin2在烟草细胞中表达，据图可知，需用的限制酶是_______________来进行酶切以构建重组质粒。科研人员已成功分离含内含子的番茄蛋白酶抑制剂II基因（tin2i）， 用类似的方法构建了重组质粒。将分别构建的重组质粒用_________转化法导入烟草细胞，利用T- DNA的特点将目的基因转移到受体细胞的_____________上，再通过_____________技术，可分别培育成转tin2 和转tin2i的烟草植株。

（3）科研人员利用_________技术检测目的基因已成功转录，在此基础上为进一步分析两类转基因烟草植株抗虫活性的差异以及内含子对基因表达活性的影响，进行了如下实验。
①实验一：已知蛋白酶抑制剂II可抑制胰蛋白酶的活性。检测转tin2和转tin2i的烟草植株中晶茄蛋白酶抑制剂II的活性，结果如图。当烟草叶片蛋白提取物用量达25μg时，转tin2 烟草植株和转tin2i 姻草植株的反应混合物中，胰蛋白酶活性分别剩下0．7、0．5。两种转基因植物剩余的胰蛋白酶活性均下降，反映出tin2和tin2i____________________________________________________________。

②实验二：分别对5株转tin2（a- e）和5株转tin2i（a i~e i）的烟草植株进行全面的杀虫活性实验，结果见下表。由表中数据推测，转tin2i 烟草植株的杀虫活性比转tin2 烟草植株___________。综合实验一、二的全部数据，出现此实验结果的原因可能是_____________________________。

烟草植株	转tin2					转tin2i					对照
	a	b	c	d	e	ai	bi	ci	di	ei
幼虫平均死亡率（%）	12．7	24．0	5．6	4．1	3．3	22．9	61．5	33．3	6．8	11．7	2．8

（4）目前有较多的药物具有良好的杀虫效果，但研制蛋白酶抑制剂这类的新型药物仍有重要的意义，试分析其理由_________________________________（说出1点）。

2 . 生活中常遇到这样的现象：切开的苹果、久存的荔枝等表面会变色，原因是植物细胞中的多酚氧化酶（PPO）催化多酚类底物（无色）生成了褐色物质，此过程称为褐变，不仅会影响外观，还会导致营养损失。请回答下列问题：
（1）自然状态下果蔬并没有发生褐变，是因为细胞内具有______系统，使多酚氧化酶与酚类底物分别储存在细胞的不同结构中而不能相遇。
（2）研究发现pH和温度都是影响PPO活性的重要因素，且具有叠加效应，荔枝果皮褐变作用机理如图一。一些商贩对荔枝用二氧化硫处理后冷藏，贮藏期可长达40-50天左右。推测其原理是：________________________。
（3）熏硫处理的水果存在食品安全隐患，科学家已利用基因工程技术得到了耐褐变转基因苹果，耐褐变机制如图二。要想获得该目的基因，可从苹果细胞中提取总RNA，以其中的mRNA为模板，经________________________合成DNA（即cDNA）。通过PCR技术可在cDNA分子中专一性扩增出目的基因，其原因是________________________。

图一

图二

（4）培养耐褐变转基因苹果过程中，下列导入目的基因的方法，可行的是______。
A．将耐褐变蛋白注射到苹果受精卵中
B．将苹果花序直接浸没在目的基因溶液中一段时间
C．将目的基因的DNA序列与质粒重组后导入农杆菌，并侵染苹果叶肉细胞
D．将含目的基因的DNA溶液直接注入苹果子房中
（5）研究人员利用了图二的RNA沉默技术。沉默机制是使目的基因的表达序列和多酚氧化酶基因的表达序列必须是______的，且要同时在同一细胞内表达，从而阻断苹果细胞内多酚氧化酶基因的______过程（数字），降低多酚氧化酶基因的表达水平。欲探究RNA沉默干扰是否成功，可检测苹果细胞中______或将苹果切开暴露在空气中观察是否褐变。