1 . 两位女科学家因发现“CRISPR / Cas9基因剪刀”而获得2020年诺贝尔化学奖。CRISPR/Cas9 系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理如图1所示。

（1）据图1可知，在向导RNA（sgRNA）的引导下，Cas9利用其具有的______个内切酶活性位点，水解目标DNA的______。
（2）科研人员通过突变得到内切酶活性全部消失的dCas9，建构的CRISPR / dCas9系统保留向导RNA（sgRNA）引导进入基因组的能力。当dCas9与VP64、P65等转录激活因子融合，形成的dCas9-SAM可进行基因调控等研究。
①图2示意将OCT4、KLF4、MYC及SOX2四个基因的sgRNA序列串联成的sgRNA质粒和dCas9-SAM质粒与磷脂等混合（形成包埋DNA脂质体结构）。将脂质体加入到细胞系MCF7的细胞培养皿中，能实现基因转移的原理是______。24h后通过添加______筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑后细胞。此过程须在37℃，气体环境为______的细胞培养箱中进行。
②转染好的细胞用裂解液消化后，使用RNA提取试剂盒提取总RNA，取1μg提取的RNA使用反转试剂盒进行操作即得到______，然后将其进行实时荧光定量PCR。PCR操作时通常_____5分钟，变性30秒，再复性、延伸，循环等。
③该实验通过4种sgRNA对MCF7细胞进行编辑，可实现多基因______的目的。

2 . CRISPR/Cas9系统基因编辑是一种对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，其原理是由一个向导RNA（sgRNA）分子引导Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割。受此机制启发，科学家们通过设计sgRNA中碱基的识别序列，即可人为选择DNA上的任一目标位点进行切割（见下图）。

（1）从CRISPR/Cas9系统作用示意图看，能够行使特异性识别DNA序列并切割特定位点功能的分子是___________，其类似于基因工程中__________的作用。
（2）CCR5基因是人体的正常基因，其编码的细胞膜通道蛋白CCR5是HIV入侵T淋巴细胞的主要辅助受体之一。科研人员依据_____________的部分序列设计sgRNA序列，导入骨髓_________细胞中，构建sgRNA-Cas9复合体，以实现对CCR5基因的定向切割，变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，即可有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞。试分析与上述过程最接近的现代生物科技是________________。
（3）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，实验发现sgRNA的序列越短脱靶率越高。试分析脱靶最可能的原因是____________________________。
（4）通过上述介绍，CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术在______________等方面有广阔的应用前景。（至少答出两点）

3 . 2017年10月，中国科学院动物研究所干细胞与生殖生物学国家重点实验室的科学家们，利用CRISPR-Cas9基因编辑技术创造出了12只健康猪，其体脂肪比普通猪低约24%。低脂肪的动物有一个基因能通过燃烧脂肪控制体温，创造出的低脂肪猪将能节省养殖户的大量保温费用，减少寒冷冬季造成的损失。请回答下列问题:
（1）科学家将小鼠调节体温的基因UPC1成功地编辑到缺乏调节体温基因的猪体内。猪所产生的变异属于__________________。
（2）为了能获得更多的猪卵(母)细胞，在取卵(母)细胞前，通常需要注射_____来促进排卵。注射的该物质是由猪的 ___________(器官)分泌的。
（3）判断卵细胞在体外是否受精的标志是_______________。
（4）在获得的早期胚胎移植到胚胎受体前，需要对胚胎受体进行______处理。对暂时不移植的早期胚胎，可采用_____________法进行保存。
（5）胚胎移植的实质是_________________。
（6）创造出12只健康猪的过程，运用到的胚胎工程技术有_____________(答两种即可)。