1 . 风靡全球的基因编辑技术可实现对目的基因的“编辑”和特定DNA片段的敲除、加入等。为了探究NgAgo—gDNA基因编辑系统能否引发斑马鱼的Fabplla基因发生突变导致其眼睛发育缺陷，科研人员进行了以下研究：
（1）首先推测构成 NgAgo蛋白的___________，合成mRNA，并将其与单链gDNA混合后注射到斑马鱼胚胎细胞中，再进行_____________培养获得幼体。
（2）进一步探究斑马鱼眼睛缺陷是否由Fabplla基因发生突变引起的，可从___________细胞中提取Fabplla基因研究其在斑马鱼胚胎发育中的功能。
结果：NgAgo―gDNA系统引发的眼睛缺陷可通过外源添加Fabplla基因的mRNA来恢复，而且对Fabplla基因测序结果发现其序列与对照组相同。
初步结论：_________________________________。
（3）PCR技术扩增Fabplla基因时，需要提供模板、原料、________________、引物等条件。将模板DNA加热至90-95℃的目的是______________________，下一过程称为______________________。

2 . 科学家发现细菌细胞中存在清除入侵病毒DNA的功能系统（见下图1），并发明了CRISPR/Cas9基因编辑技术，目前已成为生物科学领域最热门的基因操作技术。下图2 是科研人员运用CRISPR/Cas9基因编辑技术（其中表达载体1的作用是在受体细胞中控制合成CRISPR复合体，表达载体2可以与相应DNA的同源区进行互换、重组），成功地将基因A精确导入到绒山羊细胞内的甲、乙两个基因之间，并和绿色荧光蛋白基因一起表达的过程示意图。请回答。

（1）由图1可知，CRISPR复合体中crRNA的主要功能是________________________，而Cas9蛋白催化断裂的化学键位于____________之间。细菌的这种清除能力的生理意义是________________________。
（2）结合对图1的理解，图2中表达载体1首先要表达出含有________________________序列的crRNA和Cas9蛋白，以结合形成CRISPR复合体。
（3）根据图2，基因表达载体2上需要加入:①基因甲片段、②基因乙片段、③基因A、④绿色荧光蛋白基因等四种DNA片段，这4种片段在载体上的正确排列顺序应是___________（用序号代表相应片段）。在形成重组DNA时需要___________酶参与催化表达载体2与绒山羊DNA的连接。
（4）实验室一般会将重组DNA导入山羊的胚胎干细胞中，以培育、筛选出转基因山羊，选择胚胎干细胞作为受体细胞的主要依据是______________________。
（5）与传统的基因工程相比较，运用CRISPR/Cas9基因编辑技术培育转基因生物的明显优点是_________________________________。

3 . 基因疗法所涉及的基因工程技术主要有三种，包括病毒载体、基因(编辑)和细胞改造。请回答：
（1）第一种是将________通过载体送入目标细胞让其发挥作用。该技术用来传递基因的载体多是病毒类载体，因为它们能________。经过基因改造后，这些作为载体的病毒具有__________的特点。
（2）第二种是直接通过基因(编辑)技术修复目标细胞的________基因(编辑)技术可以达到添加基因、消除基因或者________的效果。
（3）第三种则是从患者体内提取细胞在体外进行修改然后再重新输回患者体内发挥作用。例如，对造血干细胞进行基因工程改造让其制造内源性的凝血因子，从理论上说能持续缓解血友病症状，而不需使用____治疗。基因治疗进入了一个兼具安全性和有效性的时代。但你认为这个领域中的问题是__________。

4 . 据最新报道，中科院动物研究所的科学家利用CRISPR—Cas9基因编辑技术创造出12只健康猪，其体脂肪比普通猪低约24%。低脂肪的动物有一个基因能通过燃烧脂肪控制体温，创造出低脂肪的猪将能节省养殖户的大量保温费用，减少寒冷冬季造成的损失。回答下列问题：
（1）为了获得更多的猪卵（母）细胞，要对供体猪注射促性腺激素，促进其____________。采集的精子需经过____________处理，才具备受精能力。判断卵细胞是否完成受精的标志是____________。
（2）在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入____________等一些天然成分，还需提供CO₂以维持________________________。       
（3）在猪胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行____________处理。胚胎移植的实质是____________。胚胎能在受体猪的子宫内存活并正常发育面生理原因是________________________。

5 . 基因组编辑技术是研究基因生物功能的重要手段，下图是对某生物B基因进行定点编辑的过程，该过程中用sgRNA可指引核酸内切酶Cas9结合到特定的切割位点，相关说法不正确的是

A．靶基因部分序列与sgRNA通过碱基互补配对原则进行配对

B．核酸内切酶Cas9可断裂脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键

C．被编辑后的B基因与编辑前的B基因互称为非等位基因

D．通过破坏B基因后生物体的功能变化可推测B基因的功能

6 . CRISPR／Cas9系统作为新一代基因编辑工具，具有操作简便、效率高、成本低的特点。该系统由Cas9和单导向RNA(sgRNA)构成。Cas9是一种核酸内切酶，它和sgRNA构成的复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在PAM序列(几乎存在于所有基因)上游切断DNA双链(如下图所示)。DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制。在此基础上如果为细胞提供一个修复模板，细胞就会按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变，从而实现基因的编辑。

（1）真核细胞中没有编码Cas9的基因，可利用基因工程的方法构建_____________，将Cas9基因导入真核细胞。Cas9是在细胞中的____________合成的，而sgRNA的合成需要____________酶的催化。
（2）如图所示，CRISPR/Cas9系统发挥作用时，sgRNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为___________所以能结合在一起，然后由Cas9催化____________水解，从而使DNA分子断裂。
（3）一般来说，在使用CRISPR/Cas9系统对不同基因进行编辑时，应使用Cas9和_____________（填“相同”或“不同”）的sgRNA进行基因的相关编辑。
（4）通过上述介绍，你认为基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术在_________等方面有广阔的应用前景。（至少答出两点）

7 . 新一代基因编辑工具由Cas9（一种限制性核酸内切酶）和向导RNA构成。该复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在合适位点切断DNA双链（如下图所示）。DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制，在此基础上如果为细胞提供一个修复模板，细胞就会按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变，从而实现基因编辑。

请回答：
（1）在将编码Cas9的基因导入真核细胞的转基因操作中，若控制合成Cas9的基因序列已知，可用___方法合成目的基因，再构建___导入真核细胞，该过程中需要使用的酶是__
A．限制性核酸内切酶 B．DNA连接酶 C．限制性核酸内切酶和DNA连接酶 D．DNA聚合酶
上述转基因操作成功的标志是__ 。
（2）如图所示，基因编辑工具发挥作用时，向导RNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为___所以能结合在一起，然后由Cas9催化__键断裂，从而使DNA分子断裂。
（3）一般来说，在使用基因编辑工具对不同基因进行编辑时，应使用Cas9和___（填“相同”或“不同”）的向导RNA进行基因的相关编辑。

8 . 2017年8月3日英国《自然—生物技术》杂志发表声明，由于实验缺乏可重复性，某科学团队撤回了发表在该杂志上的关于新的“基因编辑技术”的研究论文，从而引起广泛关注。“基因编辑技术”是指通过一种细菌编码的核酸内切酶Cas9蛋白，利用一条单链向导RNA对特定的DNA 片段进行定向切割的技术（如图）。下列相关叙述正确的是       

A．细菌的一个基因转录时两条DNA链可同时作为模板，提高转录效率

B．Cas9蛋白对DNA上的目标位点进行切割时破坏的化学键是磷酸二酯键

C．Cas9蛋白由相应基因指导，在核糖体中合成并经内质网、高尔基体分泌

D．向导RNA通过A和T、C和G的互补配对对以形成自身的双链区域

9 . 乙肝病毒（HBV）是部分双链的DNA病毒，乙肝病毒引起的乙型肝炎不仅感染性高，而且危害大。下面是利用现代生物技术治疗乙型肝炎的三种方法。请回答下列问题：

（1）方法Ⅰ属于使用基因工程方法进行治疗，可以用___________技术扩增HBV表面抗原基因。过程①不仅需要构建___________，还需要对酵母菌进行处理，使其成为___________细胞，可通过___________技术确定转基因酵母菌是否培养成功。
（2）方法Ⅱ中，培养细胞1时，培养液中除应含有细胞所需的营养物质外，还应添加___________等一些天然成分，经过选择性培养得到的细胞2还需进行克隆化培养和___________检测，再经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。与植物细胞融合相比，过程②特有的方法是用___________处理。
（3）方法Ⅲ运用的是现在流行的基因编辑技术——CRISPR/Cas9系统，科学家借助纳米脂质颗粒将Cas9蛋白的mRNA和引导RNA通过___________方式送入肝细胞内，然后Cas9mRNA经翻译合成Cas9蛋白，接着Cas9蛋白和引导RNA组装成 CRISPR/Ca59系统进入细胞核中，将整合在染色体上的乙肝病毒DNA进行基因编辑，使病毒DNA___________。由此可推测，CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白可能是切割病毒DNA___________键的酶。

10 . 【生物——选修3:现代生物科技专题】
基因编辑技术指对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。继CRSPRI/Cas9系统基因编辑技术风靡全球实验至后，我国韩春雨研究团队提出了NgAgo-gDNA基因编辑工具，但却引起了科学界的质疑。为了探究NgAgo-gDNA系统能否引发斑马鱼的Fabplla基因发生突变导致其眼睛发育缺陷，复旦大学和南通大学联合进行了研究。请回答下列问题.
（1）探究一:NgAgo - gDNA系统能否使斑马鱼眼睛缺陷？
方法:首先推测构成NgAgo蛋白的______________，在试管中合成mRNA，并将其与单链gDNA混合后注射到斑马鱼胚胎细胞中，进行胚胎培养。培养液需含有葡萄糖、氨基酸、核苷酸、无机盐、有机盐、维生素和_______等。小斑马鱼的形成______________(填“需要，，或“不需要”）进行胚胎移植。单链gDNA与Fabplla基因的碱基互补配对与Fabplla基因转录时的碱基互补配对相比，区别是_____________________。
结果:实验组斑马鱼胚胎出现了严重的眼睛缺陷。
（2）探究二:斑马鱼眼睛缺陷是否是由Fabplla基因发生突变引起的?
方法:从异常眼部表现型的斑马鱼胚胎细胞中提取Fabplla基因，对其使用PCR技术进行扩增，并研究该基因在斑马鱼胚胎发育中的功能。PCR技术扩增Fabplla基因时，需要提供模板、原料、_______、引物等条件。将模板DNA加热至90～95℃，该处理的目的是____________________________。
结果：NgAgo-gDNA系统引发的眼睛缺陷可通过外源添加Fabplla基因的mRNA来恢复，而且对Fabplla基因测序结果发现其序列与对照组相同。
初步结论:____________________________________。
（3）转基因技术是一把双刃剑，引发了人们在食物安全、生物安全和__________________三个方面发生激烈的争论。在食物安全方面，绝大多数科学家都能遵守科学道德，如对外源DNA进行选择，避免产生对人体有毒害或过敏的__________________。