1 . 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿，是由经CRISPR/Cas9基因编辑技术对CCR5基因进行修改的胚胎细胞孕育的。研究者的初衷是让志愿者生出能抗艾滋病病毒的婴儿。但婴儿诞生后，深圳市医学伦理专家委员会启动对该事件涉及伦理问题的调查。下列有关叙述错误的是（       ）

A．在普通培养液中加入适量的动物血清可以培养艾滋病病毒

B．修改的胚胎细胞孕育出婴儿说明胚胎细胞具有发育的全能性

C．胚胎是人生命的一个自然阶段，不能对其生命属性进行非道德篡改

D．经过基因编辑的个体，有可能影响基因选择性表达，而导致其他疾病的产生

2 . CRISPR-Cas9技术是一种应用广泛的基因编辑技术，通过人工设计的sgRNA（guideRNA）来识别目的基因组序列，并引导Cas9蛋白酶进行有效切割DNA双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA进行修饰的目的。科学家利用CRISPR-Cas9技术将抑癌基因△Np63a定点插入小鼠胰腺癌细胞中，以研究其在胰腺癌细胞中的作用。图1为构建的Cas9—sgRNA质粒，将其导入胰腺癌细胞并表达（图2）；携带△Np63a基因的供体质粒与断裂DNA的高度同源序列（同源臂）发生互换，从而将△Np63a基因定点插入胰腺癌细胞基因组中（如图3所示）。请回答下列问题：

   

(1)Cas9蛋白可对特定的DNA序列切割，在功能上最接近于________酶；一次切割过程中会产生__________个游离的磷酸基团；将Cas9-sgRNA质粒和供体质粒导入胰腺癌细胞的方法是_________。
(2)若已知靶序列5'-GCATCG…GGTCCC-3'，根据该靶序列设计的sgRNA中的相应序列是5'-__________-3'。若要将靶序列从目标DNA上切除下来，则需要设计________种不同的sgRNA。
(3)CRISPR-Cas9系统有时存在结合出错而出现“脱靶”现象，分析其可能原因是_________。
(4)若要检测△Np63a基因是否已导入成功，可使用__________技术。被△Np63a基因成功转化的胰腺癌细胞体外培养时，在细胞水平上可能发生的变化有________。
(5)在上述基因编辑过程中，下列核酸序列中应已知碱基序列的有_____________。

A．sgRNA识别序列	B．同源臂1
C．同源臂2	D．CMV启动子

3 . CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。如图是利用该技术对某生物B基因进行编辑的过程，下列叙述错误的是（       ）

   

A．B基因被编辑后因不能转录而无法表达出相关蛋白质

B．根据B基因被编辑后生物体的功能变化，可推测B基因的功能

C．基因定点编辑前需要设计与靶基因全部序列完全配对的sgRNA

D．图中sgRNA1的碱基序列和sgRNA2的碱基序列相同或互补

4 . 2022年1月7日，马兰里医学中心成功将猪心脏移植到一名57岁的心脏病患者身上，虽然这颗心脏仅仅存活了2个月，但仍然为异种器官移植的可行性提供了可观的数据。为了降低免疫排斥反应，研究者借助CRISPR/Cas9技术对移植的猪心脏进行了基因编辑。CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，sgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割、其机制如图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．sgRNA通过与目标DNA序列互补配对引导Cas9蛋白到位

B．有时sgRNA会因错误结合而出现“脱靶”现象，一般sgRNA序列越短，脱靶率越低

C．Cas9蛋白作用于磷酸二酯键

D．通过CRISPR/Cas9技术敲除猪心脏的某个抗原蛋白基因，至少需要设计两个序列不同的sgRNA

5 . 下图为借助CRISPR/Cas9基因编辑技术插入外源基因的过程图，其中PAM序列是一个短DNA序列，单链向导RNA可引导Cas9内切酶至特定的基因位点进行切割。下列叙述正确的是（       ）

A．Cas9内切酶能将核糖核苷酸之间的磷酸二酯键断开

B．细菌细胞中的限制酶也能起到类似Cas9内切酶的作用

C．Cas9内切酶定点切割与向导RNA和目标DNA结合有关

D．双链DNA的断裂修复过程需要DNA连接酶的催化

6 . 哪项技术可以用于在细胞中特异性敲除某个基因（       ）

A．PCR（聚合酶链式反应）	B．RNA干扰
C．CRISPR-Cas9	D．Southern印迹

7 . 研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：
   
(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的____负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越____（填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于____的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是____。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射____，获得的卵母细胞应在体外培养____期。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是____。胚胎移植前，需对供、受体犬进行____处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到____阶段才能进行胚胎移植。

8 . 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点插入受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是（       ）

A．经基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液

B．经基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期后移植入同期发情小鼠的子宫

C．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得转基因小鼠

D．通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎

9 . 研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：

   

(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的_________负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越_____________（填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于______________的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是____________。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射_______________，获得的卵母细胞应在体外培养到_______________期。在对卵母细胞去核时，可采用的方法有________________________（至少答出两种）。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是________________。胚胎移植前，需对供、受体犬进行_____________处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到_____________阶段才能进行胚胎移植。

10 . 2020年诺贝尔化学奖颁给了开发基因组编辑方法的两位女科学家，CRISPA/Cas9基因编辑技术可对基因进行定点编辑，其原理是由一条单链导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割，示意图如下。下列叙述错误的是（　　）
   

A．向导RNA可识别、切割DNA上的目标位点

B．单链向导RNA与识别序列，通过氢键连接

C．引入供体DNA分子插入切割点，可以对基因进行定向改造

D．生物体自身存在的修复系统能将断裂上下游两端的序列连接起来，实现目标基因的敲除