2 . 马铃薯是重要的经济作物，植物细胞工程在马铃薯的脱毒及育种等方面有重要应用。回答下列问题。
（1）培育脱毒马铃薯时，外植体宜选用____________（填“茎尖”或“叶片”），不选另外一个部位的理由是____________________。
（2）植物组织培养常用到愈伤组织培养基、生芽培养基和生根培养基。在愈伤组织培养基上，外植体经脱分化形成愈伤组织，愈伤组织是一团____________。从脱分化到再分化需要更换新的培养基，原因是____________。
（3）马铃薯栽培种的抗病性和抗逆性较差，野生马铃薯种的抗病性和抗逆性较好。利用好野生马铃薯种，通过细胞工程改进马铃薯栽培种种质的思路是________________________。
（4）避免微生物污染、优化培养条件可提高植物组织培养的成功率，在植物组织培养时，应从______（至少答出2点）等方面制定措施，减少污染；在培养室中培养时，注意优化培养环境，控制_________（至少答出3点）等培养条件。

3 . 金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

(1)从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得目的基因
(2)在PCR反应体系中应加入模板DNA、引物、___________ 、 _______________、缓冲溶液等
(3)在PCR过程中，PCR的原理：_____________________。
(4)在设计引物时，引物要设计_________种、设计引物时还要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。
(5)图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。PCR过程中，经过4次循环得到__________个等长的DNA
(6)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破______________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。
(7)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物）。

4 . 阅读下面的材料，完成（1）~（4）题。
CAR-T细胞疗法上市2周年了，它改变了癌症治疗吗？
2017年8月30日，美国食品药品管理局宣布由诺华公司制造的CAR-T疗法细胞治疗产品tisagenlecleucel正式获批上市，用于治疗25岁以下急性淋巴细胞白血病的复发性或难治性患者，由此CAR-T细胞治疗正式进入到人们的视线当中。目前CAR-T疗法上市已经超过了2周年，它对癌症的治疗产生了怎样的影响呢？
CAR-T细胞的全称是：

英文	翻译	简写
Chimeric	嵌合	C
Antigen	抗原	A
Receptor	受体	R

CAR-T细胞疗法是嵌合了抗原受体的T细胞疗法。因为癌细胞会表达和正常细胞不同的抗原，所以在实验室里制备可结合这些抗原的受体，让它在T细胞中表达，从而可以直接找到癌细胞并进行杀灭。相当于给T细胞加了一个可以定向导航追踪癌细胞的GPS。
当然在这个过程中，除了需要找到癌细胞的特征信息并传递到T细胞内让它可以识别肿瘤细胞，我们还需要在体外对改造后的T细胞进行培养，使其达到足够的数量，再将其回输到患者体内进行治疗。这就是CAR-T细胞疗法的整个过程。
截止到目前，全球范围内获批的2款CAR-T细胞治疗产品治疗的癌症都属于血液瘤范畴，指的是血液细胞发生癌变引起的肿瘤。最新的研究结果显示：在B细胞急性淋巴瘤患者中，很多患者在接受单次细胞治疗回输后便获得了长期有效的持续缓解；在接受治疗后，总体有60%~93%的患者获得了完全缓解。而传统疗法在血液瘤中仅有不到50%的缓解率。
然而这些并不是CAR-T细胞疗法的最终归宿。血液肿瘤只占恶性肿瘤中的很小一部分，目前对成年人健康危害最大的还是肺癌、胃癌等实体肿瘤。由贝勒医学院主导的一项针对神经母细胞瘤的治疗中，有27%的患者得到了完全缓解；另一项在肝癌、胰腺癌和结直肠癌中的研究中，肿瘤缩小的患者达到了13%，这表明CAR-T细胞疗法在实体肿瘤治疗中也有一定的作用，但仍需要进一步的优化。
相对于血液肿瘤而言，实体肿瘤中CAR-T细胞疗法需要解决的难题主要有：实体瘤特异性靶点数量有限、CAR-T细胞无法有效浸润到实体瘤中、CAR-T细胞的持久性不足等。
（1）CAR-T细胞与人体中原有的T细胞相比，其优越性在于___________________。
（2）CAR-T细胞的制备离不开转基因技术，请简要说出制备CAR-T细胞的基本技术流程_________。
（3）对CAR-T细胞进行体外培养，能否直接用动物细胞培养的方法？请说出理由_________。
（4）根据文中所提到的实体肿瘤治疗效果差的原因，请你提出一条改进措施_________。

5 . 小红不小心被针刺，随即出现抬手动作，其神经反射如图所示。

⑴图中传出神经元是______。b1兴奋后使c1兴奋，而b2兴奋后使c2抑制，可推测b1和b2的突触小泡释放的______是不同的物质。小红抬手之后对妈妈说：“我手指被针刺了，
有点疼。”该过程一定有大脑皮层的______中枢以及言语区的______参与调节。
⑵脊髓灰质炎（脊灰）病毒感染可使脊髓神经元受损而影响有关神经反射，接种疫苗是预防脊灰的有效措施。某研究跟踪监测84名儿童先后两次接种改进的脊灰病毒灭活疫苗的免疫效果，结果见右表，D≥4者免疫结果呈阳性，D值越高者血清中抗体浓度越高。

D	初次免疫		再次免疫
	人数	百分比	人数	百分比
＜4	1	1.2	0	0.0
4	0	0.0	0	0.0
8	1	1.2	0	0.0
16	2	2.4	0	0.0
32	8	9.5	0	0.0
64	11	13.1	0	0.0
128	31	36.9	0	0.0
256	10	11.9	0	0.0
512	14	16.6	6	7.2
1024	3	3.6	17	20.2
＞1024	3	3.6	61	72.6
合计	84	100	84	100

注：D为儿童血清经倍比稀释后检出抗体的最大稀释倍数
由表可知，初次免疫的阳性率为________。请总结再次免疫效果与初次免疫效果的差异，
并分析产生差异的原因________。

6 . 转基因抗虫棉是人们应用较早的基因重组技术推广项目，目前转基因技术有了新的改进，如下图所示。请根据所学知识回答：

（1）图中转基因过程通常选择的限制酶是_____________，启动子的作用是与__________识别和结合，从而驱动基因的转录过程。目的基因与载体结合主要依靠二者含有共同的_____________，将目的基因导入图中受体细胞一般采用_____________。
（2）图中需要进行离体组织培养的过程是__________（用标号）。由棉株1获得单倍体苗的途径为：花粉通过诱导首先形成__________进而再分化为试管苗。植物组织培养的原理是每个细胞都具有__________的特点。在生物的生长发育过程中，由于细胞中____________，可分化为不同的组织和器官。

7 . 下列有关生态工程的说法，正确的是（       ）

A．生态工程是指人类应用生态学和系统学等学科的基本原理和方法，对已被破坏的生态环境进行修复、重建，从而提高生产力或改善生态环境

B．在湿地修复过程中，应选择污染物净化能力较强的多种水生植物，还需考虑这些植物各自的生态位差异，以及它们之间的种间关系，这遵循自生原理

C．在农村综合发展型生态工程中，可在玉米等作物还未成熟时就将果穗和秸秆一起收获，直接作为牛羊的青饲料，称为青贮

D．为加速恢复矿区生态环境，关键措施在于选择能在该环境生活的物种

8 . 某生物研究小组为了验证酵母菌在无氧或缺氧条件下才能产生酒精，他们依据“酒精具有还原性，可使酸性重铬酸钾变为灰绿色”的原理进行实验，装置如下图。分析回答：

(1)A装置中滴加石蜡油的目的是________________________。
(2)A、D装置中“注射器”的作用是______________________。
(3)实验10min后，从A、D两装置中各抽取2mL溶液，加入酸性重铬酸钾溶液后摇匀，均出现了灰绿色。甲、乙两同学对于D装置出现灰绿色提出了不同的解释：甲同学认为D装置也产生了酒精；乙同学认为是由于D装置中的葡萄糖未消耗完导致的。
①甲同学解释的依据是____________。
②乙同学解释的依据是__________，若设计实验判断此依据是否正确，其基本思路是 ______。
③若实验结果是由乙同学分析的原因导致，则实验操作应如何改进？___。
(4)在培养后期对培养液稀释100倍后，用血球计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm，25×16式）计数，显微观察时，甲同学在调焦清楚后，只看到血球计数板的横线而看不到竖线，此时应该_____________________________，后来统计其中的五个中方格共有酵母菌120个。同时兴趣小组的同学另取一定量培养液用台盼蓝对酵母菌进行染色，多次镜检获得结果如下：

	第一次	第二次	第三次
未染色酵母菌	20	17	23
蓝色酵母菌	4	3	5

则培养液中活酵母菌的密度为________个/毫升。

9 . 为探究CO₂浓度对植物光合作用速率的影响，研究人员以大豆、水稻、棉花作为实验材料，分别进行三种不同实验处理，甲组提供大气CO₂浓度（375µmol·mol^-l），乙组提供CO₂浓度为倍增环境（750µmol·mol^-l），丙组先在CO₂浓度倍增的环境中培养60d，测定前一周恢复为大气CO₂浓度，其他条件适宜。选择晴天上午测定各组的光合作用速率，结果如图所示。回答下列问题。

（1）CO₂浓度主要影响光合作用的_____阶段，该过程发生在叶肉细胞的_____（填部位）中。
（2）研究结果表明，在相同CO₂浓度条件下，不同作物的光合作用速率可能不同，根本原因是_____。若水稻和棉花在CO₂浓度为750µmol·mol^—1时光合作用速率相同，但它们的净光合作用速率可能不同，原因是_____。
（3）应用该研究结果，在大田种植作物时可采取_____措施（答一种即可）以提高作物的产量。
（4）丙组光合作用速率比甲组低，原因可能是作物长期处于高浓度CO₂环境会降低RuBP羧化酶（固定CO₂的酶）的活性。请在研究人员的实验基础上，再设计实验加以验证。
实验材料用具：水稻、一定浓度的C₅化合物溶液、饱和CO₂溶液、试管等。
实验思路：_____；
预测实验结果：若_____，则上述原因分析正确。

10 . 回答下列 （一）、（二）小题：
（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：
（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入一些雪“陈泡菜汁”，这相当于加入了一些经过___________的发酵菌种；还可以采取用热水短时间浸泡蔬菜的手段，此项措施能缩短发酵时间的原因是___________________________________________________。
（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由假丝酵母进行________________ 呼吸产生的。腌制过程需要控制时间、温度和食盐的用量。食盐过量会导致“咸而不酸”，原因是_____________。
（3）家庭制作泡菜过程并没有实行严格的无菌操作就能成功，请解释原因？_____________________________________ 。
（4）亚硝酸盐对人体有害，而它在泡菜的腌制过程中有先增后减的变化规律，所以需要测定其含量来确定泡菜的可食用时间，通常应用光电比色法进行亚硝酸盐的定量。泡菜样品处 理环节加硫酸锌是为了_____________________； 氢氧化钠用来________________；样品测定时加 60%乙酸创设了显色反应所需要的酸性环境；样品及亚硝酸盐标准溶液加显色剂后需要_____________________________25min， 使用相同光程的比色杯在 550nm 光波条件下测 OD 值。
（二）回答与基因工程和生物克隆有关的问题：
MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点分别是 GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC，如图 1、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切点。图 3 表示利用基因工程生产胰岛素的三种途径。图 4 表示改造哺乳动物遗传特性的三种途径。请据图回答问题。

   

（1）若要用如图 1 和图 23 中的质粒和外源 DNA 构建重组质粒，需要对质粒进行改造，构 建新的限制酶切位点。在构建新的限制酶切位点的过程中需要使用___________、DNA 连接酶和DNA 聚合酶等工具酶。
（2）图 3 4中的转基因羊通常被称为生物反应器，它基于基因工程技术，将外援基因导入其基因组并_______________，生产价格低廉的蛋白质药物，具有光明的发展前景。导入受体细胞B 常用方法是_________， ④过程也可以培养到______________，再从培养液中提取。导入受体细胞C 首先使用Ca²⁺处理使其吸收周围的 DNA 分子，之后将细胞 C 与图中 M 溶于_________中，完成转化过程。
（3）图 4 中获得动物 1 的受体细胞通常是___________。根据图示操作步骤推测动物 2 与动物 3 的不同在于____________________________________。
（4）干细胞科技发展至今，已进入以脐带、胎盘等组织为主要干细胞来源的全新时代。目前国内干细胞临床研究超过半数采用脐带或胎盘干细胞。利用胎盘干细胞具有发育全能性的特点，临床上可以用于_____________________，从而挽救患者的生命。