2 . 载脂蛋白E（APOE）是由APOE基因编码的一种经典的脂质结合蛋白，介导中枢神经系统和外周组织中的脂质转运。干细胞衰老是机体衰老的关键表征及驱动力。揭示APOE的人类干细胞衰老调控作用，有助于理解人类衰老及相关疾病的驱动机制，为上述过程的干预提供靶点及候选药物。
(1)为研究APOE的作用，研究人员需敲除APOE基因。
方法一：可使用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，它由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的______________________负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白切开________________键，对目的基因进行编辑，敲除APOE基因。
方法二：应用基因工程的原理，将新霉素抗性基因Neo基因插入APOE基因内部，利用同源重组技术制备了APOE基因敲除小鼠。
①插入Neo基因除了破坏APOE基因外，还具有的作用最可能是________________________。
②将APOE基因敲除细胞经克隆培养后，采用显微注射法将其导入正常小鼠的早期胚胎中，再移植到代孕小鼠体内可获得嵌合体APOE基因敲除小鼠。将嵌合体小鼠与野生型小鼠杂交后（假设子代足够多）不一定能获得基因敲除小鼠，原因是______________________________。
(2)研究表明，进入干细胞细胞核的APOE蛋白可作用于细胞核骨架（与细胞骨架系统相类似）和异染色质蛋白，诱导这些蛋白发生自噬性降解，影响异染色质上的基因的表达，促进该种干细胞的衰老。请根据以上信息，在图中添加箭头和文字说明完成模型构建_____________（APOE蛋白用■表示）。

4 . 珊瑚礁生态系统因其生物多样性被誉为“海洋中的热带雨林”，珊瑚礁主要由珊瑚虫的分泌物堆积而成，许多珊瑚虫聚合生长构成珊瑚。珊瑚虫内胚层细胞中生活着可进行光合作用的虫黄藻、自身产生的色蛋白等使得珊瑚呈现各种颜色。如图珊瑚礁中部分生物关系图。

   

(1)除了从共生的虫黄藻获取营养和能量外，珊瑚虫在有些情况下也会捕食海水中的浮游生物，据此判断珊瑚虫黄藻共生体在生态系统的组成成分中属于_________________。
(2)调查珊瑚礁中某种珊瑚虫的种群密度可采用_____________法。由于环境污染和全球变暖的影响，珊瑚礁逐渐减少，大量依赖珊瑚礁的海洋生物也将会因失去_____________逐渐消失，导致生物多样性下降。
(3)某海岛北侧是游客聚集地，水体浑浊度显著高于南侧。科研人员在该岛的南北两侧分别对两种优势造礁珊瑚（杯型珊瑚、滨珊瑚）采样，在相应水体环境下，检测它们体内虫黄藻的相关指标，结果如图所示。

   

由图可知，北侧两种珊瑚体内虫黄藻的光合速率相对值均比南侧低，最可能的原因__________________。
(4)进一步研究发现，岛屿南、北侧两种珊瑚体内的有机物总量并无明显差别，根据图中信息推测，在水体环境的胁迫下，杯型珊瑚维持体内有机物供应最可能的策略是______________________。
(5)环境的持续恶化会造成虫黄藻从珊瑚虫体内逃逸，引起珊瑚白化死亡。在发展海洋旅游的同时如何维持该岛珊瑚资源的可持续利用，请你提出两条合理建议_________________________。

6 . 防御素是一类富含二硫键的阳离子型多肽，广泛分布于真菌、植物与动物中，是生物免疫系统中的重要调节分子。β﹣防御素是一种由H基因编码的抗菌肽，获得了β﹣防御素。回答下列问题：
(1)为获得β﹣防御素基因，研究者利用致病细菌的脂多糖（LPS）刺激结肠癌细胞株提高β﹣防御素的表达量，经过________后，作为模板进行PCR扩增。PCR产物常采用_______来鉴定，鉴定后进行测序。测序结果与______数据库中的公开数据进行比较，进而得到正确的β﹣防御素基因。
(2)本实验选用毕赤酵母表达载体pPIC9K（如图），扩增目的基因时设计的1对引物为P1（5′ATCGAATTCATGGGAAGTCATAAACACATTAGA3′）和P2（5′TATAGCGGCCGCCTATTTCTTTCTTCGGCAGCAT3′）。

①本实验中引物的作用是__________（答出2点即可）；
②部分限制酶识别序列及切点如下表，结合图中限制酶切点与引物，推测本实验酶切时________，采用双酶切法的优势是_________（答出2点即可）。

限制酶	识别序列及酶切位点
BglⅠ	5′…A↓GATCT…3′
EcoRⅠ	5′…G↓AATTC…3′
SnaBⅠ	5′…TAC↓GTA…3′
SacⅠ	5′…GAGAT↓C…3′
AurⅠ	5′…C↓CTAGC…3′
SalⅠ	5′…G↓TCGAC…3′
NotⅠ	5′…GC↓GGCCGC…3′

(3)毕赤酵母表达系统最大的优点是可对β﹣防御素______（答出2点即可），直接表达出具有生物活性的产品。
(4)毕赤酵母表达系统发酵结束后，采取适当的______措施来获得产品。

7 . 高血压是常见的一种慢性病，下图为血压调节部分流程，肾素是一种蛋白水解酶，能催化血管紧张素原生成血管紧张素Ⅰ（AⅠ），继而在血管紧张素转化酶作用下生成血管紧张素Ⅱ（AⅡ）。   

(1)图示血压的调节方式是______，图中直接导致血管收缩的信号分子有______。在观看比赛时，人的血压往往会升高，此时图中的X神经最可能是______（填“交感神经”或“副交感神经”）。
(2)醛固酮分泌过多导致血容量升高的机理是______。
(3)卡托普利是一种降压药，为验证其降压效果并初步研究其作用机制，设计了以下实验，请将表格中①②③处的操作补充完整：

实验步骤	实验操作
分组	将60只小鼠均分为甲、乙、丙3组，其中甲组为血压正常 鼠，乙组为高血压模型鼠，丙组为①______。
初次测定	对3组小鼠称量体重，并测量3组小鼠的②______。
实验处理	对甲组和乙组小鼠按40mg/kg用生理盐水进行 灌胃处理，持续四周；对丙组小鼠的处理是③______。
再次测量	同初次测定的步骤

实验结果分析，血压：乙组>甲组≈丙组：AⅠ含量：丙组>乙组>甲组：AⅡ含量：乙组>甲组>丙组。
(4)上述实验结果说明卡托普利具有较好的降压效果，其作用机制可能是抑制______的活性，进而使AⅡ含量下降，导致醛固酮分泌量降低，使血容量下降，血管______，外周阻力减少，血压下降。

8 . 近些年来，国家高度重视对东北虎等濒危动物的保护，采取了一系列有效的措施，如全面禁猎，禁止商业性采伐林木，建立自然保护区等。请回答下列问题：
(1)我国为东北虎建立自然保护区月的是通过提高东北虎种群的______，以提高其种群数量，东北虎种群数量上升的直接原因是______。自然保护区内根据林木覆盖程度可分为郁闭林和开阔地两种主要地形，这种差异体现了群落的______结构。
(2)东北豹主要活动在高海拔和山脊区域，白天活动较多，东北虎主要活动在低海拔林间，夜间和晨昏时间段活动较多，说明东北虎和东北豹在时间和空间上出现了______的分化。两者之间在相互影响中不断进化和发展的现象，称为______。在食物链“植物→东北狍→东北虎”中，与东北虎相比，东北狍的同化量和摄入量的比值明显较低，从食物成分角度分析，最可能的原因是______。
(3)茂密的植物不仅可以为动物直接或间接提供食物，也可以为它们提供藏身之所。据下表分析，东北虎最适宜的生境是“针阔叶混交林”，相比于“灌丛和其它”，该生境的优点是______。

适宜度	生境类型	树种或植被类型
最适宜	针阔叶混交林	红松、樟子松、落叶松、云冷杉、椴树、白桦、枫林等
一般适宜	针叶林	红松、樟子松、落叶松、云冷杉等
不适宜	灌丛和其他	伐木迹地、矮树丛林、稀有林型、农田、放牧地等

(4)调查发现，东北虎的栖息地严重碎片化，这会导致______被阻断，造成种群退化甚至灭绝。结合以上信息，请提出一条进一步提高野生东北虎种群数量的措施______。

9 . 水貂毛色有深褐色、银蓝色、灰蓝色、白色，受三对基因控制，其机理如下图。请回答下列问题：

(1)P^s、P^r是由P基因突变而来，说明基因突变有______特点。P蛋白、P^s蛋白能运输真黑色素，P^r蛋白不能运输真黑色素，说明基因可通过控制______从而控制生物性状。
(2)研究人员利用3个纯系（其中品系3的基因型是HHttPP）亲本水貂进行杂交，F₁自由交配，结果如下：

①P、P^s、P^r基因的显隐性关系是______。
②实验一中，亲本品系1基因型是______。F₂出现上述表型和比例的细胞学基础是______；在F₂中选取两种表型（灰蓝色水貂与白色杂合水貂）的个体随机交配，子代中银蓝色水貂占______。
(3)根据以上实验结果无法确定三对基因的遗传是否遵循基因的自由组合定律。研究人员让实验二F₁自由交配，若后代的深褐色：银蓝色：白色=______，则说明这三对基因遵循基因的自由组合定律。若这三对基因确实遵循自由组合定律，则F₂深褐色水貂个体中，纯合子所占比例为______。

10 . 产脂肪酶酵母可用于处理含油废水，同时可获得蛋白质。有研究人员尝试从餐馆厨房污水排放沟取样，筛选产脂肪酶酵母菌株，初步流程如下图所示。据图回答下列问题：   

(1)Ⅰ号培养基中应选择______作为唯一的碳源。
(2)过程③的接种方式为______。要判断所制备的培养基是否具有筛选作用，同时还需将样本接种到牛肉膏和蛋白陈的完全培养基上，若______，说明具有筛选作用。
(3)酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母菌的絮凝能力，有助于发酵结束时细胞和产物的分离，可大幅节约生产成本。科研人员发现酵母菌的R基因对絮凝能力有一定的抑制作用，下图表示科研人员利用同源重组（在两个DNA分子的同源序列之间直接交换的一种重组）基因敲除技术敲除R基因的过程。   

①研究人员将整合了lox序列的庆大霉素抗性基因导入酵母菌，lox-庆大霉素抗性基因通过同源重组的方式整合到酵母菌基因组中，重组片段上庆大霉素抗性基因的作用是______。利用PCR技术检测1ox-庆大霉素抗性基因是否替换R基因，扩增时引物应选择下图中的______。在PCR延伸阶段中______催化脱氧核苷酸连接到引物上。   

②将导入PC质粒的酵母菌，接种于添加______的马铃薯琼脂培养基中，获得敲除R基因且无庆大霉素抗性基因标记的酵母菌。Cre酶与基因工程中______（工具酶）作用类似，上述过程中其发挥作用时需断裂______个磷酸二酯键。