1 . 阿尔卑斯山上不同海拔地带分布着不同的群落，在海拔2200m处的群落中车前草占据优势。
(1)研究人员发现，随着气候变暖导致阿尔卑斯山海拔2200m处的群落发生_____演替，导致车前草优势可能消失。
(2)为探究气候变暖条件下群落变化对车前草造成的可能影响，进行如下移植实验，如图1。

①样地内车前草的出现频率、种群密度、植株高度等特征，以及它与其它物种的关系等，称为这个物种的_____。研究人员采用样方法调查其种群密度，取样时要遵循_____原则。
②实验中，研究人员根据种群指数增长模型：N_t=N₀×λ^t，计算移植到不同海拔的车前草周期增长率（λ）的变化，实验结果如图2所示。当气候变暖1．65℃时，低海拔群落生物对车前草种群稳定有一定的积极影响，推测可能的原因_____。根据气候变暖4．85℃时的实验结果，可得出结论_____。
③有人认为步骤B应直接将车前草个体种植到对应海拔，请评价该方案是否可行并说明理由_____。
(3)研究人员预估车前草的灭绝时间，发现其灭绝时间滞后于气候变化的速度，这种现象称为“灭绝债务”。下列关于“灭绝债务”的叙述正确的是_____。

A．初始种群规模较大可能会导致灭绝债务的产生

B．栖息地破碎化和栖息地破坏会减少灭绝债务产生

C．长期的灭绝债务可能有利于栖息地的恢复，以防止物种灭绝

D．多年生灌木可长期在不适宜的气候条件存活，更易产生灭绝债务

E．污染可以通过降低种群生育率或增加死亡率，造成灭绝债务

2 . 学习下列材料，回答下面小题。
肿瘤免疫疗法近年在临床上取得了重大突破，但仍存在响应率低等显著缺点，需开发新的肿瘤免疫疗法以使更多肿瘤患者受益。胆固醇作为细胞膜脂质的重要组成成分，其代谢可以影响T细胞的细胞膜环境及效应功能。细胞膜上有一些富含特定鞘糖脂和胆固醇的微区被称为膜脂筏，许多蛋白质如受体、转运蛋白、通道蛋白等在膜脂筏处成簇定位。胆固醇是膜脂筏的主要成分之一、CD8⁺T细胞（一种细胞毒性T细胞）与靶细胞特异性结合后，在细胞膜的接触位置会发生一系列活化信号的级联反应，这种T细胞和靶细胞之间稳定连接的接触面被称为免疫突触。在免疫突触形成时，依赖胆固醇的参与，外周的膜脂筏成簇地向中心聚集，这种聚集与T细胞抗原受体（TCR）活化密切相关。通过细胞表面的TCR，CD8⁺T细胞可以识别肿瘤细胞表面的MHC并直接向肿瘤细胞定向分泌溶菌颗粒和细胞因子，杀死肿瘤细胞。溶菌颗粒是内含穿孔素和丝氨酸蛋白酶家族颗粒酶的分泌小泡。溶菌颗粒融合免疫突触的细胞膜并释放内容物。穿孔素在靶细胞的细胞膜上打孔，使得颗粒酶和其他细胞杀伤性成分可以进入靶细胞。颗粒酶进入靶细胞后可通过多种途径诱发靶细胞的凋亡。研究发现，细胞膜的流动性和膜脂筏的成簇聚集可增强免疫突触的信号传导。T细胞表面的受体和靶细胞表面的黏附分子结合，对免疫突触的稳定维持起重要作用。免疫突触的形成有利于CD8⁺T细胞定向杀伤靶细胞而不伤害周围细胞。酰基辅酶A是胆固醇基转移酶（Acat）以胆固醇和长链脂酰辅酶A作为底物，催化合成胆固醇酯，在非肝细胞内形成脂肪储存。哺乳动物细胞中共有2种Acat蛋白，有各自的功能和作用方式。在CD8⁺T细胞中，主要的胆固醇化酶是Acat1．研究人员敲除小鼠Acat1基因后，利用活细胞成像技术检测发现CD8⁺T细胞成熟的免疫突触形成更高效，TCR信号通路活化增强，为肿瘤免疫治疗提供新思路和新方法。
(1)机体对癌症的预防体现了免疫_____功能，细胞癌变的实质是_____基因的突变。
(2)CD8⁺T细胞活化后，细胞内胆固醇代谢发生重调，细胞膜的游离胆固醇水平出现显著_____。
(3)Acat1基因敲除后，研究人员利用荧光成像检测该鼠CD8⁺T细胞中TCR聚集形成的微团直径，结果如图。实验结果说明：Acat1基因_____。

(4)在患黑色素瘤的模型小鼠中，发现敲除Acat1基因的小鼠肿瘤体积更小，生存时间更长。为验证这种肿瘤抑制效果的确是通过CD8⁺T细胞发挥作用的，请简要写出实验思路并预期实验结果_____。
(5)结合文中内容，阐明Acat1基因缺失的CD8⁺T细胞抗肿瘤免疫反应增强的分子机制_____。

3 . 婴儿啼哭时，母亲分泌乳汁，并对其安抚。为研究母亲响应幼崽呼唤行为的机制，科学家进行了一系列实验。
(1)催产素（OT）是在下丘脑神经元细胞（PVN）内合成，由垂体释放的一种多肽类激素，与靶细胞的____结合，促进排乳。
(2)为研究幼鼠叫声对母鼠PVN神经元的影响，通过光纤记录不同时期母鼠的PVN神经元活动数据，如图1所示。结果表明：____。

(3)丘脑的后内侧核团区域（PIL）介导了母鼠对声音的无意识感知。为研究PVN催产素神经元的神经回路（神经元与神经元通过突触建立联系的通路），利用以下实验材料逆行追踪。
野生型小鼠
RV：是能逆行跨越突触传播的一种病毒；RV-G－：缺失囊膜糖蛋白（G）的RV，丧失跨越突触的能力，但能与外源G蛋白组装成正常功能的RV。
红色荧光蛋白基因（RFP）、绿色荧光蛋白基因（GFP）：可与载体连接，在相应的激光照射下，发出红色或绿色荧光
G蛋白基因的表达载体
①请完成实验组的过程：
a.____基因连接到G蛋白基因表达载体，转入小鼠PVN神经元细胞；
b.____，转入同一小鼠的PVN神经元细胞；
c.激光激发，分别观察PVN与PIL神经元的荧光情况。
②研究发现：丘脑区域的PIL通过突触将信息传递给PVN，与之对应的实验组结果是____。
(4)科研人员进一步推测PIL神经元兴奋会诱导PVN合成OT，为验证推测，构建OCA小鼠，过程如图2：

注：x表示杂交；→表示转录方向；P是催产素基因的启动子；Cre重组酶能特异性识别Loxp序列，不可逆敲除两个Loxp序列之间的DNA片段；STOP基因表达后抑制下游基因转录
①科研人员在OCA小鼠PIL神经元中转入光敏感通道蛋白ChR2基因的表达载体，蓝光照射，ChR2蛋白空间结构改变，引起阳离子内流，PIL神经元电位变化是____。
②若推测正确，OCA小鼠的PVN神经元细胞____。
③有人认为直接构建OT基因-红色荧光报告基因的表达载体，转入野生型小鼠，无需构建OCA小鼠，OCA小鼠与之相比的优点是____。

4 . 非酒精性脂肪肝肝炎（NASH）是由脂肪过度积累引起的代谢疾病，实验人员进行了一系列实验，探究T细胞对NASH肝损伤的影响。
(1)NASH病情发展可导致肝癌发生，肝癌的发生与免疫____功能失调有关。
(2)Tcr是T细胞受体，与T细胞的识别、免疫应答功能有关。研究人员在野生型小鼠（WT）体内敲除Tcr基因，构建Tcr^-/-小鼠，分别用高脂饮食（HFD）饲喂WT和Tcr^-/-小鼠6个月后，肝组织染色切片结果如图1，实验说明：高脂饮食诱导NASH小鼠模型成功，且NASH的发生与T细胞有关，依据是____。
   
注：ND饲喂正常饮食6个月；HFD饲喂高脂饮食6个月；WT是野生型小鼠；Tcr^-/-是T细胞受体缺失小鼠
(3)炎症反应会导致细胞因子IL分泌增多。CD122是T细胞表面的受体分子，能与IL结合，向胞内传递信号。研究发现NASH患者和NASH模型小鼠肝脏内高表达CX蛋白的T细胞（CX+T细胞）显著增多，据图2阐述该现象的原因____。
   
注：Foxol是T细胞内转录因子，可调控基因表达；“+”表示进行处理，“－”表示未进行处理
(4)NASH小鼠的脂肪肝代谢会产生高浓度的乙酸分子，研究人员推测乙酸能诱导CX+T细胞攻击肝脏组织，引起NASH小鼠的肝损伤。为验证该假设，进行了实验，实验主要流程见下图，统计肝细胞死亡数量。
   
①Ⅰ-Ⅱ处理所需的实验材料应分别选用____。（填选项前字母）
A.IL     B.生理盐水     C.乙酸     D.CX蛋白
②若____，则证明假设是正确的。

5 . 陆地棉是四倍体。其棉花纤维分为长绒和短绒两类，短绒长度短，无法用于纺织工业。科研 工作者进行了一系列实验，培育有长绒无短绒的棉花品种。
(1)野生型棉花有长绒有短绒，育种者发现无长绒无短绒的突变体U。利用突变体U进行了下列实验：

推测控制长绒与短绒的基因位置关系为____。
(2)G基因参与调控长绒与短绒的分化，G₁基因与G₂基因表达的G蛋白相同。研究者在野生型中用基因编辑技术，获得了突变体C。检测野生型和突变体C的长绒与短绒表型，见下表。

	长绒	短绒
突变体C（g1g1G2G2）	+	-
野生型（G1G1G2G2）	+	+

注：“+”表示有，“-”表示没有。
据表推测，长绒与短绒的分化与G基因____有关。____分化要求的G蛋白浓度较高。
(3)H是棉花纤维起始分化的相关基因。G蛋白是转录因子，能与H基因的启动子结合，并促进H转录。
①进一步测定突变体U的核苷酸序列，发现G₁基因发生了碱基____，突变为g基因，翻译的赖氨酸变为甲硫氨酸。
②为研究棉花植株U中突变的G蛋白对正常G蛋白的作用，获取突变体U的g基因序列，构建多种表达载体，转入烟草原生质体中，检测荧光素酶（LUC）活性，填写下列表格。

注：H启动子为H基因的启动子

组别	表达载体类型	实验结果
甲组	①②
乙组	____
丙组	①④

乙组荧光素酶活性比甲组显著降低，推测原因是____。
(4)综合（1）-（3）的信息，从基因控制性状和分子水平，解释LL和LM表型不同的原因____。

6 . 分泌型短肽C是一种新型植物激素，研究者进行一系列实验，探究C对叶片衰老的影响和机制。
(1)C是植物特定部位产生的，对植物生长发育有显著调节作用的____有机物。
(2)研究者检测拟南芥叶片不同发育阶段的C基因表达量，如图1所示，结果说明，分泌型短肽C参与调控叶片衰老，依据是____。

(3)已发现转录因子J参与调控衰老。研究者分别用外源C处理野生型拟南芥（WT）和J缺失突变体（J^-）6天，检测叶绿素含量-叶片衰老标志，如图2所示，结果说明C和J均能够____叶片衰老，且____通过____发挥作用。

(4)过氧化氢的积累会促进细胞衰老，CAT蛋白能清除过氧化氢，抑制衰老。研究者进行实验，结果如图3，请结合（3）信息，阐述C调控拟南芥叶片衰老的机制____。

7 . 将目的基因转入细菌内表达制备工程菌，生产人们所需的目的蛋白，常应用于治疗代谢类疾病如糖尿病等。
(1)当血浆葡萄糖浓度升高时，胰高血糖素样肽（GLP）与胰岛B细胞上的特异性受体结合，促进胰岛素通过____方式分泌，促进降糖。
(2)为制备降血糖的工程菌，用____处理乳酸菌中的载体（有红霉素抗性基因）与GLP基因片段，构建重组质粒，转入乳酸菌中，筛选获取工程菌L。
(3)培养工程菌L的培养基包含蛋白胨、牛肉粉、水、葡萄糖等成分，其中蛋白胨主要为L提供____和维生素等，严格无菌操作下，工程菌L在37℃培养24h后，其培养基变浑浊，说明____。
(4)重组质粒在传代过程中会丢失，因此对L菌进行重组质粒遗传稳定性的评价，过程如图所示，在固体平板a、b上点种m个，分别长出菌落数是n、n′个，重组质粒的稳定遗传率=____×100%（用字母表示）

8 . 竞争决定群落中哪些物种可以实现共存，优势竞争者可以利用较低资源生存。在同一群落中，物种A和B的空间资源和食物资源相似，下图为A和B在群落中生存所需的资源及种群增长情况，当资源低于A、B的生存所需资源时，种群面临灭绝。有关说法错误的是（　　）
   
注：K_A为A种群的环境容纳量，K_B为B种群的环境容纳量

A．物种A和B的生态位重叠，是竞争关系

B．物种B生存所需资源更低，是优势竞争者

C．物种A和B竞争的结果是在群落中共存

D．B种群密度达到KB时，资源降低到A生存所需以下

9 . 学习以下材料，回答（1）-（5）问题。
中心法则中的RNA通常指的是能够编码蛋白质的mRNA，但细胞中有许多不编码蛋白质的RNA-非编码RNA，但对细胞生命活动有调控作用。微小RNA（miRNA）是一种真核细胞中广泛存在的短链非编码RNA，长度为17~25个核苷酸。miRNA通常与mRNA的3'端非编码区结合，抑制依赖该mRNA的蛋白质翻译或促进靶标mRNA的降解，从而在转录后水平上调控基因的表达。当人体内某些miRNA功能失调时，疾病就可能发生。

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤。已发现去乙酰化酶（SIRT）在前列腺癌的发生发展过程中有重要作用。研究推测在前列腺癌细胞CW中miRNA对SIRT基因有转录后调控作用。研究者利用数据库对SIRT基因3'端非编码区进行分析，发现19个可能的miRNA作用的靶标位点（如图1A），依据这些靶标位点的分布构建了4个截断片段（如图1B）。分别将这4个截断片段连接到P载体-荧光素酶基因F下游处，构建重组载体，并分别转入到CW细胞中，检测F的蛋白表达水平。结果如图2。

免疫原性是指能够刺激机体，使免疫细胞活化、增殖、分化而产生特异性抗体。由于miRNA分子无免疫原性，被认为是具有临床治疗应用前景的分子，但miRNA分子递送效率低，限制了其疗效。结合新型靶向基因递送系统可为前列腺癌的基因靶向治疗提供新型手段和药物来源。为研发靶向治疗肿瘤的RNA疫苗提供广阔的应用前景。
(1)miRNA与mRNA的3'端非编码区通过____原则互补结合，从而在转录后水平上调控基因的表达。
(2)P载体上有荧光素酶基因F，将SIRT基因3'端非编码区域片段连接到P载体的F下游，获得重组载体P-F-SIRT，转入CW细胞中，检测荧光素酶F的mRNA水平及蛋白质水平，如图3所示。实验发现：SIRT3'端非编码区域存在转录后调控区域，依据是____。

(3)结合图1和图2分析，SIRT基因3'端非编码____片段可能是miRNA靶位点，原因是____。
(4)结合全文的信息，下列说法正确的有____。

A．miRNA结构稳定性差，易降解

B．miRNA编码蛋白引起细胞免疫排斥

C．可调控miR-34a或miR124靶向治疗前列腺癌

D．miRNA可用脂质载体递送到细胞内

(5)你认为本文介绍的miRNA调控转录是否属于表观遗传学？请陈述原因____。

10 . 大肠杆菌能进入实体瘤核心并保持较强活性，科研人员期望利用大肠杆菌构建一种基因表达可控的工程菌，期望用于人体特定部位实体瘤的免疫治疗。
(1)科研人员利用温度敏感型转录调控蛋白构建温控表达的质粒系统，如下图。

   

①利用来自λ噬菌体的温度敏感型转录抑制因子Tcl42作为“开关”构建温控抑制元件，在_____（选填“λ噬菌体”、“大肠杆菌”或“人”）中具强活性的启动子pLac可以使Tcl42持续性表达，抑制启动子pRL；当控温至42℃时才开启特定基因的表达。
②Tcl42开关仅在加热时瞬时激活特定基因，而免疫疗法需要数周才能见效，所以设计了“基因电路”——一次短暂的温度激活后可维持长期的基因表达。其核心基因包括重组酶Bxb1基因、分泌型αPD-L1蛋白基因（该蛋白可用免疫治疗）等。
请选择相关选项完善该“基因电路”的技术路线：_____及质粒，获基因电路 → 受体菌37℃时，蛋白Tcl42抑制启动子pRL →_____→ 免疫元件无功能（不表达αPD-L1） →_____→ 解除蛋白Tcl42对启动子pRL的抑制→_____→_____→细菌合成GFP，并分泌大量αPD-L1。
A、重组酶Bxb1基因不表达          B、菌体升温至42℃时
C、用不同的限制酶、DNA连接酶分别处理温控抑制元件、重组元件、免疫元件
D、启动子p7启动荧光蛋白GFP基因、αPD-L1基因的转录
E、重组酶Bxb1基因表达，进而引起启动子p7两侧发生重组
(2)科研人员用_____处理大肠杆菌，使其处于感受态，从而将“基因电路”质粒导入菌体内，经过培养、涂布后，筛选_____（选项），由此成功构建用于免疫治疗的温控工程菌（EcT）。
A、含有四环素的培养基上形成的菌落             B、具有绿色荧光的菌落
C、同时具有A和B特征的菌落                      D、具有A或B特征的菌落均可
(3)使用聚焦超声（FUS）装置，可以使动物特定范围的组织快速升温至42℃，从而实现体内微生物治疗的温度控制。为验证上述温控工程菌的治疗肿瘤效果，选取若干组生理状态相近的小鼠，经过7天的成瘤建模后，分别进行如下处理，并检测记录小鼠体内肿瘤体积。
第1组：注射生理盐水，2天后FUS处理；
第2组：注射温控工程菌，2天后FUS处理。请评价并完善实验方案_____。
最终证明温控工程菌可被FUS处理局部激活，并具有持续性肿瘤免疫治疗效果。
(4)若期望将上述温控工程菌用于临床实验，还需利用小鼠开展_____方面的研究。