1 . 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_______________和____________________。
(3)通常情况下，无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免_____________。

2 . 下列叙述正确的是（       ）

A．培养基中都只含有碳源、氮源、水三种成分

B．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

C．固体培养基中加入少量自来水即可制成液体培养基

D．微生物在固体培养基表面生长，形成肉眼可见的多种菌落是由单个细菌繁殖而来的

3 . 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供微生物生长繁殖的营养基质。下列关于培养基的说法，正确的是（       ）

A．所有的微生物在培养时都必须添加氮源

B．液体培养基含有水，而固体培养基不含水

C．培养基中的碳源可能同时也是氮源

D．培养霉菌时需要将培养基的pH调至碱性

4 . 进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（       ）

组分	KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂糖	H2O
含量	1.4g	2.1 g	0.2 g	10.0 g	1.0 g	15.0 g	定容1000mL

A．KH2PO4和Na2HPO4既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pH

B．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用

C．琼脂糖一般不可以为尿素分解菌提供碳源，只起到凝固剂的作用

D．蒸馏水既可用于定容，又可用于稀释培养液

5 . 某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：

(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用________的方法进行灭菌。甲为________培养基，乙培养基中的Y物质是_____。
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_______倍。
(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_______。
(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，先取淤泥加入无菌水，然后进行梯度稀释，将不同稀释浓度的培养液分别用_______法，接种到乙培养基上，进行培养与观察，计数。

6 . Gateway克隆技术是一种快速，高效地构建基因表达载体的方法。这种方法基于，噬菌体可以和大肠杆菌DNA的特定位点发生互换的特点设计，不用依赖限制酶，而靠载体上存在的特定重组位点和克隆酶，将目的基因克隆到其它的受体载体上。如图所示，Gateway克隆技术依赖于BP反应和LR反应，通过BP反应将目的基因连接到质粒1上，获得克隆质粒2，再通过LR反应将目的基因连接到载体质粒3上，获得表达载体。请回答下列问题：

(1)构建的基因表达载体除含有图示的目的基因和标记基因外，还必须有___________。
(2)为构建基因表达载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增目的基因，用于扩增目的基因的引物需满足的条件是___________，为使PCR产物能参与后续交换，需要分别在2种引物上添加相应的attB1和attB2序列，该序列应添加在引物的___________（填3′端”或5′端”）。
(3)BP反应中，将带有atB1和attB2序列的目的基因与质粒1混合，加入BP克隆酶，atB和attP位点之间会发生互换。该反应体系中可能含有未交换的质粒1和交换后的质粒2，为从体系中筛选出质粒2，用混合体系中的质粒分别转化用Ca²⁺处理后的大肠杆菌，并涂布到含有青霉素的平板上。理论上，在平板上长出菌落的大肠杆菌中含有的质粒即为质粒2，理由是___________。
(4)除本题所用接种方法外，也可以采用___________法进行接种，若培养结果如图所示，接种环节需灼烧接种环___________次。

(5)若将（3）中获得的含质粒2的大肠杆菌进行扩大培养，从物理性质考虑，一般采用___________培养基。

7 . 土壤被称为“微生物的天然培养基”。科学工作者要从土壤中分离或鉴定需要的微生物，需要配制选择培养基，再通过接种、培养、纯化、筛选等技术获得微生物。下列关于培养基对微生物的分离或鉴定的叙述，错误的是（       ）

A．从土壤中分离出酵母菌和霉菌，需要配制含青霉素的培养基，在灭菌后将培养基调至酸性

B．从土壤中分离出纤维素的分解菌，需要配制含纤维素为唯一碳源的培养基且加刚果红

C．以尿素为唯一氮源的培养基，采用稀释涂布平板法可分离出分解尿素的分解菌

D．从土壤中分离固氮微生物需要配制不含氮源的培养基，且培养条件要适宜

8 . 根瘤菌能与豆科植物共生形成根瘤，将空气中的氮气还原成氨供给植物营养。科研人员进行了土壤中根瘤菌的分离和纯化培养，实验流程如图所示。下列说法正确的是（　　）

A．步骤①土壤样品的获取过程既要遵循无菌操作原则又要进行高压蒸汽灭菌

B．步骤④选择的纯化培养基的营养成分应该包括各种营养物质

C．根据步骤④培养基上的菌落特征可判断土壤中含有不同固氮能力的根瘤菌

D．若步骤④平板上统计根瘤菌菌落数平均为150个，则每克土壤含根瘤菌约1．5×108个

9 . 植物组织培养、动物细胞培养、微生物的实验室培养都需要配制培养基，根据需要有时需要加入一定量的琼脂以制成固体培养基。下列实践中使用的是固体培养基的是（       ）

A．优良酿酒酵母的筛选与培养	B．杂交瘤细胞的体外扩大培养
C．肺炎链球菌的体外转化	D．将转基因植物细胞培养成试管苗

10 . 阿特拉津是一种广泛使用的除草剂（含氮有机物），在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被阿特拉津污染的土壤，某研究小组按下图所示步骤选育能降解阿特拉津的细菌（已知阿特拉津在水中溶解度低，含一定量阿特拉津的培养基不透明）。下列相关叙述错误的是（       ）

A．从用途方面来看，该实验所用培养基为含有阿特拉津的选择培养基

B．连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面

C．无透明圈的菌落利用的氮源主要是含氮有机物

D．菌落直径与透明圈直径的比值越小越是理想的菌株