1 . 研究者从温泉中筛选出高效产生耐高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示。将得到的菌悬液转接到同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法正确的是（　　）   

A．透明圈的直径与菌落直径的比值越大，说明该微生物分解淀粉的能力越弱

B．图2培养皿要放在高温条件下培养，周围不显蓝色的菌落含有所需要的嗜热菌

C．①②合称为稀释涂布平板法，实验使用的培养基采用干热灭菌，培养皿采用高压蒸汽灭菌

D．甲、乙试管为液体培养基，液体培养基能分离获得水生嗜热杆菌单菌落

2 . t-PA蛋白是心梗和脑血栓的急救药。为心梗患者注射大剂量的t-PA蛋白会诱发颅内出血。将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。图1是通过两次PCR操作，进行定点突变获取t-PA改良基因和利用质粒pCLY11构建含t-PA改良基因的重组质粒，然后导入大肠杆菌生产改良的t-PA蛋白示意图。

(1)第二次 PCR 过程中至少需要_____次循环才能获得双链等长t-PA改良基因。若改良t-PA基因的转录模板链为图中的α链，则第二次 PCR 操作中的引物3、引物4分别是_____。（填字母）
A．5'-CGCGAAAGAGACGGTTCA-3'（下划线为突变碱基）
B．5'-ACCCGGGCGACATCGTA-3'
C．5'-GTAGATCTGGCCTCGAGTA-3'
D．大引物的①链
E．大引物的②链
(2)培养大肠杆菌的培养基从作用上分类，属于_____培养基；该培养基的基本营养成分包括水、无机盐、_____。
(3)改良的t-PA基因约有1600个碱基对。提取大肠杆菌的DNA，依据改良t-PA基因的序列设计引物，进行PCR扩增。结果如图2所示：

加样孔位于_____（填“甲”或“乙”）端。泳道1条带中的PCR产物_____（填“一定”“不一定”或“不”）是改良的t-PA基因，理由是_____。

3 . 田间常施用的草铵膦（含碳有机物）农药，在环境中难以降解。科学家通过图1所示方法筛选出了可降解草铵膦的植物乳杆菌（ST-3），并研究了固定态（固定在多孔载体上）和培养液中游离态的ST-3的降解效果，结果如图2所示。下列相关叙述错误的有（　　）

A．图1中②过程可使用无菌水，③④⑤过程应用以草铵膦为唯一碳源的培养基

B．图1中配制好的培养基可放入干热灭菌箱内进行灭菌处理

C．由图2可知，固定态ST-3对土壤中草铵膦的降解效果优于游离态ST-3

D．固定态ST-3降解率高可能是因为载体避免ST-3直接接触高浓度草铵膦

4 . 大豆是我国重要的经济作物之一，土壤盐渍化已经成为影响大豆产量的主要非生物胁迫因素之一，野大豆是栽培大豆的近缘野生种，具有抗盐碱、抗病、抗虫、耐旱等较强的抗逆性和环境适应性，因此具有很高的研究价值。科学家从滨海盐渍土野大豆根瘤菌分离筛选根瘤菌DL3，对野大豆和大豆均具有促生作用，从而为发展盐土农业和实现大豆等作物在盐碱地的种植贡献力量。下图是主要流程，请回答：

①1g根瘤消毒②加入无菌水研磨成匀浆3mL③梯度稀释④涂布平板⑤纯化培养⑥耐盐根瘤菌株的复筛
酵母甘露醇琼脂（YMA）（g/L）：酵母提取物20.0，甘露醇5.0，K₂HPO₄5.0，MgO₄0.5，NaC10.186，CaCO₃1.2，琼脂20.0，pH值6.8~7.2。
阿须贝氏（Ashby）培养基（g/L）：KH₂PO₄0.2，MgO₄0.2，NaC10.2，CaCO₃5.0，甘露醇10.0、CaCO₃5.0、琼脂18.0、pH值6.8~7.0。
(1)按功能分Ashby培养基属于___________，该培养基中能为复筛的根瘤菌提供___________等营养物质。___________改良的Ashby培养基中NaCl浓度提高到7%
(2)过程④吸取上清液0.1mL涂布于YMA初筛培养基平板上，如果培养后平均长出了40个菌落，则该样本中每克根瘤约含根瘤菌_________个。用过程④这种方法测定的根瘤菌数量往往会比实际活菌数目要少，这是因为_______________。
(3)YMA培养基能够筛选根瘤菌的原理是____________。

5 . 培养基是指供给微生物、植物或动物细胞（或组织）生长繁殖的，由不同物质组合配制而成的营养基质。针对下表中的三组培养基，下列叙述错误的是（       ）

组别	培养基成分
a	马铃薯、葡萄糖、琼脂、水
b	葡萄糖、尿素、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖
c	矿质元素、蔗糖、维生素、甘氨酸、水、琼脂

A．a组培养基可用于酵母菌的培养，该培养过程需用恒温培养箱

B．b组培养基可用于分离含脲酶的微生物

C．c组培养基可用于诱导植物愈伤组织再分化

D．上述培养基不仅要为相应的细胞提供营养物质还要为其生存和繁殖提供适宜的环境

6 . 限量补充培养法可用于营养缺陷型菌株的检出（如图）。将诱变后的菌株接种在基本培养基上，野生型菌株迅速形成较大菌落，营养缺陷型菌株生长缓慢，不出现菌落或形成微小菌落。基本培养基中补充精氨酸后，营养缺陷型菌株快速生长。下列叙述正确的是（　　）

A．用紫外线照射可诱导野生型菌株发生定向突变

B．精氨酸缺陷型菌株缺乏吸收利用精氨酸的能力

C．培养基中添加精氨酸后抑制了野生型菌株生长

D．挑取图乙中菌落②分离精氨酸营养缺陷型菌株

7 . 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_______________和____________________。
(3)通常情况下，无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免_____________。

8 . 下列叙述正确的是（       ）

A．培养基中都只含有碳源、氮源、水三种成分

B．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

C．固体培养基中加入少量自来水即可制成液体培养基

D．微生物在固体培养基表面生长，形成肉眼可见的多种菌落是由单个细菌繁殖而来的

9 . 发酵型青梅果醋的生产主要采用碱中和青梅汁之后再进行酒精发酵、醋酸发酵的方法，然而这种生产工艺会损失青梅的功能性成分。因此，筛选能够耐受青梅高酸环境的醋酸菌是提高发酵青梅果醋品质的关键（已知醋酸能与培养基中的碳酸钙反应生成能溶于水的醋酸钙）。请回答以下问题。
(1)食醋生产的三个主要的过程：一是原料中淀粉的分解，即糖化作用（水解）；二是酒精发酵，即___（填微生物名称）将糖转化成乙醇；三是醋酸发酵，即醋酸菌将乙醇转化成乙酸，该微生物的代谢类型是___。
(2)①菌种筛选及发酵生产涉及三种培养基：

培养基A	葡萄糖、酵母粉、无水碳酸钙、琼脂、3%乙醇
培养基B	葡萄糖、酵母粉、3%乙醇
培养基C	葡萄糖、酵母粉、6%乙醇

具体流程为：取腐烂一周的青梅若干，加入装有培养基B的摇瓶中培养一段时间，经梯度稀释后，接种于培养基A上，选取___且生长良好的单菌落10株。将上述初筛的10株醋酸菌接种于培养基C中，结果如图1。研究者选择菌株J-27作为后续实验菌株，原因是___。

②研究人员对J-27进行诱变处理，选取突变菌株J-2736，与两种商业化的醋酸菌—沪酿1.01、AS1.41分别接种于青梅果酒中进行青梅果醋发酵，结果如图2。

沪酿1.01和AS1.41发酵结束时青梅果醋发酵液中总酸含量为15g·L^-1左右，而两者应用于粮食醋发酵时，发酵液总酸含量一般可以达到50g·L^-1左右。推测原因可能是___。
③图2结果说明在青梅果醋发酵过程中，菌株J-2736发酵性能优于沪酿1.01和AS1.41。研究人员继续对J-2736的发酵条件进行了研究，发现初始乙醇含量可能对青梅果醋发酵具有一定影响，实验结果如图3。

由结果表明初始乙醇含量较低时，总酸含量也较低；初始乙醇含量过高时，总酸含量更低，试分析造成这种现象的原因：___。
(3)乙醇脱氢酶（ADH）催化乙醇生成乙醛是醋酸发酵的第一阶段，乙醛脱氢酶（ALDH）催化乙醛生成乙酸是醋酸发酵的第二阶段。某同学从J-27的突变体菌株中分别提取ADH和ALDH，分别用高浓度的乙醇处理后测酶活性，由此可根据___进一步筛选出耐乙醇醋酸高产菌株。

10 . 为了培育高效利用木糖发酵产乳酸的菌株，科研人员将能利用木糖产乳酸的菌种搭载于中国“实践八号”育种卫星，卫星返回后进行筛选，其主要流程如图所示，其中乳酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。下列叙述错误的是（　　）

   

A．步骤②进行富集培养的目的是增加产乳酸的菌株的数目

B．与步骤②相比，步骤③的培养基成分还包括琼脂、碳酸钙

C．步骤③倒平板浇注时，培养基的温度应该控制在65℃以上

D．从培养基的功能角度分析，步骤③的培养基属于选择培养基