1 . 酱油起源于我国，迄今已有3000多年的历史。由于风味独特、营养价值丰富，酱油已成为我国饮食中不可或缺的调味品。制作时用大豆、小麦或麸皮为原料，利用多种微生物发酵而成。酱油发酵的大致过程如下图所示。下列相关叙述错误的是（       ）

A．不同类型的酱油独特的风味都是因发酵产生的多种代谢产物而形成的

B．接种冷冻保存的酵母菌前要对其进行扩大培养

C．在加入酵母菌或乳酸菌前，需要对第一阶段的发酵产物进行灭菌处理

D．酵母菌、乳酸菌的发酵产物以及食盐均能起到抑制杂菌的作用

2 . 下图是实验室培养某种微生物得到的结果。下列叙述正确的是（       ）

A．该图最可能是用稀释涂布平板法进行接种的

B．该培养基上的菌落分布不均匀，说明纯培养失败

C．该种微生物有可能是T₂噬菌体

D．该培养基必须经高压灭菌锅灭菌后才能倒掉

3 . 酿酒酵母被称为啤酒酵母，最早人们利用它进行啤酒和面包的工业化生产，后来人们从葡萄酒中分离培养出不同的菌株，进一步将其分为果酒用酵母、啤酒用酵母等不同类别。酿酒酵母的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酿酒酵母菌株，进行了下图实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，灭菌条件相同。

(1)制备培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，及时对培养基进行分装，并进行______灭菌。
(2)图一中所用的分离产酒精能力强的酿酒酵母菌株的方法是_______。
(3)通过计算得出葡萄酒过滤液每L的活菌数为______个，用这种方法统计的结果往往较实际值______，原因是_____。
(4)图二中丙瓶出现的现象是_______，原因是_______。
(5)图二中乙瓶和丁瓶哪一瓶中的酿酒酵母产酒精能力强？_______。原因是______。

4 . RecQ4解旋酶基因缺陷会引起人患有某种遗传病。该病还存在另外一种类型的患者，这类患者体内的RecQ4解旋酶基因正常，其体内的某种抗体可与RecQ4解旋酶结合，使RecQ4解旋酶失去活性，从而患病。现有小鼠若干，利用单克隆抗体技术获得大量抗RecQ4解旋酶抗体（mAb），用于临床治疗，制备过程如下图。完成下面小题。

   

1．关于利用杂交瘤技术制备抗RecQ4解旋酶抗体的过程，相关叙述错误的是（       ）

A．需从注射特定抗原（RecQ4解旋酶）的实验动物脾脏中获取B淋巴细胞

B．细胞融合需要无菌无毒环境，需放在有CO2的环境中

C．若仅考虑细胞的两两融合，则试管甲中存在的融合细胞有3种

D．细胞筛选不需要使用显微镜辨识获得杂交瘤细胞

2．要获得纯净杂交瘤细胞培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，并保证培养条件的无菌、无毒。下列操作的中正确的是（       ）

A．在工作结束后，使用过的器皿、废弃物等应该直接倾倒洗涤。

B．若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，使用70%乙醇擦拭干净继续使用

C．为使动物细胞的培养液与仪器无菌，就采用121℃，15-20min的高压蒸汽灭菌法灭菌

D．为防止细胞代谢产生有毒有害物质，应定期更换培养液

5 . 堆肥是指利用自然界广泛存在的微生物，促进固体废物中可降解有机物转化为稳定腐殖质的生物化学过程。下图一为堆肥处理时材料内部温度的变化曲线，下图二是研究者从养鸡场废弃物堆肥中筛选出某种能高效降解羽毛中角蛋白的嗜热细菌的实验过程。回答下列问题：

(1)据图一分析，与 a点相比 b点时微生物的数量较_____,与c点相比 b点时微生物种类较_____。
(2)图二中①所使用的培养基是以_____为唯一氮源的液体培养基，培养的温度应该设置在_____℃以上。
(3)与①相比，②使用的培养基成分上的不同之处是_____。检测②过程使用的培养基灭菌是否合格的方法是_____。
(4)研究人员在重复实验时，发现涂布的一个平板上出现了菌落连成一片的现象，请分析产生该现象的可能原因是_____（答出2点）。

6 . 根据食品安全国家标准（GB19645-2010）规定，每毫升合格的牛奶中细菌总数不超过50000个。某兴趣小组利用恒温水浴锅对新鲜牛奶进行消毒后，进行细菌总数测定，主要步骤如下图所示。相关叙述错误的是（       ）

   

A．步骤①中用巴氏消毒法对新鲜牛奶进行消毒，可以减少营养物质的损失

B．步骤②对牛奶进行梯度稀释可使聚集的微生物分散，便于在培养基表面形成单菌落

C．实验结束时培养基上的菌落可能不止一种，若平均菌落数少于500个则表明消毒合格

D．步骤③中，不可用平板划线法对菌落进行计数

7 . 为保障公共健康，需要定期对公共饮用水进行卫生检测。已知居于大肠中的各种细菌统称为大肠菌群，大肠菌群中的杆菌称为肠杆菌，大肠杆菌是肠杆菌中的一种。一般用大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌，饮用水的卫生标准是100mL不得检出大肠菌群。若要确定饮用水是否合格，可采用膜过滤法检测饮用水中的大肠菌群，过程如下图所示：

(1)检测前需要进行灭菌处理的材料用具有_____（填编号）；它们均可以采用______法灭菌。
①水样收集瓶          ②滤膜            ③培养基        ④镊子        ⑤水样
(2)完成过滤后需将滤膜的_________（A面/B面）接触配置好的培养基。
(3)培养基在37℃下培养20~22小时后进行观察。若________，则此水不符合饮用水标准。
(4)KONFIRM培养基可以检测肠杆菌中大肠杆菌的存在。KONFIRM中含有ONPG和MUG可作碳源，色氨酸可作为氮源。在检测大肠菌群时，检测指标如下表所示。

菌群	检测项目及原理
大肠菌群（有β-半乳糖苷酶）	ONPG检测：β-半乳糖苷酶水解无色的ONPG为黄色物质
肠杆菌群（降解色氨酸为吲哚）	吲哚检测：吲哚可与特定显影剂显为绿色
大肠杆菌（有β-葡糖醛酸酶）	MUG检测：β-葡糖醛酸酶降解MUG为具有荧光的物质

（注：出现上述颜色变化为阳性，未现上述颜色变化为阴性）
结合表中内容分析，若上述检测结果为__________（选择字母代号填写），则可以确定待测菌为大肠杆菌。

A．ONPG检测和吲哚检测为阳性，MUG检测为阴性

B．吲哚检测为阳性，ONPG检测和MUG检测为阴性

C．ONPG检测、MUG检测、吲哚检测均为阴性

D．ONPG检测、MUG检测、吲哚检测均为阳性

8 . 某研究小组从树林中多年落叶形成的腐殖土壤中分离纤维素分解菌并测定其含量，对土样进行稀释的流程如下图所示。摇匀D试管，从D试管中取0.1mL菌液进行接种，在适宜条件下培养一段时间，测得平板中的平均菌落数为34。下列有关说法正确的是（       ）

A．所用的培养基为选择培养基，成分包含琼脂、水和纤维素

B．每克土样中纤维素分解菌的数量至少是3.4×106个

C．采土工具、接种工具、培养基和培养皿可采用干热灭菌法灭菌

D．还需设置一个未接种的空白培养基同时培养，以检验灭菌是否彻底

9 . 某同学从植物中提取了W物质，并研究其抑菌效果。在平板中央处打孔后加入提取物W，测量抑菌圈的大小和计算抑菌圈平均增幅速率，实验方法和结果如图所示。据图分析下列说法正确的是（　　）

A．将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混匀并倒平板可得到实验菌平板

B．在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，目的是防止微生物污染平板

C．抑菌圈直径的大小与菌体浓度、提取物W的浓度和预扩散时间密切相关

D．提取物W在培养基中扩散，加入提取物W后的2h可获得最佳抑菌效果

10 . 为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A所示的实验。回答下列问题：
   
(1)步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是__________。配制好的培养基通常可以使用高压蒸汽灭菌法灭菌，在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有__________（答出1点即可）。
(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是__________；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________。
(3)在进行实验时，甲同学从对应10⁶倍稀释的培养基中筛选出大约200个菌落，但是其他 同学在同样稀释度下只筛选出大约90个菌落，若甲同学的结果有问题，则可能的原因是__________、__________（答出两项即可）。
(4)步骤⑤为了提高营养物质利用率，可采取的措施是：__________。
(5)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是___________。