1 . 黄曲霉毒素是由黄曲霉产生的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性。科研人员用黄曲霉毒素B（AFB1）的结构类似物——豆香素（C₉H₆O₂）筛选出能高效降解AFB1的菌株，实验过程如下图中的①—④。已知菌体对有机物的降解途径有胞外分泌物降解和菌体吸附降解两种。对降解菌的培养液进行离心，发现上清液中AFB1的残留率明显低于菌悬液中的残留率。检测发现上清液中含有蛋白质K，为验证蛋白质K是降解AFB1的有效成分，进行了实验⑤：在A中加入水解蛋白质K的酶、B中加等量的蒸馏水，充分反应后在两试管中均加入等量的豆香素（C₉H₆O₂）。下列说法错误的是（       ）

       

A．1号培养基属于选择性培养基，通常需要提前在121℃下进行高压蒸汽灭菌

B．步骤③使用稀释涂布平板法，目的是筛选出能降解豆香素的单菌落

C．实验⑤的结果是A试管中豆香素含量减少，B试管中豆香素含量基本不变

D．蛋白质K属于降解菌产生的胞外分泌物，可以分解培养液中的AFB1

2 . 自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供_____________和维生素等。
(2)按照要求配制培养基后，需要立即进行灭菌，常用的灭菌方法为___________，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是______________。
(3)下面的图1和图2是纯化培养该细菌菌种的结果图，其中图1对应的接种方法是__________，用该方法计算得到活菌数，往往比实际值___________（填“偏低”或“偏高”），原因是___________。

(4)不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。同时，为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板计数，本实验中，我们可以每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目____________时的记录作为结果。
(5)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明_____________。

(6)制作果酒和果醋利用的微生物分别是______________和______________，后者可在O₂充足、缺少糖源时，直接将______________转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸。

3 . 双层平板法是对噬菌体进行计数的常用方法。具体做法是：在无菌培养皿中倒入琼脂含量为2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量为1%的培养基熔化并冷却至 45~48℃，然后加入敏感指示菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板(见下图)。培养一段时间后，在双层培养基的上层会出现透亮的无菌圆形空斑——噬菌斑，下列有关说法正确的是（       ）

A．实验用到的培养基和培养皿常用干热法进行灭菌

B．若利用双层平板法对 T2噬菌体进行计数，可选用农杆菌作敏感指示菌

C．上层平板上出现的透亮无菌圆形空斑是噬菌体单独在培养基上繁殖形成的噬菌斑

D．倒上层平板时需将培养基冷却至45~48℃时进行接种，目的是防止培养基温度过高引起敏感指示菌和待测噬菌体死亡

4 . 酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了以下实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，随培养时间的延长，乙、丙、丁培养基均出现浑浊现象。下列说法错误的是（　　）

A．葡萄酒发酵过程中，缺氧、酸性环境、酵母菌产生的酒精等可抑制杂菌的繁殖

B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109个/L，此数值可能低于实际的活菌数

C．对玻璃器皿、接种用具可采用干热灭菌，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌

D．由图Ⅱ可知，乙、丙、丁培养基浑浊的原因是培养基灭菌不彻底，丁组酵母菌产酒精能力比乙强

5 . Leber遗传性视神经病是一种严重的遗传病，患者线粒体内的ND4基因发生突变，患病基因由母亲传给孩子。目前常用“三亲婴儿”的方法帮助女性患者生下健康婴儿。“三亲婴儿”需取志愿者的去核卵细胞作为细胞质的来源，构建健康受精卵的流程简图如下。回答下列问题：

(1)“三亲婴儿”的诞生需依次用到核移植、____、胚胎体外培养和____等技术，属于有性生殖。该过程不能直接用女方的体细胞作为核供体的原因是____。
(2)某研究小组欲克隆ND4基因并研究其表达的蛋白，选用了下图所示的质粒进行实验。

①据图分析，利用PCR扩增ND4基因时，应当挑选的引物是____；若已知其中的一种引物，能否依据已知的引物碱基序列设计出另一种引物?____，理由是____。为构建重组质粒，据图判断，需通过设计引物使PCR产物的两端带有质粒上____限制酶的酶切位点，
②获得重组质粒后，可将其导入经____处理过的大肠杆菌。用____培养基对含ND4基因的大肠杆菌进行扩大培养，合成ND4蛋白。已知ND4蛋白为胞内蛋白，若要提取ND4蛋白，需在扩大培养结束后，采用____等方法分离出菌体，并进一步破碎细胞以分离提纯ND4蛋白。
③实验完成后，剩余细菌、使用过的培养基等均需经____处理再统一废弃，原因是____。

6 . 土壤中大部分的磷难以被植物利用（无效磷），为筛选出能够将无效磷转化为植物易利用的磷（速效磷）的微生物，科研人员进行了如图1的实验，并分离出了两种解磷菌（B3-5-6、M-3-01）分别接种于含有相同磷矿粉的培养液中，测定培养液中速效磷含量变化如图2所示。回答下列问题：

   

(1)按照物理性质划分，培养基①为______________培养基，图1中接种方法是_____________，涂布器需要进行__________灭菌，以保证实验过程中不会被污染；若用该接种方法对微生物进行计数，一般结果会比实际的活菌数_________（填“多”或“少”）。
(2)若以无效磷作为培养基①中唯一的营养物质，______________ （填“能”或“不能”）筛选出解磷菌，原因是______________；培养基②的作用是______________。
(3)若想要在短时间内将土壤中的无效磷转化为有效磷，最好选用图2中解磷菌_______对土壤进行处理。

7 . 下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。

成分	蛋白胨	乳糖	蔗糖	K2HPO4	指示剂	琼脂
含量（g）	10．0	5．0	5．0	2．0	0．2	12．0
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL

(1)若根据用途划分，该培养基属于_____________培养基。制备固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、_______________；培养基中蛋白胨的作用主要是为微生物生长提供_______________等营养物质。
(2)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行_______________；操作者的双手需要进行清洗和_______________。
(3)图中图 1 和图 2 是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：_______________和_______________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的_______________。

(4)以下过程中所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有          。

A．制作果酒	B．由果酒制作果醋
C．制作泡菜	D．制作腐乳

8 . 我们在生产、生活中产生的大量垃圾，正在严重侵蚀我们的生存环境，垃圾分类处理是避免“垃圾围城”的有效途径。利用微生物将垃圾中的有机物分解是常用的方法。请回答下列问题:
(1)每种微生物的利用，都离不开微生物的分离、提纯和培育。实验室筛选微生物需人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻断其它微生物的生长，能达此目的的培养基称为_________。在实验中，为了获得纯净的某种微生物，关键是_________，主要包括消毒和灭菌，其中对培养基常采用的方法是__________。
(2)我国科学院研究团队首次发现了能够高效降解聚氨酯（PU）塑料的新菌种，并把该菌种命名为塔宾曲霉菌，若要筛选该菌种，则需要使用以_________为唯一碳源的选择培养基。若要测定样品溶液中该菌种的数目，可将100mL含该菌种的样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为190个，且空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中含有塔宾曲霉菌_________个。
(3)若对菌株的纤维素降解活性进行鉴别，需将分离纯化得到的各菌种，接种于加入刚果红的培养基中，通过比较菌落的__________，来判断降解活性的高低。
(4)研究发现圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌（均为需氧型）处理厨余垃圾废液效果好。为探究圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌处理某厨余垃圾废液的最佳接种量比，研究者做了如下实验；①将两种菌液进行不同配比分组处理如下表所示：

编号	A	B	C	D
圆褐固氮菌：芽孢杆菌	1：0	0：1	1：1	2：1

将上表菌液分别接种于50mL某厨余垃圾废液中进行振荡培养。
本实验的对照组应在50mL厨余垃圾废液中接种__________。
②培养3天后测定活菌数：取一定量菌液进行_________，然后分别取0.1mL的菌液采用涂布平板法接种于完全培养基中培养。依据菌落形态对两种菌进行区分计数。
③实验结果如下图：

由图可知处理该厨余垃圾，两菌种的最佳接种量比例为_________，判断依据是_________.

10 . 染料废水是一种难处理的工业废水。研究发现，活性污泥中能筛选出对蓝色的2BLN染料废水具有高效脱色能力的菌株，它们通过降解具有生物毒性的分散蓝2BLN而降低废水危害，图1表示目标菌株GN-1的筛选和脱色试验流程，图2表示GN-1菌株接种量对脱色效果影响的实验结果。

   

(1)向含分散蓝2BLN的LB固体培养基中进行接种后，培养结果如图1所示，在菌落①至④中，目标菌株GN-1应从菌落_____中挑取。
(2)无菌技术是防止纯种微生物被其他微生物污染，且自身也不污染操作环境的技术。以下过程需要使用无菌技术的是_____。

A．接种

B．富集培养

C．分离、纯化

(3)根据图2所示结果，综合考虑脱色效果（6d脱色率达90%以上为合格）和经济效益，GN-1菌株的最佳接种量为_____%。
(4)随着染料初始浓度的持续增加，GN-1菌株的脱色能力可能会产生变化，这是由于高浓度的染料对GN-1菌株起了_____作用，脱色能力_____（填“强”或“弱”）的菌株被选择出来。