1 . 将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱海水稻新品种。下图PCR扩增OsMYB56时需要添加引物，应选用的引物组合为（       ）

   

A．5'-CTTCGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'

B．5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TAAGTTGTCT-3'

C．5'-ATTCAACAGA-3'和5'-ATCATCCAAG-3'

D．5'-ATTCAACAGA-3'和5'-GAACCTACTA-3

2 . 微生物吸附是重金属废水的处理方法之一。金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白，具有吸附重金属的作用。科研人员将枣树的MT基因导入大肠杆菌构建工程菌。请回答下列问题。

(1)从枣树相关细胞中提取____，通过逆转录获得枣树的MTcDNA，然后根据枣树MTcDNA的核苷酸序列设计了相应的引物（图1甲），以通过PCR扩增MT基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为____，这些引物的长度一般包含15～23个碱基，过短会导致____差。若1个MTcDNA扩增n次，则总共消耗引物____个。
(2)本实验中，PCR所用的____酶扩增出的MT基因，其末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P将MT基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图1乙所示。

①选用____酶将载体P切开，再用____酶将MT基因与载体P相连，构成重组载体P'。

②选用____酶的组合对载体P'和载体E进行酶切，将切下的MT基因和载体E用酶连接，将得到的混合物导入到用____离子处理的大肠杆菌，然后筛出MT工程菌。

(3)MT基因在工程菌的表达量如图2所示，结果仍无法说明已经成功构建能较强吸附废水中重金属的MT工程菌，以下叙述中能支持该观点的是____。

①尚未对MT工程菌合成的MT蛋白的活性进行测定

②尚未对MT工程菌吸附重金属的能力进行鉴定

③尚未在个体生物学水平进行抗原-抗体杂交

④尚未对MT基因进行碱基序列的测定和比较

3 . 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（　　）

A．上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对

B．设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸

C．融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物

D．若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物

4 . 用A和B两种限制酶同时和分别处理同一DNA片段，限制酶对应切点一定能切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1和图2所示。下列叙述错误的是（　　）

A．用A和B两种限制酶同时处理图中同一DNA片段得到6个游离的磷酸基团

B．图1中X代表的碱基对数为4500，Y是限制酶A的酶切位点

C．电泳凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子大小和构象等有关

D．设计引物从图1中完整DNA片段中扩增出完整X，至少需要3次PCR

5 . 在基因工程中，常用PCR 特异性地快速扩增目的基因。下列叙述正确的是（       ）

A．PCR 的变性是通过解旋酶将 DNA 的两条模板链分开的过程

B．PCR 的复性是目的基因的两条模板链相互结合的过程

C．在 PCR 的延伸过程中，DNA 聚合酶将脱氧核苷酸加到引物的5'端

D．PCR 过程中每循环一次会使目的基因的数目增加一倍

6 . 研究发现实体肿瘤内部通常是缺氧环境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。TAT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在，但在常氧条件下会被蛋白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用将融合蛋白转运进入肿瘤细胞，并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性，分别构建了含TAT-RTA（660bp）和TAT-RTA-ODD（870bp）融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。
(1)可通过PCR技术获取融合基因TAT-RTA，前提是根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是______。已知RTA基因和欲得到的TAT-RTA融合基因的结构如图1所示，TAT基因编码链序列为5'ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA3'，为顺利构建表达载体，需在引物1、2的______端分别加入______酶切位点；要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，则引物1的前12个碱基序列为______。
A、5'GGATCCATGAGC3'B．B、5'GGATCCATCTTC3'C．C、5'GGATCCTACTCG3'D．D、5'CTCGAGATGAGC3'

(2)载体的部分结构如图2所示，His标签由连续的6个组氨酸构成，可用于对重组融合蛋白进行分离纯化。将PCR得到的TAT-RTA融合基因和载体双酶切后，再用______酶连接。但在研究时发现融合蛋白中没有His标签蛋白，据图分析原因很可能是______；为使His标签正常表达，可在A碱基左右两侧各插入1个碱基，正常情况下最多可对应______种密码子。

8 . 某育种小组利用普通水稻培育抗盐碱的“海水稻”，其过程如下：①利用PCR定点突变技术（通过设计含有非特异性碱基配对的引物，再通过PCR将突变位点引入产物中，过程如图1）向抗盐碱基因中插入一小段碱基序列，获得抗盐碱能力更强的突变基因；②将目的基因导入水稻细胞、培育海水稻（过程如图2）。回答下列问题：

(1)图1中引物2与3___________（填“相同”或“不相同”），合成的DNA分子经混合、变性、杂交后选取通过引物2和3延伸形成的两条链杂交在一起的片段，它们能杂交在一起的原因是______；该片段在___________酶的作用下延伸形成一个完整的DNA片段，该酶需要___________激活。最后利用引物___________进行PCR扩增得到大量含有突变位点的DNA片段。
(2)图2中在构建重组质粒时最好选用___________两种限制酶切割目的基因，用两种限制酶切割目的基因和质粒的优点是___________。欲从个体水平上检测转基因水稻是否成功，方法是______。

9 . In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常为15～20bp），然后用In-Fusion酶（能识别双链线性化DNA片段5'→3末端任意16个碱基，使其降解）处理即可实现无缝连接。其操作步骤如下图。请回答下列问题：
   
(1)为获得线性化质粒，除了图示利用PCR方法外，还可利用____方法实现。
(2)热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除A以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。与常规PCR相比，这样做的目的是可减少反应起始时____形成的产物。
(3)图中，同源序列1、2中的碱基序列____（选填“相同”“不同”）。这样设计的目的是____，还能防止线性化质粒或目的基因自身环化。
(4)据图分析，引物A或引物B要依据____序列进行设计。过程②经过____轮循环就可能首次得到符合要求的目的基因片段。
(5)含同源序列的线性化质粒与目的基因混合后，In-Fusion酶的作用可能是处理线性化质粒与目的基因的同源序列，形成____，然后降温使其发生____，进而在DNA聚合酶及____酶的作用下完成质粒的环化，形成重组质粒。
(6)与传统构建重组质粒的方法相比，In-Fusion术的优势之一是____。

10 . 1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠，下图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。回答下列问题：
             
(1)质粒上ori序列的碱基特点是______比值较高，图示胰岛素基因的转录以______链作为模板。
(2)在设计PCR引物时最好在引物的______端添加限制酶______的识别序列，PCR反应体系中引物的延伸需要TaqDNA聚合酶，此酶需要______（离子）的激活。
(3)生产过程中目的基因是利用胰岛B细胞中的mRNA反转录得到的胰岛素基因，不直接使用细胞中酶切获得的胰岛素基因的原因是________________________。
(4)科学家运用大引物PCR定点突变技术对胰岛素第28位氨基酸实现了替换，获得了速效胰岛素类似物产品。相关原理如图所示。
①第一次PCR至少需要______个循环才能获得相应的大引物模板，第二次PCR应选用大引物两条链中的______（填“A”或“B”），若第二次PCR计划循环n次，至少需要大引物______个。
②Ʋ半乳糖苷酶可以分解无色的Xgal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了______的培养基上，若观察到菌落呈现白色，则表明________________________。