1 . 某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP，表达产物能发出绿色荧光）整合到野生型小鼠Gata3基因的一端，该过程未破坏Gata3基因，以此研究小鼠Gata3基因的表达情况，结果如图甲所示。回答下列问题：

   

(1)用图甲中重组的基因构建基因表达载体时，载体可以不需要额外的标记基因，原因是_____。若用质粒构建基因表达载体，则除了图甲中标出的结构，质粒还需要具备的结构有_____（答出2点）。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的_____，引物的作用是_____。构建重组质粒后，为了确定GFP是否成功整合到质粒中，需要进行PCR检测，若仅用一对引物，则最好选择图甲中的_____。
(3)科研人员实验培育得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，让这两只小鼠交配来获得Gata3—GFP基因纯合的小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。图中个体_____（填数字）是Gata3—GFP基因纯合的小鼠。

   

2 . 某实验小组同学利用PCR技术扩增β-淀粉酶基因后，进行琼脂糖凝胶电泳检测时未出现扩增条带，其原因一般不包括（       ）

A．模板DNA溶液中含有酶抑制剂	B．TaqDNA聚合酶失活
C．引物特异性不强	D．变性温度过低

3 . 2019年末，一场突如其来的新冠肺炎疫情打乱了人们正常的生活节奏。2020年1月6日，中国疾控中心分离出第一株新冠病毒；1月7日完成对该病毒的全部基因组测序；1月24日首个针对新冠病毒的核酸检测试剂盒通过审核，为新冠肺炎的诊断提供了有力的保障。新冠病毒是一种单股正链RNA病毒，外面包裹着衣壳蛋白和囊膜，囊膜上存在棘突蛋白，能特异性识别细胞膜上的ACE2受体从而感染细胞。新冠病毒进入细胞后，首先以正链RNA为模板翻译出RNA聚合酶，然后在该酶的作用下合成负链RNA，再以负链RNA为模板合成大量的正链RNA或结构蛋白mRNA。
(1)核酸检测多数采用实时荧光RT﹣PCR法。由于新冠病毒的遗传物质为RNA，在进行PCR之前，应该将样本中的病毒RNA提取出来，在__________酶的作用下合成互补的DNA单链（该过程称为RT）。PCR过程需要加入引物，原因是______________________________。2020年1月24日，中国疾控中心公布了针对新冠病毒核酸不同序列设计的引物，其中针对衣壳蛋白基因的一段引物Ⅰ为GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT，能否依据此序列设计出另一段引物Ⅱ的序列？__________，理由是______________________________。与传统PCR相比，荧光RT﹣PCR过程中加入了荧光探针，可通过荧光信号对PCR进程实时检测，PCR产物越多，荧光越强。如果待测样本中没有检测出荧光，初步断定样本中__________（填“含有”或“不含有”）新冠病毒。
(2)由于核酸检测比较费时费力，现已开发出多款针对新冠病毒的抗原或抗体检测试剂盒，可在更短时间内得出检测结果。其中一种试剂盒的生产思路是：将新冠病毒的棘突蛋白基因整合到载体上，利用基因工程获得大量的棘突蛋白，并做成检测试剂盒，这种试剂盒是用来检测_____________。
(3)在对新冠病毒检测的过程中，偶尔会出现核酸检测阳性而抗体检测阴性的现象，假如这两种试剂盒的质量及检测方法都没有问题，试从免疫角度分析造成这种现象可能的原因__________________________________________________。
(4)2020年2月15日，法维拉韦正式获得国家药监局批准上市，成为我国第一个针对新冠肺炎具有潜在疗效的药物，该药物能够专一抑制新冠病毒RNA聚合酶，由于人体细胞内也存在RNA聚合酶，有人担心该药物的安全性，请分析他的担心有无道理？__________，理由是____________________________________________________________。

4 . 屠呦呦因发现抗疟药青蒿素而获得诺贝尔奖。某课题组为得到青蒿素产量高的新品系，让青 蒿素合成过程的某一关键酶基因 fps 在野生青蒿素中过量表达，其过程图如下：

回答下列问题：
（1）图中酶 2 是_____________ 。利用 PCR 技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板 DNA 解链为单链 的条件是加热至 90-95℃，目的是破坏了 DNA 分子中的_____________ 键。在构建重组 Ti 质粒的过程 中，需将目的基因插入到 Ti 质粒的_______________________ 中。获得的 cDNA 与青蒿细胞中该基因 碱基序列__________________ （填相同或不同）。
（2）以 mRNA 为材料可以获得 cDNA，其原理是_____。
（3）检验目的基因是否整合到青蒿素基因组，可以将放射性同位素标记的__________做成分子探针与青蒿素基因组 DNA 杂交。理论上，与野生型相比，该探针与转 基因青蒿素 DNA 形成的杂交带的量_____（填较多或较少）。
（4）据图分析，农杆菌的作用是_____。判断该课题组的研究目的是否达到，必须检测转基因青蒿素植株中的_________。

5 . 聚合酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增 DNA 片段的技术。下列有关 PCR 过程的叙述中不正确 的是（       ）

A．PCR 的原理是 DNA 双链复制

B．PCR 技术要求对扩增的目的基因序列完全已知

C．延伸过程中需要 DNA 聚合酶、ATP、四种脱氧核苷酸

D．DNA 的合成方向总是从子链的 5′端→3′端方向延伸