3 . 柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘贮藏期常见的病害之一。抗菌肽是一种抑菌活性强、无环境污染的生物多肽，目前已用于多种农业病菌的防治。研究人员研究了抗菌肽对白地霉的抑菌效果，并且对其作用机制进行了探究。回答下列问题：
(1)利用基因工程合成抗菌肽时，基本流程为：克隆目的基因→导入枯草杆菌→筛选菌种→诱导抗菌肽表达→分离纯化→功能研究。利用PCR技术克隆目的基因的过程中，将温度冷却至55～60℃的目的是____。
(2)白地霉从柑橘中获得其生长繁殖所需的水、无机盐、____和____等营养物质。
(3)为研究抗菌肽对白地霉的抑菌效果，现用无菌打孔器在果实相同部位打孔，每个打孔处接种相同体积的处理液，比较15天后的病斑直径。各组处理及结果见表。

组别	1	2	3	4	5
接种处理方式	接种一定体积的病原菌孢子悬浮液	抗菌肽溶液与病原菌孢子悬浮液混合后直接接种	先加入抗菌肽溶液，2h后接种病原菌孢子悬浮液	X	抗菌肽溶液与病原菌孢子悬浮液混合，培养2h后接种
15天后病斑直径/mm	41.3	13.9	29.3	28.7	11.2

表中数据表明抗菌肽对白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果与抗菌肽、病原菌孢子悬浮液接种顺序有关，表中X为____。与第2组相比，第5组抑菌效果更好的可能原因是____。
(4)一般情况下，电导率和离子浓度呈正相关，通过测量溶液电导率可以反映出溶液中离子浓度的大小。研究人员将白地霉孢子与抗菌肽在无菌水中混合，测定电导率，培养一段时间后，再次测定电导率，结果发现电导率明显升高，据此推测抗菌肽抑制白地霉孢子的作用机制可能是____。

6 . 遗传学技术在突变检出领域中有着重要的贡献与作用。
(1)Muller-5技术常用于果蝇X染色体上突变的检出，已知果蝇棒眼对圆眼为显性，红眼对杏色眼为显性，且控制这两对相对性状的基因皆位于X染色体上。下图为利用Muller-5品系雌果蝇检测基因突变的过程图。不考虑交叉互换。

为检测出果蝇X染色体上是否发生了突变，F₁代需进行_____（填“自由交配”“自交”或“单对交配”）获得F₂代。现有某纯合致死突变基因被检出，则在F₂代中，最好选取性状为_____果蝇进一步研究该突变基因的作用。
(2)PCR扩增法可用于基因点突变的检出，其基本原理是，如果引物的3'端碱基与模板碱基不互补，则用耐热DNA聚合酶无法延伸。已知某变异果蝇品种在Badh2基因的EXON7区出现了一个8bp的碱基对缺失和三个位置的碱基替换（其他序列与野生型一致），为了检测该变异，现设计以下四条引物进行PCR（如图所示）。

除了题干中提到的引物、耐热DNA聚合酶和DNA模板外，PCR反应体系中还需添加_____。若在8bp缺失型的DNA样本中同时加入四条引物进行PCR扩增，实验结束后应使用_____技术对产物进行检测，且理论上可以得到_____种序列不同的DNA片段。
(3)在检出突变基因后，科学家往往利用基因工程的方式获得该基因对应的蛋白质并进行下一步研究。如图为构建重组质粒的流程示意图，在该过程中，应使用_____对质粒S进行酶切。将重组质粒通过转化导入亮氨酸合成缺陷细菌后，应使用_____（填“添加亮氨酸”或“不添加亮氨酸”）的选择培养基，同时挑取_____（填“有绿色荧光”或“没有绿色荧光”）的菌落进行进一步鉴定。

8 . 某种小麦的雄性不育由核基因M控制，其整个花药在发育早期停止发育进程，因此其雄性不育比较彻底。研究发现所有的雄性不育植株都特异性地携带了TRIM序列，且M及其等位基因的编码区相同；为研究该序列与雄性不育之间的关系，科研人员在野生型小麦中获得了M等位基因的启动子并利用Ti质粒构建表达载体，表达载体T-DNA部分结构如图1所示，GFP表达后会发出绿色荧光。将不同表达载体转入幼胚获得转基因小麦，分别对核不育小麦、野生型小麦及转基因小麦的表型和M基因表达情况进行检测，部分结果如表：

组别	实验材料	载体组成I、Ⅱ	植株表型	M基因表达情况
第一组	核不育小表	无	雄性不育	eg
第二组	野生型小麦	无	可育	fg
第三组	野生型小麦	ad	死亡
第四组	野生型小麦	①____	②____	eg

注：a．通用的强启动子b．M等位基因启动子c．插入TRIM序列的M等位基因启动子d．M编码区e．仅在花药发育早期表达f．在花药发育各时期均不表达g．在根、茎、叶、雌蕊中均不表达
(1)表中①处应分别选择____（填表注中字母序号），②处植株表型是____，结果发现在存活的转基因小麦花药中均能检测到绿色荧光。根据实验结果推测导致雄性不育的原因是____。
(2)实验过程中____（填“需要”或“不需要”）设置将bd导入野生型小麦的实验组，理由是____。
(3)科研人员为检测（1）中T-DNA插入受体细胞染色体中的位置，利用反向PCR技术对插入位点两侧序列进行了分析，过程如图2。已知T-DNA的一条单链序列为：5-GCAATGCGTAGCCTCT……AACTATGCGCTCATGA-3（虚线处省略了部分核苷酸序列）。应选下列引物中的____（填序号）用于步骤Ⅲ，引物的作用是____。
A．5'-CGCGAGTACT-3'     B．5'-GCGCTCATGA-3'
C．5'-CGTAGCCTCT-3'     D．5'-TACGCATTGC-3'

9 . 谷氨酸脱羧酶能以谷氨酸钠为前体产生γ-氨基丁酸，蛋白质复合物SNOI-SNZI能提高谷氨酸脱羧酶的活性。将谷氨酸脱羧酶基因gadB(1401bp)和基因SNOI(675bp) 、SNZI (894bp) 导入大肠杆菌， 以探究该复合物对其生产能力的影响。请回答下列问题：
(1)构建基因表达载体前，需先通过PCR 分别扩增目的基因片段，扩增反应体系应添加引物、模板、_____、缓冲液等，添加引物量不宜过多，原因主要是_____。
(2)表1 是相关基因扩增所用引物的部分序列，表2是多种限制酶的识别序列和切割位点。构建重组质粒时，先将gadB 和 pTrc99a质粒(4176bp)分别用限制酶_____进行双酶切， 并连接得到重组质粒 pTrc99a-gadB。将基因 SNOI 和基因SNZI 分别连接到重组质粒 pTrc99a-gadB 上时， 均需用_____(填限制酶)和DNA 连接酶处理，最终得到重组质粒 pTrc99a-gadB-SNOI-SNZI，如图1所示。

表1
基因	引物1部分序列(5'→3')	引物2部分序列(5'→3')
gadB	TCGCCCATGGCCATGATAAG	CTTCGGTACCTTAGGTATGT
SNZ1	CTAAGGATCCGAAGGAGATA	CCTTCTCTAGATTACCACCC
SNO1	TCGCGGTACCAAGGAGATAT	CTTCGGATCCTTAATTAGAA

表2
限制酶	识别序列 和酶切位点
Xba Ⅰ	T↓CTAGA
Kpn Ⅰ	GGTAC↓C
Nco Ⅰ	C↓CATGG
BamH Ⅰ	G↓GATCC

(3)采用电泳的方法对 pTrc99a 质粒、重组质粒 pTrc99a-gadB 和重组质粒 pTrc99a-gadB-SNO1-SNZI 进行鉴定。若构建成功， 用限制酶KpnI单酶切后电泳获得图2-A，则可推测泳道2是_____的电泳结果；用限制酶_____酶切后电泳可获得图2-B泳道3 结果。

   

(4)将质粒 pTrc99a、pTrc99a-gadB 和 pTrc99a-gadB-SNOI-SNZI 分别转化至处于_____的大肠杆菌细胞中，分别获得菌株R₁、R₂、R₃，培养后分别接种于含一定量_____的发酵培养基中，一段时间后测定γ-氨基丁酸含量。结果如图3所示。结果表明，与导入谷氨酸脱羧酶基因的菌株比，SNOI-SNZI基因的导入_____了其生产γ-氨基丁酸的能力，从能量代谢的角度分析，其原因有_____。